HPV58L1的单克隆中和抗体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及抗体药物技术领域，尤其涉及HPV58L1的单克隆中和抗体及其应用。本发明专利技术提供了HPV58的特异性的单克隆中和抗体以及产生该抗体的杂交瘤细胞系，利用其中的一株中和活性效价最高的单克隆中和抗体，采用间接ELISA法、双抗夹心ELISA法、免疫杂交法等，可广泛应用于临床样本中HPV58病毒的感染检测；利用其中的一株中和活性效价最高的单克隆中和抗体，制备成阴道凝胶、阴道清洗液、外用洗液、阴道栓剂、冻干粉、阴道泡腾片等，用于HPV58感染患者的治疗，能有效提高HPV58患者的临床转阴率。本发明专利技术对女性的健康发展和公共卫生防控均具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
HPV58L1的单克隆中和抗体及其应用
本专利技术涉及抗体药物
，尤其涉及HPV58L1的单克隆中和抗体及其应用。
技术介绍
人类乳头瘤病毒(HumanPapillomavirus，简称HPV)是球形、双链DNA病毒，病毒颗粒直径为55～60nm，核衣壳呈20面体对称，由72个主要衣壳蛋白L1的五聚体及次要衣壳蛋白L2组成。主要侵及人的上皮组织和细胞，能引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，进而诱发各种良、恶性增生病变。高危型HPV感染与多种恶性肿瘤的发生相关，低危型的HPV感染则引起肛门和生殖器疣。高危型HPV包括16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82等，可导致宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和宫颈癌的发生，其中HPV16、HPV18作为最常见的致癌型别，其单克隆抗体研究的比较多，如中国专利技术专利：一种抗HPV16L1蛋白的单克隆抗体、其制备方法和应用(公开号CN105367652B)、一种可特异性识别HPV18L1蛋白的单克隆抗体及其应用(公开号CN108276491A)。中国医学科学院肿瘤医院13.79万人的统计数据显示，北京、上海、江苏、浙江、湖南、山西、四川，共7个省市，不同高危型HPV检出率顺序为：HPV16、52、58、53、39、56、51、18、59、33、66、35、31、82、68、45、26；浙江省台州医院，基于3.80万人的检测数据，高危型HPV检出率顺序为：HPV52、16、58、39、18、56、51、33、59、68、66、31、35、45；我国东南部40311人的检测数据，最常见的高危型别占比分别为HPV16(29.9％),HPV52(18.6％),HPV58(17.1％),HPV18(10.1％),HPV33(7.53％)。青岛中心医院和青岛肿瘤医院，共1664例患者，包括CIN、SCC、腺癌，在CIN1-3、SCC中，HPV16、52、31、33、58、51发生较多；在腺癌中，HPV18发生率最高；湖南1336例浸润型宫颈癌中，各高危型别检出率分别为：HPV16(50.6％),HPV58(12.4％),HPV52(10.9％),HPV18(7.3％)；新疆北部宫颈疾病患者中，各高危型检出率为：HPV16(44.0％)，HPV53(28.9％)，52(25.3％)，58(22.3％)。由以上数据可见，HPV58在HPV感染病例中、宫颈癌患者中，都是仅次于HPV16、HPV52的常见高危型别，但目前其单克隆抗体的研究极少，这限制了利用单克隆抗体检测HPV58病毒、以及HPV58病毒的治疗。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术要解决的技术问题在于提供HPV58L1的单克隆中和抗体及其应用，该单克隆中和抗体可广泛应用于临床样本中HPV58病毒的感染检测，且能够用于HPV58感染患者的治疗。本专利技术提供的单克隆抗体，其重链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQIDNO:1、2或3所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列；其轻链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQIDNO:4、5或6所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列。本专利技术中，所述重链包含三个CDR区，所述CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:1、2和3所示的氨基酸序列；所述轻链包含三个CDR区，所述CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:4、5和6所示的氨基酸序列。其中，SEQIDNO:1所示的序列为GFTFSIANMS；SEQIDNO:2所示的序列为YINPGTGDTFVHDKF；SEQIDNO:3所示的序列为FGSNFFDY；SEQIDNO:4所示的序列为KASQDIYYIGA；SEQIDNO:5所示的序列为GAYALET；SEQIDNO:6所示的序列为QQYSTTPWT。本专利技术中，所述单克隆抗体中，其重链包含4个FR区其中至少一个FR区的氨基酸序列具有如SEQIDNO:7、8、9或10所示的氨基酸序列，或者与其具有至少80％序列同源性的序列；其轻链包含4个FR区，其中至少一个FR区的氨基酸序列具有如SEQIDNO:11、12、13或14所示的氨基酸序列，或者与其具有至少80％序列同源性的序列。本专利技术中，所述单克隆抗体中，所述重链的4个FR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:7、8、9和10所示的氨基酸序列；所述轻链的4个FR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:11、12、13和14所示的氨基酸序列。本专利技术中，所述与具有至少80％序列同源性的序列为在原序列的基础上，经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列中，所述多个为2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个、30个、31个或32个。本本专利技术实施例中，所述单克隆抗体的重链可变区包含SEQIDNO:1、2或3所示的CDR区和SEQIDNO:7、8、9和10所示的FR区。本本专利技术实施例中，所述单克隆抗体的轻链可变区包含SEQIDNO:4、5或6所示的CDR区和SEQIDNO:11、12、13和14所示的FR区。一些实施例中，所述单克隆抗体的重链可变区依次包含SEQIDNO:7、SEQIDNO:1、SEQIDNO:8、SEQIDNO:2、SEQIDNO:9、SEQIDNO:3、SEQIDNO:10；一些实施例中，所述单克隆抗体的轻链可变区依次包含SEQIDNO:11、SEQIDNO:4、SEQIDNO:12、SEQIDNO:5、SEQIDNO:13、SEQIDNO:6、SEQIDNO:14。在一些具体实施例中，所述单克隆抗体的重链可变区具有如SEQIDNO:15中任一项所示的氨基酸序列；轻链可变区具有如SEQIDNO:16中任一项所示的氨基酸序列。在本专利技术中，所述单克隆抗体的重链恒定区为IgG1型，轻链恒定区为K型。具体实施例中，所述单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNo.19187的杂交瘤细胞株产生。本专利技术提供的单克隆抗体，其是以HPV58L1蛋白包被而成假病毒颗粒(VLP)作为免疫原，免疫小鼠，采用杂交瘤技术经过细胞融合，筛选得到能持续、稳定分泌抗HPV58的杂交瘤细胞株，制备单克隆抗体。本专利技术获得的单克隆抗体具有良好的灵敏度和特异性，实验表明，该单克隆抗体与HPV58VLP的IC90低至2ng/mL，与测试的其它10个型别(HPV6、11、16、18、31、33、45、52、59、68)均没有交叉反应。因此，该抗体可应用于HPV58型的临床诊断以及HPV58型病毒感染的治疗或预防。本专利技术还提供了编码所述单克隆抗体或其功能性片段的多核苷酸。所述功能性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.单克隆抗体，其特征在于，/n其重链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQ ID NO:1、2或3所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列；/n其轻链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQ ID NO:4、5或6所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列。/n

【技术特征摘要】
1.单克隆抗体，其特征在于，
其重链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQIDNO:1、2或3所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列；
其轻链的CDR区中至少一个的氨基酸序列具有如SEQIDNO:4、5或6所示的氨基酸序列或者与其具有至少80％序列同一性的序列。


2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，
所述重链包含三个CDR区，所述CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:1、2和3所示的氨基酸序列；
所述轻链包含三个CDR区，所述CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:4、5和6所示的氨基酸序列。


3.根据权利要求1或2所述的单克隆抗体，其特征在于，
所述重链的4个FR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:7、8、9和10所示的氨基酸序列；
所述轻链的4个FR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:11、12、13和14所示的氨基酸序列。


4.根据权利要求1～3任一项所述的单克隆抗体，其特征在于，
其重链可变区具有如SEQIDNO:15中任一项所示的氨基酸序列；
其轻链可变区具有如SEQIDNO:16中任一项所示的氨基酸序列。


5.根据权利要求1～4任一项所述的单克隆抗体，其特征在于，其重链恒定区为IgG1型，轻链恒定区为κ型。


6.根据权利要求1～5任一项所述的单克隆抗体，其特征在于，由保藏编号为CGMCCNo.19187的杂交瘤细胞株产生。


7.编码权利要求1～6任一项所述的单克隆抗体或其功能性片段的多核苷酸。


8.一种核酸载体，包括编码权利要求1～6任一项所述的单克隆抗体或其功能性片段的...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏颖颖，邹国宝，刘欣欣，郭光华，蔺皓，宋高尚，沈江卫，
申请(专利权)人：中生方政生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32