一种对乙醇诱导损伤肝细胞具有保护作用的乳铁蛋白修饰肽的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种对乙醇诱导损伤肝细胞具有保护作用的乳铁蛋白修饰肽的制备方法，（1）称取乳铁蛋白，配制乳铁蛋白溶液；（2）向乳铁蛋白溶液中添加胃蛋白酶进行水解；（3）加热灭活蛋白酶，终止水解，冷却，离心制得乳铁蛋白水解物溶液；（4）真空冷冻干燥乳铁蛋白水解物溶液；（5）配制乳铁蛋白水解物溶液；（6）向乳铁蛋白水解物溶液中添加酪氨酸；（7）向乳铁蛋白水解物溶液中添加胃蛋白酶进行水解；（8）加热灭活蛋白酶，终止水解，冷却，离心制得乳铁蛋白水解物的类蛋白反应修饰肽溶液；（9）真空冷冻干燥制得乳铁蛋白水解物的类蛋白反应修饰肽。该乳铁蛋白水解物酪氨酸修饰物，具有可食用性、安全性和易被人体吸收的优点。

Preparation and application of lactoferrin modified peptide with protective effect on ethanol induced hepatocyte injury

【技术实现步骤摘要】
一种对乙醇诱导损伤肝细胞具有保护作用的乳铁蛋白修饰肽的制备方法及应用
本专利技术涉及一种对乙醇诱导损伤肝细胞具有保护作用的乳铁蛋白修饰肽的制备方法及应用，属于生物活性肽的制备及保健食品
技术背景酒精性肝病是由于乙醇摄入过量从而给肝脏带来一定的损伤并且引起一系列并发症，是患者无能为力的一种疾病。据统计，目前全世界范围内的酒精性肝病的发病率占87%，其中，欧美地区的发病率高于亚洲。而我国的酒精性肝病的发病率是50%。目前，临床药物治疗主要采用己酮可可碱（PTX）、糖皮质激素、抗肿瘤坏死基因α-抗体、抗氧化剂和阿坎酸等。而这些可以有效的治疗但是长期服用易引起糖尿病和其它并发症。因此，十分有必要制备一种天然食物来源、无毒副作用、且对肝细胞生长有积极保护和促进作用的功能性食品或保健品。乳铁蛋白肽（LFcin）是乳铁蛋白经胃蛋白酶水解得到的一种生物活性明显增强的多肽。其中，牛乳铁蛋白肽（LFcinB）是牛乳铁蛋白经过胃蛋白酶水解从N-端释放的含有25个氨基酸残基的多肽。LFcinB最早被分离出来，后来人们从不同物种中得到了不同来本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对乙醇诱导损伤肝细胞具有保护作用的乳铁蛋白修饰肽的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包含以下步骤：/n步骤一：称取乳铁蛋白，用去离子水配制成溶液；/n步骤二：向乳铁蛋白溶液中添加胃蛋白酶，调节体系pH值，在37℃的温度下水解4-8小时；/n步骤三：水解结束后，立即将水解溶液加热至80 ℃、 15 分钟，使蛋白酶灭酶、终止反应；冰水浴冷却后，离心、收集上清液，得到乳铁蛋白水解物溶液；/n步骤四：通过真空冷冻干燥处理乳铁蛋白水解物溶液，冻干，于 -20 ℃ 保存；/n步骤五：配制一定浓度的乳铁蛋白水解物溶液；/n步骤六：添加一定量的酪氨酸；/n步骤七：添加胃蛋白酶进行水解，调节体系的pH...

【技术特征摘要】
1.一种对乙醇诱导损伤肝细胞具有保护作用的乳铁蛋白修饰肽的制备方法，其特征在于：所述的制备方法包含以下步骤：
步骤一：称取乳铁蛋白，用去离子水配制成溶液；
步骤二：向乳铁蛋白溶液中添加胃蛋白酶，调节体系pH值，在37℃的温度下水解4-8小时；
步骤三：水解结束后，立即将水解溶液加热至80℃、15分钟，使蛋白酶灭酶、终止反应；冰水浴冷却后，离心、收集上清液，得到乳铁蛋白水解物溶液；
步骤四：通过真空冷冻干燥处理乳铁蛋白水解物溶液，冻干，于-20℃保存；
步骤五：配制一定浓度的乳铁蛋白水解物溶液；
步骤六：添加一定量的酪氨酸；
步骤七：添加胃蛋白酶进行水解，调节体系的pH，在37℃的温度下水解6-12h；
步骤八：反应结束后，立即将溶液加热至80℃、15分钟，使蛋白酶灭酶，乳铁蛋白水解物的类蛋白反应修饰产物通过真空冷冻干燥，冻干，于-20℃保存，得到对酒精诱导损伤的肝细胞具有保护作用的乳铁蛋白水解物的类蛋白反应修饰肽。


2.根据权利要求1所述的对乙醇诱导损伤肝细胞具有保护作用的乳铁蛋白修饰肽的制备方法，其特征在于：步骤一中乳铁蛋白溶液的质量浓度为5%（w/w）。


3.根据权利要求1所述的对乙醇诱导损伤肝细胞具有保护作用的乳铁蛋白修饰肽的制备方法，其特征在于：步骤二中添加胃蛋白酶水解乳铁蛋白，所述胃蛋白酶的添加量为0.75千活力单位/克蛋白质，调节体系pH值为2.5-3.0，水解时间为4-8小时。


4.根据权利要求1所述的对乙醇诱导损伤肝细胞具有保护作用的乳铁蛋白修饰肽的制备方法，其特征在于：步骤三中离心处理收集上清液的离心转速为12,000×g，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：薄力影，宋春丽，谭科，张慧君，孙天颖，任健，
申请(专利权)人：齐齐哈尔大学，
类型：发明
国别省市：黑龙;23