体外大量扩增恶性肿瘤腹水浸润的淋巴细胞的方法技术

本发明专利技术提出了一种培养基，所述培养基用于体外扩增恶性肿瘤腹水来源的免疫细胞。该培养基包括：基础培养基以及促增殖因子，所述基础培养基为RPMI‑1640，所述促增殖因子由重组人IL‑2以及Dynabeads人T细胞激活因子CD3/CD28组成。发明专利技术人发现，在腹水免疫细胞的体外增殖过程中，单独使用rhIL‑2比联合其他的细胞因子在促进腹水免疫细胞的体外增殖方面具有显著优势。根据本发明专利技术实施例的培养基用于腹水来源的免疫细胞的体外扩增，可短时间内大量获得具有免疫杀伤效果的免疫细胞。

【技术实现步骤摘要】
体外大量扩增恶性肿瘤腹水浸润的淋巴细胞的方法
本专利技术涉及生物
，具体地，本专利技术涉及体外大量扩增恶性肿瘤腹水浸润的淋巴细胞的方法，更具体地，本专利技术涉及培养基以及淋巴细胞的体外扩增方法。
技术介绍
免疫治疗是新兴的一种肿瘤治疗方式，已经被列为继手术、放疗、化疗后的第四种治疗方式，在肿瘤的综合治疗中逐渐发挥重要作用。2010年，美国FDA批准世界上第一个细胞免疫治疗产品Provenge上市，充分显示出细胞免疫治疗在肿瘤治疗中的价值。目前常用的肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltratinglymphocyte，TIL)是存在于肿瘤间质内的以淋巴细胞为主的异质性淋巴细胞群体，大多聚集在肿瘤周围或其间质呈套状围绕癌巢。其主要成分是存在于肿瘤间质内的T淋巴细胞，小部分为MHC非限制性的NK细胞，其共同特征为表达T细胞受体(Tcellreceptor，TCR)。TIL来自肿瘤组织区域，可特异识别自体肿瘤，具有特异的MHC限制性溶解肿瘤活性。美国NCI的Rosenberg等首次证实，从实体瘤组织分离的TIL在体外经IL-2激活并本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种培养基，所述培养基用于体外扩增恶性肿瘤腹水来源的免疫细胞，其特征在于，包括：基础培养基以及促增殖因子，所述基础培养基为RPMI-1640，所述促增殖因子由重组人IL-2以及Dynabeads人T细胞激活因子CD3/CD28组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种培养基，所述培养基用于体外扩增恶性肿瘤腹水来源的免疫细胞，其特征在于，包括：基础培养基以及促增殖因子，所述基础培养基为RPMI-1640，所述促增殖因子由重组人IL-2以及Dynabeads人T细胞激活因子CD3/CD28组成。


2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述重组人IL-2在所述培养基中的浓度为45～55U/mL，优选50U/mL。


3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述Dynabeads人T细胞激活因子CD3/CD28在所述培养基中的浓度为20～30μL/mL，优选25μL/mL。


4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述基础培养基进一步包括Hepes，青霉素链霉素，L-谷氨酰胺，非必需氨基酸，丙酮酸钠，人AB血清。


5.根据权利要求4所述的培养基，其特征在于，所述Hepes在所述培养基中的体积分数为2.5％，所述青霉素链霉素在所述培养基中的体积分数为1％，所述L-谷氨酰胺在所述培养基中的体积分数为1％，所述非必需氨基酸在所述培养基中的体积分数为1％，所述丙酮酸钠在所述培养基中的体积分数为1％，所述人AB血清在所述培养基中的体积分数为10％。


6.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基中进一步包括恶性肿瘤患者自体腹水上清，任选地，所述自体腹水上清在所述培养基中的浓度为45～55μL/mL，优选50μL/mL。


7.一种免疫细胞的体外扩增方法，其特征在于，将待扩增免疫细胞在培养基中进行扩增培养，所述待扩增免疫细胞来源于恶性肿瘤腹水，所述培养基如权利要求1～6任一项所限定的。


8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述待扩增免疫细胞在培养基中的初始浓度为0.8～1.2×106/mL，优选1×106/mL。


9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，扩增培养过程中，免疫细胞在所述培养基中的浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：董晨，倪凌，金莉萍，蔡东莉，
申请(专利权)人：清华大学，上海市第一妇婴保健院，
类型：发明
国别省市：北京;11