线粒体基因组9bp序列基因多态性在评价苯中毒风险中的应用制造技术

本发明专利技术公开了线粒体基因组9bp序列基因多态性在评价苯中毒风险中的应用。本发明专利技术公开了用于检测线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的物质在制备评价慢性苯中毒风险性的产品中的应用；“2个串联重复的9bp序列”如序列表的序列1所示；“2个串联重复的9bp序列的缺失型”为所述“2个串联重复的9bp序列”缺失了第1至9个核苷酸。实验证明，线粒体基因组DNA中具有“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的个体发生慢性苯中毒的风险高于线粒体基因组DNA中具有“2个串联重复的9bp序列”的个体”。“2个串联重复的9bp序列的缺失型”可用于评价慢性苯中毒的风险性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及线粒体基因组9bp序列基因多态性在评价苯中毒风险中的应用。
技术介绍
近年来，苯及苯系物中毒病例报道逐年上升，苯中毒后致白血病死亡病例也逐年上升，危害非常严重。研究表明，苯中毒主要是中间活性代谢产物作用于线粒体通过氧化损伤引起的。慢性苯中毒的发生除了与苯的接触浓度有关，还与接触者的遗传易感性有关。线粒体细胞色素C氧化酶亚单位II基因(简称MTCO2基因)和线粒体tRNA赖氨酸基因(简称MTTK基因)间的小片段非编码序列含有2个串联重复的9bp序列(核苷酸序列为：5′-CCCCCTCTACCCCCTCTA-3′)，其还存在插入/缺失多态性：3个串联重复的9bp序列即为插入型(核苷酸序列为：5′-CCCCCTCTACCCCCTCTACCCCCTCTA-3′)，1个9bp序列即为缺失型(核苷酸序列为：5′-CCCCCTCTA-3′)。缺失型与多种遗传疾病的发生有关，但未见与苯中毒的发生相关的报道。血小板的主要细胞器之一是线粒体，线粒体是其唯一具有遗传功能的细胞器，血小板线粒体相对白细胞线粒体DNA它不受人类染色体其它同源序列基因的干扰，提取血小板的基因组DNA可对线粒体基因组DNA进行分析更有优势。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何评价待测者从事苯暴露工作时发生慢性苯中毒的风险性的高低。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了用于检测线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的物质在制备评价慢性苯中毒风险性的产品中的应用。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了用于检测线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的物质在评价慢性苯中毒风险性中的应用。如果线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”，待测者慢性苯中毒风险性较低。如果线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列的缺失型”，待测者慢性苯中毒风险性较高。线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”的待测者慢性苯中毒风险性低于线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的待测者。上述应用中，所述“用于检测线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的物质”可为特异引物对，所述特异引物对由引物F和引物R组成；所述引物F可为如下a1)或a2)：a1)序列表的序列2所示的单链DNA分子；a2)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物R可为如下a3)或a4)：a3)序列表的序列3所示的单链DNA分子；a4)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子。本领域普通技术人员可以很容易地采用已知的方法，例如定向进化和点突变的方法，对本专利技术提供的引物F和引物R的核苷酸序列进行突变。那些经过人工修饰的，具有与本专利技术设计的引物F和引物R的核苷酸序列具有85％或者更高同一性的核苷酸，且具有相同功能，均是衍生于本专利技术的核苷酸序列并且等同于本专利技术的序列。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了一种评价慢性苯中毒风险性的产品。本专利技术所提供的评价慢性苯中毒风险性的产品，可包括用于检测线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的物质。上述产品中，所述“包括用于检测线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的物质”可为所述特异引物对。所述产品还可包括记载有判断标准的载体。所述判断标准为判断标准甲或判断标准乙。判断标准甲：如果线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”，待测者慢性苯中毒风险性较低；如果线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列的缺失型”，待测者慢性苯中毒风险性较高。判断标准乙：线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”的待测者慢性苯中毒风险性低于线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的待测者。上述任一所述的产品的制备方法也属于本专利技术的保护范围。上述任一所述的产品的制备方法可包括将上述任一所述特异引物对中的各引物分别单独包装的步骤。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了评价待测者发生慢性苯中毒的风险性的方法。本专利技术所提供的评价待测者发生慢性苯中毒的风险性的方法为方法一，具体可包括如下步骤：检测待测者线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”；如果线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”，待测者慢性苯中毒风险性较低；如果线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列的缺失型”，待测者慢性苯中毒风险性较高。本专利技术所提供的评价待测者发生慢性苯中毒的风险性的方法为方法二，具体可包括如下步骤：检测待测者线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”；线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”的待测者慢性苯中毒风险性低于线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的待测者。“2个串联重复的9bp序列”或“2个串联重复的9bp序列的缺失型”作为标记物在评价慢性苯中毒风险性中的应用也属于本专利技术的保护范围。所述特异引物对也属于本专利技术的保护范围。所述特异引物对在评价慢性苯中毒风险性中的应用也属于本专利技术的保护范围。所述特异引物对在制备用于评价慢性苯中毒风险性的试剂盒中的应用也属于本专利技术的保护范围。本专利技术所提供的评价待测者发生慢性苯中毒的风险性的方法为方法三，具体可包括如下步骤：以待测者的线粒体基因组DNA为模板，采用所述特异引物对进行PCR扩增；PCR扩增产物为738bp的待测者慢性苯中毒风险性较低，PCR扩增产物为729bp的待测者慢性苯中毒风险性较高。本专利技术所提供的评价待测者发生慢性苯中毒的风险性的方法为方法四，具体可包括如下步骤：以待测者的线粒体基因组DNA为模板，采用所述特异引物对进行PCR扩增，PCR扩增产物为738bp的待测者慢性苯中毒风险性低于PCR扩增产物为729bp的待测者。上述任一所述高于可为在统计学上的高于。上述任一所述低于可为在统计学上的低于。上述任一所述“2个串联重复的9bp序列”可如序列表的序列1所示；上述任一所述“2个串联重复的9bp序列的缺失型”可为所述“2个串联重复的9bp序列”缺失了第1至9个核苷酸。上述任一所述“2个串联重复的9bp序列的缺失型”可如序列表的序列1自5′末端起第10至18位所示。上述任一所述慢性苯中毒为职业性慢性苯中毒。以27名慢性苯中毒的患者作为病例组，以40名正常健康体检者作为对照组，对其线粒体基因组进行研究。结果表明，病例组中具有“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的比例(33.3％)显著高于对照组(10.0％)，且两者的差异有统计学意义(χ2＝5.090，P＝0.024)，OR值(95％CI)为4.5(1.21-16.62)。因此，线粒体基因组DNA中具有“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的个体发生慢性苯中毒的风险高于线粒体基因组DNA中具有“2个串联重复的9bp序列”的个体发生慢性苯中毒的风险。因此，“2个串联重复的9bp序列的缺失型”与慢性苯中毒风险性有密切联系，可评价慢性苯中毒的风险性。附图说明图1为对照组的测序结果。图2为病例组的测序结果本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的物质在制备评价慢性苯中毒风险性的产品中的应用；所述“2个串联重复的9bp序列”如序列表的序列1所示；所述“2个串联重复的9bp序列的缺失型”为所述“2个串联重复的9bp序列”缺失了第1至9个核苷酸。

【技术特征摘要】
1.用于检测线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的物质在制备评价慢性苯中毒风险性的产品中的应用；所述“2个串联重复的9bp序列”如序列表的序列1所示；所述“2个串联重复的9bp序列的缺失型”为所述“2个串联重复的9bp序列”缺失了第1至9个核苷酸。2.用于检测线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的物质在评价慢性苯中毒风险性中的应用；所述“2个串联重复的9bp序列”如序列表的序列1所示；所述“2个串联重复的9bp序列的缺失型”为所述“2个串联重复的9bp序列”缺失了第1至9个核苷酸。3.一种评价慢性苯中毒风险性的产品，包括用于检测线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的物质；所述“2个串联重复的9bp序列”如序列表的序列1所示；所述“2个串联重复的9bp序列的缺失型”为所述“2个串联重复的9bp序列”缺失了第1至9个核苷酸。4.如权利要求1或2所述的应用、或、权利要求3所述的产品，其特征在于：所述“用于检测线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”的物质”为权利要求7所述特异引物对。5.一种评价待测者发生慢性苯中毒的风险性的方法，包括如下步骤：检测待测者线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”还是“2个串联重复的9bp序列的缺失型”；线粒体中具有“2个串联重复的9bp序列”...

【专利技术属性】
技术研发人员：王佃鹏，杨祥丽，林大枫，李培茂，张志敏，张艳芳，黄先青，
申请(专利权)人：深圳市职业病防治院，
类型：发明
国别省市：广东;44