卵转铁蛋白抗菌肽及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种卵转铁蛋白抗菌肽及其制备方法。该方法将卵转铁蛋白热处理后胃蛋白酶水解，分离，纯化鉴定得到3条高活性抗菌肽。本发明专利技术通过加热的方法对蛋白做预处理，为胃蛋白酶水解得到高活性小分子抗菌肽奠定了良好的底物基础；同时采用弱阳离子色谱柱和反向液相色谱柱分离纯化，有利于获得抗菌活性高的肽序列，可应用于食品工业和医学领域。

Ovotransferrin antibacterial peptide and its preparation

【技术实现步骤摘要】
卵转铁蛋白抗菌肽及其制备方法
本专利技术属于生物活性肽提取
，具体而言，涉及一种卵转铁蛋白抗菌肽及其制备方法。
技术介绍
鸡蛋是生物活性蛋白的重要来源，它含有卵清蛋白、卵转铁蛋白、卵粘蛋白、卵球蛋白和溶菌酶等。卵转铁蛋白的分子量为76kDa，具有686个氨基酸残基和铁结合糖蛋白，占蛋清蛋白的12％。它由两个大小相似的球状小叶(N和C小叶)组成，每个小叶分为两个域(N中的域N1和N2-叶和C-叶中的C1和C2域)。近年来，已经报道了卵转铁蛋白各种生理益处，如抗菌、免疫调节、抗癌、抗病毒和抗氧化特性以及血管紧张素转化酶抑制活性。卵转铁蛋白在消化或加工过程中被降解为肽，这些生物活性肽对人类健康有积极的影响。近年来，许多研究集中于从卵转铁蛋白分离和鉴定肽及其生物学活性。例如：卵转铁蛋白被嗜热菌蛋白酶和胃蛋白酶水解，最有效的抗氧化肽序列被鉴定出来，这些肽比整个蛋白质有更高的氧自由基吸收能力。此外，还证明了带有儿茶素的卵转铁蛋白肽增强了氧自由基吸收能力。卵转铁蛋白水解物作为体外抗氧化剂时显示出抗氧化应激的保护作用和明显的超氧阴离子清除活性。除本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗菌肽，其特征在于，该抗菌肽的氨基酸序列如序列表中如SEQ ID NO.1所示、SEQ ID NO.2或如SEQ ID NO.3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗菌肽，其特征在于，该抗菌肽的氨基酸序列如序列表中如SEQIDNO.1所示、SEQIDNO.2或如SEQIDNO.3所示。


2.根据权利要求1所述的抗菌肽，其特征在于，其由卵转铁蛋白作为底物酶解获得。


3.一种根据权利要求1所述抗菌肽的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
(1)卵转铁蛋白的预处理
将卵转铁蛋白配制成1％～5％的溶液，在60～80℃的水浴中加热10～30min，并不断搅拌，然后冷却到35～40℃；
(2)胃蛋白酶酶解
将预处理得到的蛋白溶液调节pH为1.9～2.1，加入的胃蛋白酶，在35～40℃下酶解100～200min制得蛋白酶解物，离心后取上清液冷冻干燥，备用；
(3)弱阳离子柱分离纯化
将冷冻干燥的卵转铁蛋白酶解物溶解在醋酸缓冲液中，然后添加到150系统的HiTrapCMFF离子交换色谱柱上，用4～6倍柱体积的醋酸缓冲液平衡该柱，然后进行线性洗脱，其中A液为乙酸缓冲液，B液为含1M氯化钠的乙酸缓冲液，收集各组分的洗脱液，冷冻干燥，备用；
(4)反向液相分离纯化
使用反相高效液相色谱系统，色谱柱为ZORBAXC18，4.6mm×250mm...

【专利技术属性】
技术研发人员：金永国，付星，马斌，马美湖，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42