一种八仙花多糖治疗心肌肥大的医药用途制造技术

本发明专利技术公开了一种八仙花多糖治疗心肌肥大的医药用途，该八仙花多糖为八仙花Hydrangea macrophylla叶中的多糖，制备方法已在先前申请的专利中公开。本发明专利技术发现，八仙花多糖可有效改善心肌肥大模型中心肌细胞的肥大程度，且对心肌肥大模型中的心肌细胞具有保护作用，提高其存活率，具有开发成治疗心肌肥大药物的前景。

Medical application of baxianhua polysaccharide in the treatment of cardiac hypertrophy

【技术实现步骤摘要】
一种八仙花多糖治疗心肌肥大的医药用途
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种八仙花多糖治疗心肌肥大的医药用途。
技术介绍
心肌肥大是心力衰竭、猝死等心血管事件的独立危险因素。因此，减轻心肌肥大是临床研究和基础研究亟需解决的热点。专利技术人在先前申请的专利中公开了一种具有拮抗心肌缺血再灌注损伤作用的八仙花多糖(申请号：2019112209788；专利技术名称：一种八仙花多糖及治疗心肌缺血再灌注损伤的用途)。专利技术人陆续发现了八仙花多糖新的药理活性，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术是为了提供一种八仙花多糖治疗心肌肥大的医药用途。本专利技术技术方案如下：一种八仙花多糖治疗心肌肥大的医药用途，该八仙花多糖通过如下方法制备：收集八仙花Hydrangeamacrophylla叶，洗净，阴干，粉碎，用去离子水热回流提取，过滤，滤液减压浓缩，离心收集上清液，加入三倍体积无水乙醇，混匀、静置醇析，收集沉淀，用去离子水复溶，按照同样的方法重复离心、醇沉一次，收集沉淀，无水乙醇、丙酮洗涤，去离子水复溶，Sevag法脱蛋白，冷冻干燥。优选地，制备八仙花多糖时，热回流提取3次，每次1.5h。优选地，制备八仙花多糖时，每次静置醇析12h。优选地，制备八仙花多糖时，离心条件为5000r/min转速离心15min。有益的技术效果：本专利技术发现，八仙花多糖可有效改善心肌肥大模型中心肌细胞的肥大程度，且对心肌肥大模型中的心肌细胞具有保护作用，提高其存活率，具有开发成治疗心肌肥大药物的前景。附图说明图1为各组大鼠心肌细胞中肥大标志基因ANP、BNP和β-MHC的表达水平。具体实施方式下面结合附图具体介绍本专利技术实质性内容，但本领域技术人员应当知道并不以下述内容限定本专利技术保护范围。实施例1：提取纯化实验收集八仙花Hydrangeamacrophylla叶，洗净，阴干，粉碎，取粉末1kg，加10L去离子水，热回流提取3次，每次1.5h，合并提取液，过滤，减压浓缩至3L，于5000r/min转速离心15min，收集上清液，加入三倍体积无水乙醇，混匀、静置醇析12h，收集沉淀，用3L去离子水复溶，于5000r/min转速离心15min，收集上清液，按照同样的方法重复醇沉一次，收集沉淀，无水乙醇、丙酮洗涤，去离子水复溶，Sevag法脱蛋白，冷冻干燥。最终收集得到21.8g多糖，苯酚-硫酸法测定多糖纯度为92.5％。实施例2：药理活性实验1、H9c2心肌细胞培养、分组、造模和给药取对数生长期的H9c2细胞，消化，用含10％FBS和1％双抗的高糖DMEM培养基调整细胞密度为1.5×104个/mL，接种于多块6孔板中，每孔加2mL，于5％CO2、37℃细胞培养箱中培养24h，更换为无血清、含1％双抗的高糖DMEM培养基饥饿培养12h后，随机分为对照组、模型组、低剂量药物组和高剂量药物组，每组3个复孔。使用本领域惯用的血管紧张素Ⅱ刺激法制备心肌细胞肥大模型，模型组更换为含有1μM血管紧张素Ⅱ、10％FBS和1％双抗的高糖DMEM培养基继续培养，低剂量药物组更换为含有1μM血管紧张素Ⅱ、10μg/mL八仙花多糖、10％FBS和1％双抗的高糖DMEM培养基继续培养，高剂量药物组更换为含有1μM血管紧张素Ⅱ、20μg/mL八仙花多糖、10％FBS和1％双抗的高糖DMEM培养基继续培养，对照组更换为新鲜的含10％FBS和1％双抗的高糖DMEM培养基继续培养。继续培养48h后，收集细胞进行相关指标检测。2、心肌细胞肥大标志基因表达水平的测定使用RT-PCR法测定各组心肌细胞中肥大标志基因心钠肽心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)的表达水平，具体为：收集细胞，洗涤，裂解，Trizol法提取总RNA，琼脂糖凝胶电泳检测RNA的质量，反转录为cDNA并通过PCR扩增，引物如下。反应条件：95℃、5min，循环时95℃15s、60℃30s，循环40次，4℃终止保存。电压120V下电泳20min，紫外分析仪下拍照分析。3、MTT法测定八仙花多糖对心肌肥大模型中H9c2心肌细胞存活率的影响取对数生长期的H9c2细胞，消化，用含10％FBS和1％双抗的高糖DMEM培养基调整细胞密度为3×104个/mL，接种于96孔板中，每孔加100μL，于5％CO2、37℃细胞培养箱中培养24h，更换为无血清、含1％双抗的高糖DMEM培养基饥饿培养12h后，随机分为对照组、模型组、低剂量药物组和高剂量药物组，每组3个复孔。模型组更换为含有1.5μM血管紧张素Ⅱ、10％FBS和1％双抗的高糖DMEM培养基继续培养，低剂量药物组更换为含有1.5μM血管紧张素Ⅱ、10μg/mL八仙花多糖、10％FBS和1％双抗的高糖DMEM培养基继续培养，高剂量药物组更换为含有1.5μM血管紧张素Ⅱ、20μg/mL八仙花多糖、10％FBS和1％双抗的高糖DMEM培养基继续培养，对照组更换为新鲜的含10％FBS和1％双抗的高糖DMEM培养基继续培养。继续培养72h后，每孔加入20μL浓度为5mg/mL的MTT溶液，继续孵育4h，终止培养，离心并小心吸弃各孔上清液，每孔加入150μLDMSO，震荡15分钟，充分溶解结晶物，最后测定溶解液于570nm波长处吸光度OD值，根据公式计算存活率。实验重复3次取平均值。存活率(％)＝模型组或药物组OD值/对照组OD值×100％。4、统计学方法采用SPSS19.0分析数据，计量资料以均值±SD表示，组间两两比较用LSD-t检验，以P＜0.05代表差异有统计学意义。二、实验结果1、各组H9c2心肌细胞中肥大标志基因表达水平结果如图1所示，与对照组相比，模型组心肌细胞中ANP、BNP和β-MH表达水平显著升高，说明造模成功；与模型组相比，低剂量药物组、高剂量药物组心肌细胞中ANP、BNP和β-MH表达水平显著降低，且高剂量药物组降低更明显，说明八仙花多糖可以显著降低心肌肥大模型中H9c2心肌细胞肥大标志基因的表达水平。本领域技术人员知道，ANP、BNP、β-MHC为心肌肥厚胚胎基因，促使心肌蛋白合成增加、心肌细胞体积增大、成纤维细胞增生，从而导致心肌肥厚(CardiacSERCA2A/B:Therapeutictargetsforheartfailure；Europeanjournalofpharmacology2014；724；1-8.)2、八仙花多糖对心肌肥大模型中H9c2心肌细胞存活率的影响结果如表1所示，与对照组相比，模型组心肌细胞存活率显著降低，与模型组相比，低剂量药物组、高剂量药物组心肌细胞存活率显著升高，且高剂量药物组升高更明显，说明八仙花多糖可以显著增强心肌肥大模型中心肌细胞的存活率。表1模型组和药物组H9c2心肌细胞存活率(％)上述实施表明，八仙花多糖可有效改善心肌肥大模型本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种八仙花多糖治疗心肌肥大的医药用途，该八仙花多糖通过如下方法制备：收集八仙花Hydrangea macrophylla叶，洗净，阴干，粉碎，用去离子水热回流提取，过滤，滤液减压浓缩，离心收集上清液，加入三倍体积无水乙醇，混匀、静置醇析，收集沉淀，用去离子水复溶，按照同样的方法重复离心、醇沉一次，收集沉淀，无水乙醇、丙酮洗涤，去离子水复溶，Sevag法脱蛋白，冷冻干燥。/n

【技术特征摘要】
1.一种八仙花多糖治疗心肌肥大的医药用途，该八仙花多糖通过如下方法制备：收集八仙花Hydrangeamacrophylla叶，洗净，阴干，粉碎，用去离子水热回流提取，过滤，滤液减压浓缩，离心收集上清液，加入三倍体积无水乙醇，混匀、静置醇析，收集沉淀，用去离子水复溶，按照同样的方法重复离心、醇沉一次，收集沉淀，无水乙醇、丙酮洗涤，去离子水复溶，Sev...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴海靖，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：吴海靖，
类型：发明
国别省市：江苏;32