抗HPV45L1的单克隆中和抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗体药物技术领域，尤其涉及抗HPV45L1的单克隆中和抗体及其应用。本发明专利技术提供了HPV45的特异性的单克隆中和抗体以及产生该抗体的杂交瘤细胞系，利用其中的一株中和活性效价最高的单克隆中和抗体，采用间接ELISA法、双抗夹心ELISA法、免疫杂交法等，可广泛应用于临床样本中HPV45病毒的感染检测；利用其中的一株中和活性效价最高的单克隆中和抗体，制备成阴道凝胶、阴道清洗液、外用洗液、阴道栓剂、冻干粉、阴道泡腾片等，用于HPV45感染患者的治疗，能有效提高HPV45患者的临床转阴率。本发明专利技术对女性的健康发展和公共卫生防控均具有重要的意义。

Monoclonal neutralizing antibody against hpv45l1 and its application

【技术实现步骤摘要】
抗HPV45L1的单克隆中和抗体及其应用
本专利技术涉及抗体药物
，尤其涉及抗HPV45L1的单克隆中和抗体及其应用。
技术介绍
人类乳头瘤病毒(HumanPapillomavirus，简称HPV)是球形、双链DNA病毒，病毒颗粒直径为55～60nm，核衣壳呈20面体对称，由72个主要衣壳蛋白L1的五聚体及次要衣壳蛋白L2组成。主要侵及人的上皮组织和细胞，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，进而诱发各种良、恶性增生病变。高危型HPV感染与多种恶性肿瘤的发生相关，低危型的HPV感染则引起肛门和生殖器疣。高危型HPV包括16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82等，可导致宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈癌的发生，其中HPV16、HPV18作为最常见的致癌型别，其单克隆抗体研究的比较多，如中国专利技术专利：一种抗HPV16L1蛋白的单克隆抗体、其制备方法和应用(公开号CN105367652B)、一种可特异性识别HPV18L1蛋白的单克隆抗体及其应用(公开号CN108276491A)。加纳256例确诊宫颈癌病例，其中230例(89.8％)检出HPV阳性，其中HPV18(47.4％)，HPV59(42.2％)，HPV45(37.4％)，HPV16(9.0％)是检出比例最高的4种型别；尼日利亚数据表明，63例确诊宫颈癌患者中，58例(92％)检出HPV阳性，其中检出最多的高危型别是HPV16，HPV18，HPV45，HPV51和HPV52；以色列对CIN2-3、宫颈癌患者中的HPV比例分析，其中CIN2-3患者中最常见型别为HPV16(42％)，HPV31(8.8％)和HPV18(4.9％)，而在宫颈癌患者中，最多的检出型别为HPV16(57.4％)，HPV45(9.6％)和HPV18(7.8％)。库拉索浸润性宫颈癌患者中，最多检出型别为HPV16(38.5％)，HPV18(13.5％)和HPV45(6.7％)，这三者占比加和为58.7％。由以上数据可见，HPV45是宫颈癌的高危因素，是仅次于HPV16、HPV18的常见高危型别，但目前其单克隆抗体的研究极少，这限制了利用单克隆抗体检测HPV45病毒、以及HPV45病毒的治疗。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供抗HPV45L1的单克隆中和抗体及其应用，该单克隆中和抗体可广泛应用于临床样本中HPV45病毒的感染检测，且能够用于HPV45感染患者的治疗。本专利技术提供的单克隆抗体，其重链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQIDNO：1、2或3所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列；其轻链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQIDNO：4、5或6所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列。本专利技术中，所述重链包含三个CDR区，所述CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO：1、2和3所示的氨基酸序列；所述轻链包含三个CDR区，所述CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO：4、5和6所示的氨基酸序列。其中，SEQIDNO：1所示的序列为GYYTSIYQMH；SEQIDNO：2所示的序列为YIPQGNFYTYYTQKF；SEQIDNO：3所示的序列为FPTYKDY；SEQIDNO：4所示的序列为RAYYSVDLYGISNMN；SEQIDNO：5所示的序列为ASMYLGS；SEQIDNO：6所示的序列为QQLKEMPLT。本专利技术中，所述单克隆抗体中，其重链包含4个FR区其中至少一个FR区的氨基酸序列具有如SEQIDNO：7、8、9或10所示的氨基酸序列，或者与其具有至少80％序列同源性的序列；其轻链包含4个FR区，其中至少一个FR区的氨基酸序列具有如SEQIDNO：11、12、13或14所示的氨基酸序列，或者与其具有至少80％序列同源性的序列。本专利技术中，所述单克隆抗体中，所述重链的4个FR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO：7、8、9和10所示的氨基酸序列；所述轻链的4个FR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO：11、12、13和14所示的氨基酸序列。本专利技术中，所述与具有至少80％序列同源性的序列为在原序列的基础上，经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列中，所述多个为2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个或32个。本本专利技术实施例中，所述单克隆抗体的重链可变区包含SEQIDNO：1、2或3所示的CDR区和SEQIDNO：7、8、9和10所示的FR区。本本专利技术实施例中，所述单克隆抗体的轻链可变区包含SEQIDNO：4、5或6所示的CDR区和SEQIDNO：11、12、13和14所示的FR区。一些实施例中，所述单克隆抗体的重链可变区依次包含SEQIDNO：7、SEQIDNO：1、SEQIDNO：8、SEQIDNO：2、SEQIDNO：9、SEQIDNO：3、SEQIDNO：10；一些实施例中，所述单克隆抗体的轻链可变区依次包含SEQIDNO：11、SEQIDNO：4、SEQIDNO：12、SEQIDNO：5、SEQIDNO：13、SEQIDNO：6、SEQIDNO：14。在一些具体实施例中，所述单克隆抗体的重链可变区具有如SEQIDNO：15中任一项所示的氨基酸序列；轻链可变区具有如SEQIDNO：16中任一项所示的氨基酸序列。在本专利技术中，所述单克隆抗体的重链恒定区为IgG2a型，轻链恒定区为κ型。具体实施例中，所述单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNo.19289的杂交瘤细胞株产生。本专利技术提供的单克隆抗体，其是以HPV45L1蛋白包被而成假病毒颗粒(VLP)作为免疫原，免疫小鼠，采用杂交瘤技术经过细胞融合，筛选得到能持续、稳定分泌抗HPV45L1的杂交瘤细胞株，制备单克隆抗体。本专利技术获得的单克隆抗体具有良好的灵敏度和特异性，实验表明，该单克隆抗体与HPV45VLP的ICg0低至1ng/mL，与测试的其它10个型别(HPV6、11、16、18、31、33、52、58、59、68)均没有交叉反应。因此，该抗体可应用于HPV45型的临床诊断以及HPV45型病毒感染的治疗或预防。本专利技术还提供了编码所述单克隆抗体或其功能性片段的多核苷酸。所述功能性片段包括重链的CDR区中至少一种，或轻链的CDR区中至少一种。具体的，编码SEQIDNO：1所示CDR区的多核苷酸序列如SEQIDNO：17所示；编码SEQIDNO：2所示CDR区的多核苷酸序列如SEQIDNO：18所示；编码SEQIDNO：3所示CDR区的多核苷酸序列如SEQI本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.单克隆抗体，其特征在于，/n其重链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQ ID NO：1、2或3所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列；/n其轻链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQ ID NO：4、5或6所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列。/n

【技术特征摘要】
1.单克隆抗体，其特征在于，
其重链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQIDNO：1、2或3所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列；
其轻链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQIDNO：4、5或6所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列。


2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，
所述重链包含三个CDR区，所述CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO：1、2和3所示的氨基酸序列；
所述轻链包含三个CDR区，所述CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO：4、5和6所示的氨基酸序列。


3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其特征在于，
所述重链的4个FR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO：7、8、9和10所示的氨基酸序列；
所述轻链的4个FR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO：11、12、13和14所示的氨基酸序列。


4.根据权利要求1～3任一项所述的单克隆抗体，其特征在于，
其重链可变区具有如SEQIDNO：15中任一项所示的氨基酸序列；
其轻链可变区具有如SEQIDNO：16中任一项所示的氨基酸序列。


5.根据权利要求1～4任一项所述的单克隆抗体，其特征在于，其重链恒定区为IgG2a型，轻链恒定区为κ型。


6.根据权利要求1～5任一项所述的单克隆抗体，其特征在于，由保藏编号为CGMCCNo.19289的杂交瘤细胞株产生。


7.编码权利要求1～6任一项所述的单克隆抗体或其功能性片段的多核苷酸。


8.一种核酸载体，包括编码权利要求1～6任一项所述的单克隆抗体或其功能性片段的...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭光华，魏颖颖，蔺皓，邹国宝，刘欣欣，宋高尚，沈江卫，
申请(专利权)人：中生方政生物技术股份有限公司，北京中生方政生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32