石斛多糖抗癌活性分析方法与应用、及石斛多糖的应用技术

本发明专利技术公开了一种石斛多糖抗癌活性分析方法与应用、及石斛多糖的应用。本发明专利技术的分析方法涉及的石斛多糖具有低、中、高等不同的浓度，癌细胞系包括早、中、晚等不同病理分期的细胞系，评价体系包括石斛多糖对癌细胞增殖、迁移及侵袭三个方面能力的影响；因此本分析方法能够明确判断各病理分期癌细胞对不同药物浓度及不同作用时间的响应，可准确评价石斛多糖对癌细胞进展的影响、指示石斛多糖的作用效果，进而能对石斛多糖的抗癌活性进行明确的分析和研究。此外，由该石斛多糖抗癌活性分析方法进一步明确了此分析方法的应用及石斛多糖的应用。

Analysis method and application of anticancer activity of Dendrobium polysaccharide and its application

【技术实现步骤摘要】
石斛多糖抗癌活性分析方法与应用、及石斛多糖的应用
本专利技术涉及植物多糖的研究及应用
，具体涉及到一种石斛多糖抗癌活性分析方法与应用、及石斛多糖的应用。
技术介绍
石斛属为兰科的第二大属，石斛属的多种植物是我国传统的名贵中药材，其中铁皮石斛、金钗石斛和环草石斛等较为出名。国内外学者对多种石斛属植物进行了深入研究，从中分离鉴定出多种活性成分，如多糖类、生物碱类、甾体类、酚类及挥发油等等，其中主要的活性成分为石斛多糖，其含量是判断多种石斛质量的主要依据。石斛多糖是一种天然的乙酰化多糖，其在免疫调节和抗氧化作用等方面有显著效果，有部分学者也认为石斛多糖在抗肿瘤方面可能具有生物活性和功能。但到目前为止，缺少专门对石斛多糖抗癌活性进行研究的方法和体系，关于石斛多糖抗癌方面的研究报道也较少，尤其是对膀胱癌的治疗作用尚无相关研究报道。另一方面，膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率极高，易复发转移。放化疗等传统疗法已经不能满足膀胱癌临床治疗需求，亟需开发新的替代治疗药物。
技术实现思路
为了对石斛多糖的抗癌活性进行分析和研究，以明确指示石斛多糖的作用效果，本专利技术提供了一种石斛多糖抗癌活性分析方法与应用，以及由此分析方法所得的石斛多糖的应用。本专利技术采用的技术方案如下，一种石斛多糖抗癌活性分析方法，包括如下步骤：步骤1．提取并制备不同浓度的石斛多糖；步骤2．培养正常细胞、不同病理分期癌细胞；步骤3．不同浓度石斛多糖对不同病理分期癌细胞增殖能力影响的实验；步骤4．不同浓度石斛多糖对不同病理分期癌细胞侵袭能力影响的实验；步骤5．不同浓度石斛多糖对不同病理分期癌细胞迁移能力影响的实验；步骤6．对步骤3~5作数据统计及分析。本专利技术的有益效果是：本专利技术的分析方法涉及的石斛多糖具有低、中、高等不同的浓度，癌细胞系包括早、中、晚等不同病理分期的细胞系，评价体系包括石斛多糖对癌细胞增殖、迁移及侵袭三个方面能力的影响；因此本分析方法能够明确判断各病理分期癌细胞对不同药物浓度及不同作用时间的响应，可准确评价石斛多糖对癌细胞进展的影响、指示石斛多糖的作用效果，进而能对石斛多糖的抗癌活性进行明确的分析和研究。优选的：所述步骤1中的石斛多糖来自铁皮石斛、金钗石斛、霍山石斛及鼓槌石斛中的一种或多种。优选的：所述步骤1中的石斛多糖来自金钗石斛。优选的：所述步骤2中的正常细胞为SVHUC-1细胞，不同病理分期癌细胞分别为5637、T24及SW780细胞。上述石斛多糖抗癌活性分析方法可应用在：分析方法的应用一：在评价石斛多糖对膀胱癌的治疗效果中的用途；分析方法的应用二：在利用石斛多糖对膀胱癌治疗时确认给药剂量过程中的用途；分析方法的应用三：在癌细胞迁移动物模型的构建中的用途。由上述石斛多糖抗癌活性分析方法所获得数据可进一步得出：石斛多糖的应用一：在制备免疫佐剂中的用途，该免疫佐剂用于癌细胞迁移动物模型的构建中；石斛多糖的应用二：在制备抑制早期膀胱癌细胞增殖的药物中的用途；石斛多糖的应用三：在制备抑制膀胱癌细胞迁移的药物中的用途。附图说明图1.低浓度石斛多糖对人膀胱癌细胞增殖的影响。图2.中浓度石斛多糖对人膀胱癌细胞增殖的影响。图3.高浓度石斛多糖对人膀胱癌细胞增殖的影响。图4.石斛多糖对人正常膀胱细胞系SVHUC-1迁移的影响。图5.石斛多糖对人正常膀胱细胞系SVHUC-1迁移的影响量化统计。图6.石斛多糖对人早期膀胱癌细胞系5637迁移的影响。图7.石斛多糖对人早期膀胱癌细胞系5637迁移的影响量化统计。图8.石斛多糖对人中期膀胱癌细胞系T24迁移的影响。图9.石斛多糖对人中期膀胱癌细胞系T24迁移的影响量化统计。图10.石斛多糖对人晚期膀胱癌细胞系SW780迁移的影响。图11.石斛多糖对人晚期膀胱癌细胞系SW780迁移的影响量化统计。图12.石斛多糖对人正常膀胱细胞侵袭能力的影响。图13.石斛多糖对人早期膀胱癌细胞侵袭能力的影响。图14.石斛多糖对人中期膀胱癌细胞侵袭能力的影响。图15.石斛多糖对人晚期膀胱癌细胞侵袭能力的影响。图16.石斛多糖影响膀胱癌进展的评价体系及其在膀胱癌治疗中的应用。具体实施方式下面以人体癌细胞系作为具体实施例，结合附图对本专利技术作进一步详细说明。技术方法。细胞培养。人正常膀胱细胞株（SVHUC-1）和膀胱癌细胞株（5637，T24，SW780）均购自中国科学院生物化学与细胞生物学研究所（上海）。其中，SVHUC-1采用F12K培养基培养（Gibco，ThermoFisherScientific，Waltham，MA，USA），5637细胞采用RPMI-1640培养基（Gibco，ThermoFisherScientific，Waltham，MA，USA）培养，T24及SW780细胞采用DMEM培养基培养（Gibco，ThermoFisherScientific，Waltham，MA，USA）。除非特殊说明，培养基中均添加10%FBS（Gibco，ThermoFisherScientific，Waltham，MA，USA），100U/ml链霉素及100U/ml青霉素（HyClone）。细胞在37℃、5%CO2培养箱中培养。本实施例所涉及的膀胱癌细胞系，包括不同病理分期的细胞系。具体的，包括早期人膀胱癌细胞系5637，人中期膀胱癌细胞系T24及人晚期膀胱癌细胞系SW780。早期细胞系可以指示早期膀胱癌对石斛多糖的响应；中期细胞系可以指示中期膀胱癌对石斛多糖的响应；晚期细胞系可以指示晚期膀胱癌对石斛多糖的响应。需要说明的是，所选不同病理分期的细胞系包括但不仅限于这几个细胞系，各病理分期的细胞系还可以是其他细胞系，也可以来源于不同病理分期膀胱癌病人肿瘤病灶的原代细胞，但同样适用于本申请所涉及的处理方法及评价体系。细胞消化及浓度测定。培养正常膀胱细胞SVHUC-1、早期膀胱癌细胞5637、中期膀胱癌细胞T24和晚期膀胱癌细胞SW780至90%以上汇合度。加37℃预热的胰酶消化细胞5-8分钟，用含10%FBS的培养基洗涤细胞以终止消化反应，然后用1×PBS洗涤细胞3次。用3ml培养基重悬细胞，测定及调整细胞浓度。石斛多糖提取及药物处理。石斛多糖可以来自石斛属的多种植物，如铁皮石斛、金钗石斛、霍山石斛及鼓槌石斛等。其中，不同提取试剂得到的石斛多糖，其主要成分可能存在区别，主要体现在种类及含量上的差别，因而可能具有不同的效果。本实施例的石斛多糖提取自金钗石斛。将金钗石斛干燥茎粉碎后过80目筛，依次加入正己烷和95%乙醇各浸泡48小时。过滤去除浸泡液，加去离子水于80℃水浴搅拌提取3次，每次2小时（药材/水=1/20，v/v）。合并提取液，离心收集上清液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种石斛多糖抗癌活性分析方法，其特征在于包括如下步骤：/n步骤1．提取并制备不同浓度的石斛多糖；/n步骤2．培养正常细胞、不同病理分期癌细胞；/n步骤3．不同浓度石斛多糖对不同病理分期癌细胞增殖能力影响的实验；/n步骤4．不同浓度石斛多糖对不同病理分期癌细胞侵袭能力影响的实验；/n步骤5．不同浓度石斛多糖对不同病理分期癌细胞迁移能力影响的实验；/n步骤6．对步骤3~5作数据统计及分析。/n

【技术特征摘要】
1.一种石斛多糖抗癌活性分析方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤1．提取并制备不同浓度的石斛多糖；
步骤2．培养正常细胞、不同病理分期癌细胞；
步骤3．不同浓度石斛多糖对不同病理分期癌细胞增殖能力影响的实验；
步骤4．不同浓度石斛多糖对不同病理分期癌细胞侵袭能力影响的实验；
步骤5．不同浓度石斛多糖对不同病理分期癌细胞迁移能力影响的实验；
步骤6．对步骤3~5作数据统计及分析。


2.根据权利要求1所述的石斛多糖抗癌活性分析方法，其特征在于：所述步骤1中的石斛多糖来自铁皮石斛、金钗石斛、霍山石斛及鼓槌石斛中的一种或多种。


3.根据权利要求2所述的石斛多糖抗癌活性分析方法，其特征在于：所述步骤1中的石斛多糖来自金钗石斛。


4.根据权利要求1所述的石斛多糖抗癌活性分析方法，其特征在于：所述步骤2中的正常细胞为SV...

【专利技术属性】
技术研发人员：王志才，王美娜，陈建兵，赵美丽，张佳莹，
申请(专利权)人：深圳市兰科植物保护研究中心，
类型：发明
国别省市：广东;44