多瘤病毒中和抗体制造技术

本发明专利技术涉及抗多瘤病毒抗体、抗体片段以及其用于预防和治疗BK或JC病毒感染和相关疾病的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】多瘤病毒中和抗体
本公开涉及抗多瘤病毒抗体、抗体片段以及其用于降低多瘤病毒感染的可能性或治疗所述多瘤病毒感染的用途。
技术介绍
在人多瘤病毒中，BK病毒(BKV)和JC病毒(JCV)是最先鉴定出的两种病毒。这两种多瘤病毒从免疫抑制患者中分离出来并且于1971年在同一期号的《柳叶刀(Lancet)》(Gardner等人,《柳叶刀》19711:1253-1527和Padgett等人,《柳叶刀》19711:1257-1260)中公开。多瘤病毒是二十面体非包膜双链DNA病毒。它们的测量直径为40-45nm并且包含88％蛋白和12％DNA。BKV基因组是长度为大约5000个碱基对的环状双链DNA并且含有三个主要分区：早期编码区、晚期编码区和非编码控制区。早期编码区对三种调节蛋白(大肿瘤抗原[TAg]、小肿瘤抗原[tAg]和截短肿瘤抗原[truncTAg])进行编码，所述三种调节蛋白是在新感染的细胞中最先表达的病毒蛋白并且负责促进病毒DNA复制并建立有利的细胞环境。后期编码区对构成病毒衣壳的三种结构蛋白(VP1、VP2和VP3)以及未知蛋白(agnoprotein)进行编码，所述未知蛋白在病毒复制期间的作用不够明确。非编码区含有基因组复制起点以及驱动病毒基因产物的表达的早期启动子和晚期启动子。已经在许多不同的细胞类型中检测到BKV，所述细胞类型包含肾脏、膀胱和输尿管的上皮细胞(典型的持续性位点)、扁桃体组织和淋巴细胞(所提出的原发感染和播散位点)(Chatterjee等人,《医学病毒学杂志(J.Med.Virol.)》2000；60:353-362，Goudsmit等人,《医学病毒学杂志》1982；10:91-99，Heritage等人,《医学病毒学杂志》1981；8:143-150，Shinohara等人,《医学病毒学杂志》1993；41(4):301-305)。用于BKV的原代细胞表面受体是神经节苷脂GT1b、GD1b和GD3，所述神经节苷脂具有末端α2,8-连接的唾液酸并且相当普遍，从而允许各种细胞类型感染(Neu等人,《公共科学图书馆：病理学(PLosPatholog.)》2013；9(10):e1003714和e1003688，还参见O'Hara等人,《病毒研究(VirusRes.)》2014；189:208-285)。BKV的非包膜二十面体病毒粒子由三种不同的病毒蛋白构成：布置在72个五聚体中的主要病毒衣壳蛋白VP1的360个拷贝和由次要病毒衣壳蛋白VP2和VP3组成的72个拷贝，其中一个VP2分子或VP3分子与每个VP1五聚体相关。只有VP1在进入时暴露在病毒粒子表面上，并且每个五聚体具有神经节苷脂受体的五个低亲和力结合位点。将VP1五聚体与细胞表面上的神经节苷脂受体结合发起通过胞膜窖(caveolae)介导的内吞途径进行的内化，然后将病毒运输到内质网并且最终到达细胞核(Tsai和Qian,《病毒学杂志(J.Virol)》2010；84(19):9840-9852)。感染BKV基本上是普遍的，其中全球感染人群的估计范围在80％与90％之间(KnowlesW.A.,《实验医学与生物学进展(AdvExpMedBiol.)》2006；577:19-45)。原发感染最经常在儿童期(即，在10岁之前)发生并且引起轻度非特异性自限性疾病或完全没有症状。持续性感染建立在肾小管、输尿管和膀胱的上皮细胞中并且通过免疫系统得到有效控制。免疫活性成年人的尿液中的短暂性无症状病毒脱落偶尔发生，但是不会引起疾病或后遗症。然而，受损的免疫功能(尤其是在肾移植或造血干细胞移植之后的免疫抑制时)可能导致不受控的BKV复制并且最终导致BKV相关的肾病(BKVAN)或出血性膀胱炎(HC)(即膀胱的疼痛性疾病)。没有针对BKV的有效的抗病毒疗法，并且当前护理标准是降低免疫抑制，这会增加急性排斥的风险。即使用当前更加积极的方法来进行监测和预防，但是高达10％的肾移植接受者将患上BKVAN并且那些患者中的15-30％将因BKVAN而遭受移植物丢失。在检测到BK病毒血症时经历免疫抑制方案减少的那些患者中，高达30％将因此经历急性排斥反应。虽然最初在1971年(同上)对BKV进行了描述，但是直到20世纪90年代才在文献中将BKVAN报道为肾脏移植损伤的原因(Purighalla等人,《美国肾脏病杂志(Am.J.KidneyDis.)》1995；26:671-673和Randhawa等人,《移植(Transplantation)》1999；67:103-109)。在BKVAN的早期管理中，BK测试为阳性具有严重的后果，其中超过50％的患者患有移植物功能障碍和移植物丢失(Hirsch等人,《新英格兰医学杂志(NewEngl.J.Med.)》2002；347:488-496)。在肾脏移植患者中，BKV再活化和复制在良好确立的临床病程之后发生，其首先通过检测到尿液中的病毒和病毒DAN(病毒尿症)所证实，然后通过检测到血流中的病毒(病毒血症)所证实，并且最后通过由于病毒复制而引起的肾病和降低的肾脏功能的迹象所证实。通常在移植后的前3个月内，所有肾脏移植接受者中的大约30-40％将患有病毒尿症，并且接受者中的10-20％将患有BK病毒血症(Sawinski和Goral,《肾脏病透析移植(NephrolDialTransplant.)》2015；30:209-217；Hirsch等人,《美国移植杂志(AmJTransplant.)》2013；13:136-145；Dharnidharka等人,《儿科肾病学(PediatrNephrol.)》2011；26:1763-1774；Babel等人,《移植》2009；88:89-95)。通常在移植后第一年内，所有肾脏移植接受者中的大约1-10％将进展为BKVAN(Bohl和Brennan,《美国肾脏病学会临床杂志(ClinJAmSocNephrol.)》2007；2(增刊1):S36-46；Sawinski和Goral,《肾脏病透析移植》2015；30:209-217)。肾小管上皮细胞中的BKV复制引起坏死和裂解破坏，从而导致基底膜剥脱、小管液在间质中积聚，并且最终导致间质纤维化和小管萎缩(Nickeleit等人,《美国肾脏病学会杂志(J.Am.Soc.Neprol.)》1999；10(5):1080-1089)。患者可能呈现出肾功能恶化、肾小管间质性肾炎和输尿管狭窄(Garner等人,《柳叶刀》1971；1(7712):1253-1257和Hirsch《美国移植杂志》2002；2(1)25-30)。BKV还可能引起免疫受损宿主的肺炎、视网膜炎和脑膜脑炎(Reploeg等人,《临床传染病杂志(Clin.Infect.Dis.)》2001；33(2):191-202)。造血干细胞移植(HSCT)接受者的BKV疾病通常表现为出血性膀胱炎(HC)，其严重程度可能不同。病毒尿症(但并不总是病毒血症)和疼痛性血尿与HC的临床表现相关。当前护理标准本质上是支持性的，主要涉及强制水合/利尿和疼痛管理措施。最严重的病例需要输血、凝块清除本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：表2中所示的(i)重链区和(ii)轻链区。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171201 US 62/593,566;20180905 US 62/727,1681.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：表2中所示的(i)重链区和(ii)轻链区。


2.一种分离的抗体，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：(i)包括(a)SEQIDNO:9的HCDR1(CDR-互补决定区)、(b)SEQIDNO:10的HCDR2、(c)SEQIDNO:11的HCDR3的重链可变区以及包括(d)SEQIDNO:25的LCDR1、(e)SEQIDNO:26的LCDR2和(f)SEQIDNO:27的LCDR3的轻链可变区；
(ii)包括(a)SEQIDNO:41的HCDR1、(b)SEQIDNO:42的HCDR2、(c)SEQIDNO:43的HCDR3的重链可变区以及包括(d)SEQIDNO:57的LCDR1、(e)SEQIDNO:58的LCDR2和(f)SEQIDNO:59的LCDR3的轻链可变区；
(iii)包括(a)SEQIDNO:73的HCDR1、(b)SEQIDNO:74的HCDR2、(c)SEQIDNO:75的HCDR3的重链可变区以及包括(d)SEQIDNO:89的LCDR1、(e)SEQIDNO:90的LCDR2和(f)SEQIDNO:91的LCDR3的轻链可变区；
(iv)包括(a)SEQIDNO:105的HCDR1、(b)SEQIDNO:106的HCDR2、(c)SEQIDNO:107的HCDR3的重链可变区以及包括(d)SEQIDNO:121的LCDR1、(e)SEQIDNO:122的LCDR2和(f)SEQIDNO:123的LCDR3的轻链可变区；
(v)包括(a)SEQIDNO:137的HCDR1、(b)SEQIDNO:138的HCDR2、(c)SEQIDNO:139的HCDR3的重链可变区以及包括(d)SEQIDNO:153的LCDR1、(e)SEQIDNO:154的LCDR2和(f)SEQIDNO:155的LCDR3的轻链可变区；
(vi)包括(a)SEQIDNO:169的HCDR1、(b)SEQIDNO:170的HCDR2、(c)SEQIDNO:171的HCDR3的重链可变区以及包括(d)SEQIDNO:185的LCDR1、(e)SEQIDNO:186的LCDR2和(f)SEQIDNO:187的LCDR3的轻链可变区；
(vii)包括(a)SEQIDNO:201的HCDR1、(b)SEQIDNO:202的HCDR2、(c)SEQIDNO:203的HCDR3的重链可变区以及包括(d)SEQIDNO:217的LCDR1、(e)SEQIDNO:218的LCDR2和(f)SEQIDNO:219的LCDR3的轻链可变区；
(viii)包括(a)SEQIDNO:233的HCDR1、(b)SEQIDNO:234的HCDR2、(c)SEQIDNO:235的HCDR3的重链可变区以及包括(d)SEQIDNO:249的LCDR1、(e)SEQIDNO:250的LCDR2和(f)SEQIDNO:251的LCDR3的轻链可变区；以及
(ix)包括(a)SEQIDNO:265的HCDR1、(b)SEQIDNO:266的HCDR2、(c)SEQIDNO:267的HCDR3的重链可变区以及包括(d)SEQIDNO:281的LCDR1、(e)SEQIDNO:282的LCDR2和(f)SEQIDNO:283的LCDR3的轻链可变区。


3.根据权利要求2所述的抗体，其中CDR内的一个或两个氨基酸已被修饰、缺失或取代。


4.根据权利要求2所述的抗体，其在所述可变重链区或所述可变轻链区上保留至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。


5.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人工程化抗体、人抗体、单链抗体(scFv)或抗体片段。


6.一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包括：
(i)包括SEQIDNO:18的重链可变区(vH)以及包括SEQIDNO:34的轻链可变区(vL)；
(ii)包括SEQIDNO:50的重链可变区(vH)以及包括SEQIDNO:66的轻链可变区(vL)；
(iii)包括SEQIDNO:82的重链可变区(vH)以及包括SEQIDNO:98的轻链可变区(vL)；
(iv)包括SEQIDNO:114的重链可变区(vH)以及包括SEQIDNO:130的轻链可变区(vL)；
(v)包括SEQIDNO:146的重链可变区(vH)以及包括SEQIDNO:162的轻链可变区(vL)；
(vi)包括SEQIDNO:178的重链可变区(vH)以及包括SEQIDNO:194的轻链可变区(vL)；
(vii)包括SEQIDNO:210的重链可变区(vH)以及包括SEQIDNO:226的轻链可变区(vL)；
(viii)包括SEQIDNO:242的重链可变区(vH)以及包括SEQIDNO:258的轻链可变区(vL)；以及
(ix)包括SEQIDNO:274的重链可变区(vH)以及包括SEQIDNO:290的轻链可变区(vL)。


7.根据权利要求6所述的抗体或其片段，其在所述可变轻区或可变重区上保留至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性。


8.根据权利要求6所述的抗体，其中所述可变轻区或可变重区内的一个、两个、三个、四个或五个但少于10个氨基酸已被修饰、缺失或取代。


9.根据权利要求6所述的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人工程化抗体、人抗体、单链抗体(scFv)或抗体片段。


10.根据权利要求1、2或6所述的抗体，其中所述抗体或其...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·阿本德，V·科尔纳基奥内，J·M·林德纳，E·特拉吉埃，
申请(专利权)人：诺华股份有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH