【技术实现步骤摘要】
一步法核酸提取转化试剂盒及其使用方法
本专利技术属于分子生物
更具体地，涉及一步法核酸提取转化试剂盒及其使用方法。
技术介绍
表观遗传学在肿瘤发生中的作用逐渐受到人们的重视。其主要表现形式有DNA甲基化、组蛋白修饰、基因组印记、母体效应及RNA编等。DNA甲基化是表观遗传学的主要表现形式，是调节基因功能的重要机制，与维持细胞正常功能、遗传印记、基因沉默、生物胚胎发育调节及肿瘤的发生密切相关。DNA甲基化并不影响基因序列，但使基因表达受到一定影响，是转录抑制的主要机制。近年来的大量研究表明，DNA异常甲基化与肿瘤的发生、发展、细胞癌变有着密切的联系。DNA甲基化是将S-腺苷甲硫氨酸(SAM)供给的甲基通过DNA甲基转移酶(DNMTs)作用添加到胞嘧啶(C)的5号碳原子上，胞嘧啶转化为5-甲基化胞嘧啶。DNA发生甲基化的主要位点是在基因启动子的CpG岛。癌症基因组中CpG岛内局部高甲基化话及全局基因组低甲基化现象是肿瘤细胞甲基化水平改变的主要表现。CpG岛局部高甲基化常引起调控细胞周期相关基因等抑癌基因和修复基因...
【技术保护点】
1.一步法核酸提取转化试剂盒，其特征在于，包括如下组分：裂解缓冲液、蛋白酶K、转化剂、DNA保护剂、结合液、脱磺基液、漂洗液、洗脱液和磁珠悬液；/n其中，所述裂解缓冲液成分为0.03-0.06M的SDS、0.01-0.03M的乙二胺四乙酸二钠、0.02-0.04M的尿素、2-4M的盐酸胍、0.05-0.15M的三羟甲基氨基甲烷；/n所述蛋白酶K的浓度为10-30mg/μL；/n所述的磁珠悬液为含浓度40-60mg/ml纳米磁性颗粒的水溶液，具体为超顺四氧化三铁，且颗粒外表有表面修饰有羟基的二氧化硅包被；/n所述洗脱液I成分为8-12mM的Tris-HCl缓冲液，pH8.0；...
【技术特征摘要】
1.一步法核酸提取转化试剂盒，其特征在于，包括如下组分：裂解缓冲液、蛋白酶K、转化剂、DNA保护剂、结合液、脱磺基液、漂洗液、洗脱液和磁珠悬液；
其中，所述裂解缓冲液成分为0.03-0.06M的SDS、0.01-0.03M的乙二胺四乙酸二钠、0.02-0.04M的尿素、2-4M的盐酸胍、0.05-0.15M的三羟甲基氨基甲烷；
所述蛋白酶K的浓度为10-30mg/μL；
所述的磁珠悬液为含浓度40-60mg/ml纳米磁性颗粒的水溶液，具体为超顺四氧化三铁，且颗粒外表有表面修饰有羟基的二氧化硅包被；
所述洗脱液I成分为8-12mM的Tris-HCl缓冲液，pH8.0；
所述转化剂为5-7M的亚硫酸氢钠和0.6-0.9M的亚硫酸氢铵，pH在pH5.0～5.5；
所述DNA保护剂为25-35mM的对苯二酚；
所述结合液为6-8M的盐酸胍；
所述的漂洗液为0.05-0.2M的三羟甲基氨基甲烷和70-75％的无水乙醇，pH7～8；
所述的脱磺基液成分为0.4-0.6M的氢氧化钠和40-50％的无水乙醇；
所述洗脱液II成分为0.8-1.5M的Tris-HCl缓冲液和0.4-0.6MEDTA溶液，pH8.0±0.1。
2.根据权利要求1所述试剂盒，其特征在于，
所述裂解缓冲液成分为0.05M的SDS、0.02M的乙二胺四乙酸二钠、0.03M的尿素、3M的盐酸胍、0.1M的三羟甲基氨基甲烷；
所述蛋白酶K的浓度为20mg/μL；
所述的磁珠悬液为含浓度50mg/ml纳米磁性颗粒的水溶液，具体为超顺四氧化三铁，且颗粒外表有表面修饰有羟基的二氧化硅包被；
所述洗脱液I成分为10mM的Tris-HCl缓冲液，pH8.0；
所述转化剂为6M的亚硫酸氢钠和0.8M的亚硫酸氢铵，pH在pH5.0～5.5；
所述DNA保护剂为30mM的对苯二酚；
所述结合液为7M的盐酸胍；
所述的漂洗液为0.1M的三羟甲基氨基甲烷和70％的无水乙醇，pH7～8；
所述的脱磺基液成分为0.5M的氢氧化钠和40％的无水乙醇；
所述洗脱液II成分为1M的Tris-HCl缓冲液和0.5MEDTA溶液，pH8.0±0.1。
3.根据权利要求1或2所述试剂盒，其特征在于，该试剂盒的适用样本为细胞样本。
4.根据权利要求1-3任一所述试剂盒，其特征在于，其使用方法包括以下步骤：
...
【专利技术属性】
技术研发人员：李菲，葛毅媛，谢龙旭，孔琪，李真，
申请(专利权)人：广东凯普生物科技股份有限公司，广州凯普医药科技有限公司，潮州凯普生物化学有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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