乙肝病毒的中和抗体B430及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种乙肝病毒的中和抗体B430及其应用。本发明专利技术提供了一种IgG抗体，命名为单克隆抗体B430，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列1自N末端第45‑52位氨基酸残基、第70‑77位氨基酸残基、第116‑132位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第43‑48位氨基酸残基、第66‑68位氨基酸残基、第105‑113位氨基酸残基。本发明专利技术可用于乙肝慢性感染患者的治疗和临床替代血清纯化多抗预防母婴传播。本发明专利技术对治疗和预防乙肝病毒感染具有重要的应用前景。

Neutralizing antibody b430 of hepatitis B virus and its application

【技术实现步骤摘要】
乙肝病毒的中和抗体B430及其应用
本专利技术涉及一种乙肝病毒的中和抗体B430及其应用。
技术介绍
乙型肝炎病毒(HepatitisBVirus,HBV)感染在全世界广泛存在，在中国尤其严重。乙肝病毒属于嗜肝病毒科的一员，其感染诱发肝炎，在中国大约有8000万-1亿人慢性感染乙肝病毒，全球约有2.4亿慢性乙肝患者。如果考虑已经恢复的急性乙肝病毒感染者，乙肝病毒感染者累计更多。有研究表明35-62％中国人感染过乙肝病毒，56-98％撒哈拉以南非洲人感染过乙肝病毒,全球约有20亿人感染过乙肝病毒，乙肝病毒感染是全球性的卫生问题。乙肝病毒在感染过程中诱发免疫炎症损伤患者肝脏。中国乙肝患者大部分为母婴传播或者小孩时期感染乙肝病毒，绝大部分为慢性乙肝感染，终生携带乙肝病毒。成年人感染乙肝病毒，大部分可依靠自身免疫系统清除乙肝病毒，为乙肝病毒的急性感染。乙肝病毒感染导致急性慢性肝炎、肝硬化乃至肝癌，其诱发肝炎机制主要是肝细胞内乙肝病毒诱发机体免疫系统的肝脏炎症，乙肝病毒的复制模板共价闭合环状DNA(cccDNA)作为病毒储存库稳定且随时补充，非常难以清除，乙肝病毒复制诱发持续不断和多次反复的免疫杀伤过程中造成肝脏炎症。目前乙肝病毒疫苗预防效果很好，临床治疗上只能控制乙肝病毒复制，不能治愈乙肝病毒感染。乙肝疫苗控制了乙肝病毒在中国的广泛传播，对乙肝妈妈导致的母婴传播，临床上通过核苷药物如恩替卡韦、替诺福韦降低乙肝妈妈怀孕期间乙肝病毒复制水平，新生儿出生后注射乙肝免疫球蛋白(HBIG)和及时免疫乙肝疫苗的措施综合干预，非常有效的降低了乙肝病毒的母婴传播。虽然乙肝疫苗控制了乙肝病毒的传播，但是对已感染乙肝病毒的数量众多的患者，临床治疗手段如核苷药物和干扰素，治愈不了乙肝病毒感染。核苷药物能有效控制乙肝病毒的DNA复制，但不能彻底清除乙肝病毒，很难降低乙肝表面抗原，乙肝患者停药之后，乙肝病毒仍然会复发。干扰素治疗周期长，副作用大，只能在治疗期间对相当少的一部分乙肝患者有作用，治疗效果性价比很低，目前乙肝感染治疗基本以核苷药物为主。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种乙肝病毒的中和抗体B430及其应用。本专利技术提供了一种IgG抗体，命名为单克隆抗体B430，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列1自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-77位氨基酸残基、第116-132位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第43-48位氨基酸残基、第66-68位氨基酸残基、第105-113位氨基酸残基。所述重链可变区由序列表的序列1自N末端第20-143位氨基酸残基组成。所述轻链可变区由序列表的序列3自N末端第17-123位氨基酸残基组成。所述重链为如下(a)或(b)：(a)序列表的序列1自N末端第20-473位氨基酸残基组成的蛋白质；(b)序列表的序列1所示的蛋白质。所述轻链为如下(c)或(d)：(c)序列表的序列3自N末端第17-230位氨基酸残基组成的蛋白质；(d)序列表的序列3所示的蛋白质。编码所述IgG抗体的基因也属于本专利技术的保护范围。编码所述重链的基因为如下(1)或(2)或(3)：(1)序列表的序列2自5’末端第972-2333位核苷酸所示的DNA分子；(2)序列表的序列2自5’末端第915-2336位核苷酸所示的DNA分子；(3)序列表的序列2所示的DNA分子。编码所述轻链的基因为如下(4)或(5)或(6)：(4)序列表的序列4自5’末端第963-1604位核苷酸所示的DNA分子；(5)序列表的序列4自5’末端第915-1607位核苷酸所示的DNA分子；(6)序列表的序列4所示的DNA分子。本专利技术还保护以上任一所述IgG抗体在制备用于抑制乙肝病毒的药物中的应用。本专利技术还保护一种用于抑制乙肝病毒的药物，其活性成分为以上任一所述IgG抗体。本专利技术还保护以上任一所述IgG抗体在制备用于中和乙肝病毒的药物中的应用。本专利技术还保护一种用于中和乙肝病毒的药物，其活性成分为以上任一所述IgG抗体。本专利技术还保护以上任一所述IgG抗体在制备用于预防和/或治疗乙型肝炎的药物中的应用。本专利技术还保护一种用于预防和/或治疗乙型肝炎的药物，其活性成分为以上任一所述IgG抗体。单克隆抗体B430能够识别不同基因型乙肝病毒，保证了抗体中和的广谱性。所述乙肝病毒为各个基因型的乙肝病毒。例如，A基因型的乙肝病毒、B基因型的乙肝病毒、C基因型的乙肝病毒、D基因型的乙肝病毒。A基因型乙肝病毒即基因分型为A型的乙肝病毒。B基因型乙肝病毒即基因分型为B型的乙肝病毒。C基因型乙肝病毒即基因分型为C型的乙肝病毒。D基因型乙肝病毒即基因分型为D型的乙肝病毒。相比较血清多抗，单克隆抗体在中和活性以及来源方便性上具有非常大的优势。本专利技术的专利技术人利用人源记忆性B细胞培养技术，从乙肝疫苗免疫者分离到单克隆抗体B430，可用于乙肝慢性感染患者的治疗和临床替代血清纯化多抗预防母婴传播。本专利技术对治疗和预防乙肝病毒感染具有重要的应用前景。附图说明图1为实施例3的步骤一的结果。图2为实施例3的步骤二的结果。图3为实施例4的步骤一的结果。图4为实施例4的步骤二的结果。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。如无特殊说明，实施例中的PBS缓冲液均为pH7.2、10mM的PBS缓冲液。PBST溶液：含0.5％(体积百分含量)TritonX-100的PBS缓冲液。乙肝免疫球蛋白溶液(HBIG溶液)：北京天坛生物，浓度约为120mg/ml。如无特殊说明，细胞培养条件为37℃、5％CO2环境。JC126载体含HDV复制子，提及JC126载体的文献：李颖等,丁型肝炎病毒复制包装载体的构建.中国现代医学杂志,2017(11):第31-35页。A型乙肝包膜蛋白表达质粒即pHBV1.5，记载于如下文献：Bruss,V.andD.Ganem,TheroleofenvelopeproteinsinhepatitisBvirusassembly.ProcNatlAcadSciUSA,1991.88(3):p.1059-63.。B型乙肝包膜蛋白表达质粒即pHBV1.18-B，记载于如下文献：Hu,W.,etal.,CpGoligodeoxynucleotideinhibitsHBVreplicationinahydrodynamicinjectionmurinemodel.AntivirTher,2014.。C型乙肝包膜蛋白表达质粒即pHBV1.18-C。记载于如下文本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种IgG抗体，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列1自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-77位氨基酸残基、第116-132位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第43-48位氨基酸残基、第66-68位氨基酸残基、第105-113位氨基酸残基。/n

【技术特征摘要】
1.一种IgG抗体，由轻链和重链组成；所述重链中的重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列1自N末端第45-52位氨基酸残基、第70-77位氨基酸残基、第116-132位氨基酸残基；所述轻链中的轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次为序列表的序列3自N末端第43-48位氨基酸残基、第66-68位氨基酸残基、第105-113位氨基酸残基。


2.如权利要求1所述的IgG抗体，其特征在于：
所述重链可变区由序列表的序列1自N末端第20-143位氨基酸残基组成；
所述轻链可变区由序列表的序列3自N末端第17-123位氨基酸残基组成。


3.如权利要求2所述的IgG抗体，其特征在于：
所述重链为如下(a)或(b)：(a)序列表的序列1自N末端第20-473位氨基酸残基组成的蛋白质；(b)序列表的序列1所示的蛋白质；
所述轻链为如下(c)或(d)：(c)序列表的序列3自N末端第17-230位氨基酸残基组成的蛋白质；(d)序列表的序列3所示的蛋白质。


4.编码权利要求3所述IgG抗体的基因，其特征在于：
编码所述重链的基因为如下(1)或(2)或(3)：
(1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张林琦，贲海静，史宣玲，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11