一种靶向肿瘤细胞的Aptamer-CD3制造技术

本发明专利技术公开了一种靶向肿瘤细胞的Aptamer‑CD3

Aptamer-cd3 targeting tumor cells

【技术实现步骤摘要】
一种靶向肿瘤细胞的Aptamer-CD3+T细胞及其构建方法与应用
本专利技术涉及肿瘤免疫治疗
，提供了一种通过糖代谢标记和生物正交反应制备Aptamer-CD3+T细胞的新技术的方法，及制备的该Aptamer-CD3+T在肿瘤免疫治疗领域的应用。
技术介绍
嵌合抗原受体（chimericantigenreceptor，CAR）技术是由识别肿瘤抗原单链抗体与T细胞的活化序列（信号传导分子的胞内段）相融合，利用单链抗体与肿瘤抗原高亲和力结合，既靶向杀伤肿瘤，又能克服肿瘤细胞下调MHC分子表达、降低抗原递呈的免疫逃逸作用。CAR-T细胞免疫疗法尽管在治疗血液肿瘤中有巨大的希望，但是同时也存在较大的副作用。绝大多数的CAR-T治疗技术使用病毒（如慢病毒或逆转录病毒作为治疗载体）改造T细胞，其中慢病毒或逆转录病毒整合入机体细胞基因组存在潜在的致病及致癌风险。多种肿瘤缺乏可用于制备CAR-T的scFv，严重限制了CAR-T免疫治疗技术的发展。CAR-T细胞免疫疗法带来一个巨大的临床风险就是细胞因子风暴。当CAR-T细胞快速杀死癌细胞时，产生的大量细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种靶向肿瘤细胞的Aptamer-CD3

【技术特征摘要】
20190830 CN 20191081678481.一种靶向肿瘤细胞的Aptamer-CD3+T细胞，其特征在于，通过以下步骤制得：
（1）分离获得CD3+T细胞，用含有激活细胞用抗体和ManNAz的培养基经体外激活扩大培养；
（2）通过糖代谢途径在CD3+T细胞表面表达叠氮键获得糖处理后的激活的CD3+T细胞，再将人工合成的DBCO化学分子修饰的核酸适配体，通过点击化学手段，共价偶联于糖处理后的激活的CD3+T细胞表面，获得Aptamer-CD3+T细胞。


2.根据权利要求1所述的靶向肿瘤细胞的Aptamer-CD3+T细胞，其特征在于，通过以下步骤制得：
（1）人外周血单个核细胞或小鼠脾脏细胞制备；
（2）磁珠分选CD3+T细胞；
（3）CD3+T细胞的培养、激活：
anti-CD3、anti-CD28以及白细胞介素-2激活后的CD3+T细胞与叠氮修饰的甘露糖胺共培养，在CD3+T细胞表面表达叠氮基，获得糖处理后的激活的CD3+T细胞；
（4）Aptamer-CD3+T（S4F-CD3+T）细胞制备：
将人工合成的DBCO修饰的核酸适配体Aptamer（S4F）与步骤（3）糖处理后的激活的CD3+T细胞共培养，获得所述S4F-CD3+T，其中，
DBCO末端修饰的核酸适配体（S4F）的核苷酸序列如下：
DBCO-GATCTCTCTCTGCCCTAAGTCCGCACCCGTGCTTCCCTGT。


3.根据权利要求1所述的靶向肿瘤细胞的Aptame...

【专利技术属性】
技术研发人员：章晓联，刘传刚，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42