黄芩苷联合白术多糖上调Treg细胞治疗免疫性复发性流产的用途制造技术

本发明专利技术提供黄芩苷联合白术多糖上调Treg细胞治疗免疫性复发性流产的用途，涉及黄芩苷和白术多糖的用途，包括黄芩苷和/或白术多糖的药物组合刺激Naïve CD4(+)T细胞促进Treg细胞表达的水平；和/或；黄芩苷和/或白术多糖降低胚胎吸收率；黄芩苷联合白术多糖的药物组合刺激Naïve CD4(+)T细胞促进Treg细胞表达的水平，本发明专利技术提供了一种中药单体与多糖化合物的组合，即黄芩苷和白术多糖，验证该药物组合在增加免疫耐受方面的作用，以及证实其在治疗免疫性RSA中的用途。本发明专利技术运用黄芩苷和白术多糖刺激Naïve CD4(+)T细胞，分析其促进Treg细胞表达的水平，确定黄芩苷白术多糖治疗免疫性RSA的最佳剂量配比。

The use of baicalin combined with Atractylodes polysaccharide to up regulate Treg cells in the treatment of immune recurrent abortion

【技术实现步骤摘要】
黄芩苷联合白术多糖上调Treg细胞治疗免疫性复发性流产的用途
本专利技术属于医药领域，涉及黄芩苷和白术多糖的用途，具体涉及黄芩苷和白术多糖在制备促Treg细胞增殖活化的药物中的用途。
技术介绍
复发性流产(recurrentspontaneousabortion,RSA)是指连续发生2次或2次以上孕20周之前的流产，在中医古籍中称为“胎漏”、“胎动不安”及“滑胎”。生育年龄妇女中复发性流产的发生率为1％～5％，其中50％～60％归因于免疫因素。免疫性RSA是指母胎间免疫排斥所导致的反复流产，表现为缺乏免疫耐受，发病率相当高，且发病率有逐年升高的趋势，严重影响妇女生殖健康。现代医学对于免疫性RSA主要采用淋巴细胞主动免疫法，治疗手段单一，操作复杂，需提取患者配偶外周血淋巴细胞，少量多次注射到患者体内，产生免疫耐受，患者的依从性差，有时不能完成整个疗程。因此寻找有效方便的疗法，已成为迫切需要解决的难题。中医药保胎有上千年的历史，提供了良好的保健服务，是中医妇科学中颇有优势和特色的治法之一。古代针对复发性流产的方剂颇多，如当归散、泰山磐石散、胎元饮等，取得了显著的临床疗效，流传至今。但中药复方成分复杂，配伍后相互作用位点不一，找到其精确的作用机制比较困难，限制了中医复方走向标准化、国际化及进一步推广应用。药对是临床用药中相对固定的2味中药的配伍形式，是单味中药与复方之间的桥梁，是配伍的基础，在经典中药复方中，往往含有一组乃至数组药对。采用数据挖掘技术对中医治疗滑胎(RSA)文献进行分析，在常用的27种保胎中药中，清热安胎的黄芩居使用频率第1位，且黄芩白术配伍使用频率较高。复发性流产患者主要证型为脾肾两虚型，白术是治疗脾肾两虚型方剂中使用频率第一位的药物，达7.53％；也是治疗RSA所有证型方剂中的核心药物。国医大师夏桂成教授认为黄芩白术两药相配，一补一泻,一温一寒,相互制约，使气血平和,胎动自安，将此作为常用药对之一。单味中药的成分众多，难以找到其精确的作用位点，近年来兴起的中药主要成分的药理作用及机制研究是目前研究中药有效成分的主要方法。黄芩苷(Baicalin)是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物。白术多糖(RhizomaAtractylodisMacrocephalaepolysaccharide,RAMP)是从白术根茎中提取的多糖类物质，是白术的主要活性成分之一。研究表明黄芩苷和白术多糖分别是黄芩、白术的主要免疫相关药效物质基础，均对免疫功能有调节作用，但目前研究主要集中在抗凋亡和免疫激活等方面，对二者在调节免疫促进免疫耐受治疗免疫性RSA方面鲜有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的黄芩苷联合白术多糖上调Treg细胞治疗免疫性复发性流产的用途。因此，本专利技术的目的之一在于提供黄芩苷和白术多糖的一种新用途，具体来说是黄芩苷和白术多糖可作为增加免疫耐受治疗免疫性RSA的药物。本专利技术的另一个目的是探讨机体免疫失衡导致免疫性RSA发生的可能分子机制，提供一种通过促进Treg细胞表达，增加机体免疫耐受，治疗免疫性RSA的中药组合。为实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：(1)黄芩苷和白术多糖在促进免疫耐受，治疗免疫性RSA中的疗效。(2)黄芩苷和白术多糖通过促进Treg细胞表达，增加机体免疫耐受，治疗免疫性RSA中的用途。黄芩苷联合白术多糖上调Treg细胞治疗免疫性复发性流产的用途。进一步地，黄芩苷联合白术多糖的药物组合用于刺激CD4(+)T细胞促进Treg细胞分化。进一步地，所述黄芩苷联合白术多糖的药物组合诱导Treg细胞增殖，所述黄芩苷联合白术多糖的药物组合诱导Foxp3mRNA及蛋白的增加。进一步地，所述黄芩苷联合白术多糖的药物组合诱导细胞STAT5分化，所述黄芩苷联合白术多糖的药物组合诱导p-STAT5的蛋白增加。进一步地，黄芩苷联合白术多糖的药物组合可上调免疫抑制性细胞因子IL-10、TGF-β、IL-35mRNA和蛋白的增多，所述免疫抑制性细胞因子IL-10、TGF-β、IL-35mRNA和蛋白的增多与Treg细胞分化呈正相关关系。进一步地，所述免疫抑制性细胞因子IL-10和IL-35与Treg细胞分化呈正相关关系。进一步地，所述Foxp3mRNA及蛋白的增多与免疫抑制性细胞因子IL-2、TGF-β的增多成正相关关系。进一步地，所述Treg细胞的分化和Foxp3mRNA及蛋白的增多可降低胚胎吸收率。进一步地，黄芩苷递增促进Treg细胞增殖的浓度为5μM～20μM，白术多糖递增促进Treg细胞增殖的浓度为50μg/ml～100μg/ml。进一步地，：所述黄芩苷的浓度为20μM，所述白术多糖的浓度为100μg/ml。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了一种中药单体与多糖化合物的组合，即黄芩苷和白术多糖，验证该药物组合在增加免疫耐受方面的作用，以及证实其在治疗免疫性RSA中的用途。本专利技术运用黄芩苷和白术多糖刺激CD4(+)T细胞，分析其促进Treg细胞表达的水平，确定黄芩苷白术多糖治疗免疫性RSA的最佳剂量配比，验证该中药组合增加机体免疫耐受的作用和可能的分子机制。结果显示黄芩苷白术多糖联合应用可促进Treg细胞的增殖比例和Foxp3mRNA及蛋白的表达水平，增加细胞STAT5、p-STAT5的蛋白表达水平，上调代表Treg细胞活化能力的免疫抑制性细胞因子IL-10，TGF-β和IL-35mRNA和蛋白的表达水平，且效果优于单用黄芩苷或白术多糖。另外在体内实验中，进一步验证黄芩苷白术多糖配伍显著降低胚胎吸收率，治疗免疫性RSA的作用。在母胎界面及外周免疫系统层面证实其机制与通过增加IL-2、TGF-β的分泌，提高Foxp3mRNA的基因表达水平，促进Treg细胞增殖活化因子IL-10和IL-35的表达密切相关。附图说明图1所示为白术多糖紫外光谱全波长扫描图；图2所示为白术多糖单糖组成与分子量；图3所示为白术多糖水相HPLC图谱；图4所示为白术多糖红外光谱分析图；图5所示为核磁共振波谱；图6所示为白术多糖电子透射显微镜镜像图；图7所示为白术多糖动态光散射测定图；图8所示为白术多糖折光指数增量测量图与光散射及示差检测色谱图；图9A与图9B所示分别为黄芩苷与白术多糖的量效关系统计图；图10所示为对照组、黄芩苷单药组、白术多糖单药组及黄芩苷白术多糖联合组促Treg细胞增殖的流式统计图；图11所示为对照组、黄芩苷单药组、白术多糖单药组及黄芩苷白术多糖联合组中Foxp3、IL-10、IL-35、TGF-β1、STAT5的mRNA表达的Q-PCR统计图；图12所示为黄芩苷和白术多糖分别和联合增加STAT5蛋白表达，促进Treg细胞增殖活化的WesternBlotting统计图与代表性图；图13所示为流式细胞术检测各组孕本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.黄芩苷联合白术多糖上调Treg细胞治疗免疫性复发性流产的用途。/n

【技术特征摘要】
1.黄芩苷联合白术多糖上调Treg细胞治疗免疫性复发性流产的用途。


2.如权利要求1所述的黄芩苷联合白术多糖上调Treg细胞治疗免疫性复发性流产的用途，其特征在于：黄芩苷联合白术多糖的药物组合用于刺激NaïveCD4(+)T细胞促进Treg细胞分化。


3.如权利要求1所述的黄芩苷联合白术多糖上调Treg细胞治疗免疫性复发性流产的用途，其特征在于：所述黄芩苷联合白术多糖的药物组合诱导Treg细胞增殖，所述黄芩苷联合白术多糖的药物组合诱导Foxp3mRNA及蛋白的增加。


4.如权利要求1所述的黄芩苷联合白术多糖上调Treg细胞治疗免疫性复发性流产的用途，其特征在于：所述黄芩苷联合白术多糖的药物组合诱导细胞STAT5分化，所述黄芩苷联合白术多糖的药物组合诱导p-STAT5的蛋白增加。


5.如权利要求1所述的黄芩苷联合白术多糖上调Treg细胞治疗免疫性复发性流产的用途，其特征在于：黄芩苷联合白术多糖的药物组合可上调免疫抑制性细胞因子IL-10、TGF-β、IL-35mRNA和蛋白的增多，所述免疫抑制性细胞因子IL-10、TGF-β、IL-35mRNA和蛋白的增多与Tr...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈聪，郭薇，陆启滨，任青玲，康安，
申请(专利权)人：江苏省中医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32