胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法技术

本发明专利技术公开了一种胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法。该纯度检测方法包括以下步骤：将供试品溶液经体积排阻色谱法联合紫外检测法进行检测，即可；体积排阻色谱法中的洗脱液包括流动相A和流动相B；流动相A为含有卤素离子的三氟乙酸水溶液，流动相A的pH值为1.7～2.1；流动相A中，卤素离子的浓度为3～8mM，不包括8mM；流动相B为腈类溶剂；流动相A与流动相B的体积比为35:65～65:35。该纯度检测方法具有分离度好、简单快速、专属性强、准确度高、重复性好和在相对分子质量为3.5kD～48kD范围内线性良好等特点；在含胰蛋白酶及其酶原的原料药合成工艺和制剂工艺中，可用于过程质量控制和终产品质量评价。

Purity detection of trypsin and its proenzyme

【技术实现步骤摘要】
胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法
本专利技术涉及药物分析检测领域，具体涉及一种胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法。
技术介绍
胰蛋白酶及其酶原是胰脏中较为重要的生物活性物质，在胰脏中它们均以酶原的形式存在，其相对分子量在23.8kDa。目前检测胰蛋白酶纯度的方法参照美国药典USP38中收录的反相色谱方法，参照该法进行胰蛋白酶纯度测试时，发现以动物胰脏为原料制备得到的胰蛋白酶中常含有多种不同分子量的杂质，其中部分杂质在反相色谱中的保留时间与主成份相似，无法与主成份进行有效分离。目前，采用体积排阻色谱法对胰蛋白酶及其酶原进行纯度检测的方法尚未见报道。因此，开发一种分离度好，快速，准确，对胰蛋白酶及其酶原进行纯度检测的有效方法，对药物质量控制和终产品质量的评价具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于克服现有技术中采用反相色谱法对胰蛋白酶进行纯度检测的方法无法有效分离胰蛋白酶及其酶原的主成分峰与周围杂质峰，导致检测结果偏高的缺陷，而提供一种胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，该纯度检测方法具有分离度好、简单快速本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：将供试品溶液经体积排阻色谱法联合紫外检测法进行检测，即可；/n所述的体积排阻色谱法中的洗脱液包括流动相A和流动相B；所述的流动相A为含有卤素离子的三氟乙酸水溶液，所述流动相A的pH值为1.7～2.1；所述的流动相A中，所述的卤素离子的浓度为3～8mM，不包括8mM；所述的流动相B为腈类溶剂；所述的流动相A与所述的流动相B的体积比为35:65～65:35。/n

【技术特征摘要】
1.一种胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：将供试品溶液经体积排阻色谱法联合紫外检测法进行检测，即可；
所述的体积排阻色谱法中的洗脱液包括流动相A和流动相B；所述的流动相A为含有卤素离子的三氟乙酸水溶液，所述流动相A的pH值为1.7～2.1；所述的流动相A中，所述的卤素离子的浓度为3～8mM，不包括8mM；所述的流动相B为腈类溶剂；所述的流动相A与所述的流动相B的体积比为35:65～65:35。


2.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，所述的流动相A与所述的流动相B的体积比为51:49～50:50；
和/或，所述的流动相A的pH为1.8～2.0，较佳地为1.9；
和/或，所述的流动相A为含有氯离子的三氟乙酸水溶液；
和/或，所述的卤素离子为氯离子和/或溴离子；
和/或，所述的卤素离子来源于含卤素的盐或酸；
和/或，所述的卤素离子的浓度为3～4mM；
和/或，所述的腈类溶剂为乙腈。


3.如权利要求2所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，当卤素离子为氯离子时，所述的氯离子来源于盐酸、氯化钾和氯化钠中的一种或多种；
当卤素离子为溴离子时，所述的溴离子来源于溴化钾和/或溴化钠。


4.如权利要求1所述的胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法，其特征在于，所述的供试品溶液在进样前进行过滤处理；
和/或，所述的供试品溶液中的溶剂为“pH为1.7～1.9的硫酸水溶液”和/或乙腈；
和/或，所述的供试品溶液中的供试品为含有“胰蛋白酶和/或胰蛋白酶原”的原料药或制剂；
和/或，所述的供试品溶液中供试品的浓度为0.1～1.0mg/mL；
和/或，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：林琳，贾存宇，黄臻辉，
申请(专利权)人：上海上药第一生化药业有限公司，上海紫源制药有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31