一种基于血痕miRNA的年龄预测方法技术

本发明专利技术提供了一种基于血痕miRNA的年龄预测方法，属于基因工程技术领域，包括：裂解血痕样本，得到裂解液；将裂解液与氯仿混合、离心，得到水相；将水相与检测外参、异丙醇混合、离心，得到miRNA；将miRNA逆转录为cDNA，将所述cDNA进行荧光定量PCR，计算miRNA的表达量；按照公式年龄＝22.578×log10miR‑374c‑5p表达量‑12.18×log10miR‑32‑3p表达量‑7.268×log10miR‑32‑5p表达量+27.64。本发明专利技术检测灵敏度高，仅需要5mm

An age prediction method based on miRNA of bloodstain

【技术实现步骤摘要】
一种基于血痕miRNA的年龄预测方法
本专利技术属于基因工程
，尤其涉及一种基于血痕miRNA的年龄预测方法。
技术介绍
个体年龄推断是法医物证领域研究的重要组成部分，是决定案件性质和当事人是否承担刑事责任的重要标准。目前针对年龄预测的方法主要以骨龄，牙龄推断为主，但这些方法难以适用于痕量降解物证。同时目前年龄预测范围主要集中在青少年时期，对中老年预测存在一定难度。其他基于表观遗传学的年龄预测方法如DNA甲基化，则存在所需模板量大，使用方法繁琐，如需要做重亚硫酸氢盐转化，导致实验时间长，难以满足公安司法领域快速检测的需求。目前亟需建立更为精准的年龄推断方法。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度为16～22个核苷酸的内源性单链非编码RNA，作为重要的转录因子参与生命活动的调控，与衰老存在密切的相关性。近年来已经报道多种miRNA在衰老过程中发挥重要作用，NorenHooten研究发现美国老年个体的外周血单核细胞中包括mir-103，mir-107，mir-128等多种miRNA表达下调。此外，Elsharawy研究了本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于血痕miRNA的年龄预测方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)将血痕样本与Trizol试剂混合、震荡裂解，得到裂解液；/n所述血痕样本的面积不少于5mm

【技术特征摘要】
1.一种基于血痕miRNA的年龄预测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将血痕样本与Trizol试剂混合、震荡裂解，得到裂解液；
所述血痕样本的面积不少于5mm2；
所述血痕样本的面积与Trizol试剂的体积比为1cm2:1ml；
2)将所述步骤1)得到的裂解液静置15min后，与氯仿混合、静置2～3min后进行第一离心，得到水相；
所述第一离心的时间为15min；
3)将所述步骤2)得到的水相与检测外参cel-MiR-39、异丙醇混合，得到混合液，将所述混合液静置10min后进行第二离心，得到miRNA；
所述第二离心的时间为10min；
4)将所述步骤3)得到的miRNA逆转录为cDNA，将所述cDNA进行荧光定量PCR，得到miRNA中miR-374-5p、miR-32-5p和miR-32-3p的Ct值，得到cel-miR-39的Ct值；
所述miR-374-5p、miR-32-5p和miR-32-3p的Ct值分别减去cel-miR-39的Ct值，得到miR-374-5p、miR-32-5p和miR-32-3p的△Ct值，按照公式计算miR-374-5p、miR-32-5p和miR-32-3p的表达量，得到miR-374-5p表达量、miR-32-5p表达量和miR-32-3p表达量；
所述miR-374-5p、miR-32-5p和miR-32-3p的△Ctcontrol分别为16.015、16和18.814；
5)按照以下公式预测年龄，年龄＝22.578×log10miR-374c-5p表达量-12.18×log10miR-32-3p表达量-7.268×log10miR-32-5p表达量+27.64。


2.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：方晨，武会娟，严江伟，刘旭，钱嘉林，李宝明，田彦捷，刘文丽，张小莉，
申请(专利权)人：北京市理化分析测试中心，
类型：发明
国别省市：北京;11