一种从基因工程水稻种子中分离纯化低铁饱和度的重组人乳铁蛋白的方法技术

本发明专利技术的目的是提供一种从基因工程水稻种子中分离纯化低铁饱和度的重组人乳铁蛋白(OsrhLF)的方法。首先从重组人乳铁蛋白基因工程水稻种子中提取含有重组乳铁蛋白的粗提取物，提取缓冲液包含50～100mM柠檬酸‑柠檬酸三钠、100～200mMNaCl，1～10mM EDTA‑2Na，pH为3.8～5.0；再将所得含有重组人乳铁蛋白的粗提取物经阳离子层析，获得纯度＞95％的低铁饱和度乳铁蛋白产品。本发明专利技术的另一目的是提供一种从基因工程水稻中种子中提取低铁饱和度的重组人乳铁蛋白(OsrhLF)的方法，使用的提取液含有柠檬酸‑柠檬酸三钠和EDTA‑2Na，可显著降低提取OsrhLF的铁饱和度。

A method for purification of recombinant human lactoferrin with low iron saturation from genetically engineered rice seeds

【技术实现步骤摘要】
一种从基因工程水稻种子中分离纯化低铁饱和度的重组人乳铁蛋白的方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种从基因工程水稻种子中分离纯化低铁饱和度的重组人乳铁蛋白的方法。
技术介绍
乳铁蛋白(LF)是一种非血红素铁结合糖蛋白，广泛存在于哺乳动物的外分泌液中，是人体防止感染的第一道防线，具有广谱抗菌作用，可以作用于细菌、真菌、原生动物、病毒。乳铁蛋白主要有“铁剥夺”、膜渗透、酶抑制及辅助抗菌等4种抑菌机制。(1)铁剥夺机制。几乎所有的细菌生长都需要铁，铁离子对细菌中的氧化酶是必须的。乳铁蛋白作为一种铁结合蛋白，可以与微生物竞争性的结合铁离子，从而使得微生物失去赖以生存的铁离子，进而导致微生物的死亡。这种依赖于铁的抑菌机制中，乳铁蛋白的活性取决于铁离子的饱和程度。一般来说，饱和度越低，抑菌活性越高。(2)膜渗透机制。乳铁蛋白带正电荷，与带负电荷的磷脂、核酸和脂多糖具有很强的亲和性，从而导致脂多糖的释放，进而破坏细菌的细胞质膜。(3)酶抑制机制。研究表明，乳铁蛋白对半胱氨酸蛋白酶有强烈的抑制作用，而半胱氨酸蛋白酶抑制剂可有效抑制金黄色葡萄球菌的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从基因工程水稻种子中分离纯化低铁饱和度的重组人乳铁蛋白的方法，依次包含以下步骤：/n1)从重组人乳铁蛋白基因工程水稻种子中提取含有重组人乳铁蛋白的粗提取物，提取缓冲液包含50～100mM柠檬酸-柠檬酸三钠、100～200mMNaCl，1～10mM EDTA-2Na，pH为3.5～5.0；/n2)将步骤1)所得含有重组人乳铁蛋白的粗提取物经阳离子层析，获得纯度＞95％的低铁饱和度人乳铁蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种从基因工程水稻种子中分离纯化低铁饱和度的重组人乳铁蛋白的方法，依次包含以下步骤：
1)从重组人乳铁蛋白基因工程水稻种子中提取含有重组人乳铁蛋白的粗提取物，提取缓冲液包含50～100mM柠檬酸-柠檬酸三钠、100～200mMNaCl，1～10mMEDTA-2Na，pH为3.5～5.0；
2)将步骤1)所得含有重组人乳铁蛋白的粗提取物经阳离子层析，获得纯度＞95％的低铁饱和度人乳铁蛋白。


2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤1)所述重组人乳铁蛋白粗提取物提取方法包括步骤：
i)将含有重组人乳铁蛋白的基因工程稻米粉碎后与提取缓冲液按重量/体积比(kg/L)＝1:5混合，在15～35℃下提取1～24小时；
ii)将步骤i)的提取混合物过滤后调节pH至4.0～5.0，获得阳离子层析的上样液。


3.根据权利要求1或2所述的方法，所述提取液pH为3.8～5.0。


4.根据权利要求1或2所述的方法，从重组人乳铁蛋白基因工程水稻种子中提取含有重组人乳铁蛋白的温度为20～30℃。


5.根据权利要求1或2所述的方法，从重组人乳铁蛋白基因工程水稻种子中提取含有重组人乳铁蛋白的时间为5～24h。


6.根据权利要求1或2所述的方法，步骤2)中阳离子层析上样液的pH为5.0。


7.根据权利要求1所述的方法，阳离子层析介质选择使用SPBestaroseBigBeads填料。


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【专利技术属性】
技术研发人员：杨代常，董亮亮，
申请(专利权)人：武汉禾元生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42