检测人尿液或血液样本中的线粒体基因组的方法及试剂盒技术

本申请公开了一种检测人尿液或血液样本中的线粒体基因组的方法及试剂盒。本申请检测人尿液或血液样本中的线粒体基因组的方法，包括对提取自尿液或血液的基因组DNA进行线粒体基因组长片段PCR扩增，并对扩增产物进行纯化，获得线粒体基因组全长片段，对获得的线粒体基因组进行测序文库构建，并采用高通量测序对线粒体基因组进行测序，实现人尿液或血液样本中的线粒体基因组的检测。本申请检测人尿液或血液样本中的线粒体基因组的方法，能够对人尿液和血液中的线粒体基因组进行准确有效的检测，为人线粒体疾病诊断或人线粒体研究提供分子生物学角度的辅助证据和参考依据。

A method and kit for the detection of mitochondrial genome in human urine or blood samples

【技术实现步骤摘要】
检测人尿液或血液样本中的线粒体基因组的方法及试剂盒
本申请涉及线粒体基因组检测领域，特别是涉及一种检测人尿液或血液样本中的线粒体基因组的方法及试剂盒。
技术介绍
线粒体是一种广泛存在于细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，在不同组织细胞中存在的数量不一。线粒体拥有自己的基因组DNA，与核基因不同，主要以母系遗传为主。线粒体DNA呈双链环状，在一个线粒体中有一个或多个拷贝。人线粒体基因组大小约为16.6Kb，拥有有37个基因，编码了两种rRNA(12SrRNA和16SrRNA)、22种tRNA，以及13种多肽。在线粒体上存在的众多基因中，线粒体基因突变往往是线粒体功能异常的主要原因，也是导致线粒体疾病的主要原因。进行线粒体基因组检测，能够有效的发现线粒体上发生的突变，为线粒体疾病研究和诊断提供有效的参考依据。线粒体广泛存在于细胞中，但在个体的不同组织，不同部位中，线粒体含量不同。并且线粒体基因组遗传方式不同于核基因，主要以母系遗传为主，在遗传中具有一定的随机漂变或主动选择。同时，线粒体为细胞提供能量，线粒体上氧化反本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测人尿液或血液样本中的线粒体基因组的方法，其特征在于：包括以下步骤，/n基因组DNA提取步骤，包括对人尿液或血液的基因组DNA进行提取；/n长片段扩增步骤，包括对提取的基因组DNA进行长片段PCR扩增，扩增产物即线粒体基因组；/n第一质控步骤，包括对长片段PCR扩增产物进行质控检测，判断是否有扩增出符合预期的长片段，质控合格的长片段PCR扩增产物用于后续步骤；/n线粒体基因组纯化步骤，包括对质控合格的长片段PCR扩增产物进行扩增片段纯化，获得线粒体基因组；/n第二质控步骤，包括对所述线粒体基因组纯化步骤的产物进行质控检测，判断是否有纯化获得符合预期的长片段PCR扩增产物以及纯化的扩增...

【技术特征摘要】
1.一种检测人尿液或血液样本中的线粒体基因组的方法，其特征在于：包括以下步骤，
基因组DNA提取步骤，包括对人尿液或血液的基因组DNA进行提取；
长片段扩增步骤，包括对提取的基因组DNA进行长片段PCR扩增，扩增产物即线粒体基因组；
第一质控步骤，包括对长片段PCR扩增产物进行质控检测，判断是否有扩增出符合预期的长片段，质控合格的长片段PCR扩增产物用于后续步骤；
线粒体基因组纯化步骤，包括对质控合格的长片段PCR扩增产物进行扩增片段纯化，获得线粒体基因组；
第二质控步骤，包括对所述线粒体基因组纯化步骤的产物进行质控检测，判断是否有纯化获得符合预期的长片段PCR扩增产物以及纯化的扩增产物浓度是否符合要求，质控合格的纯化产物用于后续步骤；
DNA片段化步骤，包括对第二质控合格的纯化产物进行DNA片段化处理；
第三质控步骤，包括对所述DNA片段化步骤的产物进行片段大小分析和检测，符合预期片段大小的DNA片段化处理产物用于后续步骤；
文库构建步骤，包括对符合预期片段大小的DNA片段化处理产物进行二代测序文库构建，并进行文库质量控制；
高通量测序步骤，包括对合格的测序文库进行高通量测序，并使用生物信息分析流程对原始下机数据进行质控过滤、分析，获得人尿液或血液中的线粒体基因组检测信息。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述长片段PCR扩增采用的上游引物为SeqIDNo.1所示序列，下游引物为SeqIDNo.2所示序列，
SeqIDNo.1：5’-CACTAGGAAAAAACCTTGTAGAGAGAGTA-3’
SeqIDNo.2：5’-TCCAAAGAGCTGTTCCTCTTTGGAC-3’。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述长片段PCR扩增的反应条件为，95℃-98℃预变性1-5分钟，然后进入25-40个循环：95℃-98℃变性15-50秒、65℃-68℃退火延伸16-20分钟，循环结束后再72℃延伸16-20分钟，最后4℃待机。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述基因组DNA提取步骤采用人尿液和血液共提取试剂进行人尿液或血液的基因组DNA提取。


5.一种检测人尿液或血液样本中的线粒体基因组的装置，其特征在于：包括基因组DNA提取模块、长片段扩增模块、第一质控模块、线粒体基因组纯化模块、第二质控模块、DNA片段化模块、第三质控模块、文库构建模块和高通量测序模块，
所述基因组DNA提取模块，包括用于对人尿液或血液的基因组DNA进行提取；
所述长片段扩增模块，包括用于对提取的基因组DNA进行长片段PCR扩增，扩增产物即线粒体基因组；
所述第一质控模块，包括用于对长片段PCR扩增产物进行质控检测，判断是否有扩增出符合预期的长模块，质控合格的长片段PCR扩增产物用于后续处理；
所述线粒体基因组纯化模块，包括用于对质控合格的长片段PCR...

【专利技术属性】
技术研发人员：李全，李妍珂，刘永初，李阳，刘阳，吕佩涛，
申请(专利权)人：安吉康尔深圳科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44