牛蒡根多糖在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及牛蒡根多糖在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。本发明专利技术中牛蒡根多糖是从牛蒡根中提取，经过灭酶、浸提、过滤、抽滤、离心、乙醇沉淀、大孔树脂脱色、三氯乙酸法脱蛋白等步骤分离纯化得到的，牛蒡根多糖的重均分子量为3000‑5000Da。本发明专利技术通过HFD(高脂)饲料诱导建立非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠模型，对牛蒡根多糖治疗NAFLD活性进行研究，发现牛蒡根多糖可以显著降低肝重及肝指数，减少肝脏脂质的积累，缓解肝损伤，调节炎症因子，从而对NAFLD起到积极的治疗作用。

Application of burdock root polysaccharide in the preparation of drugs for the treatment of nonalcoholic fatty liver

【技术实现步骤摘要】
牛蒡根多糖在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用
本专利技术涉及牛蒡根多糖在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，属于医药及保健食品

技术介绍
非酒精性脂肪肝(Nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD)是指除酒精和其他明确的损肝因素所致，以肝细胞脂肪变性和脂质沉积为主要特征的临床病理综合征，常与肥胖、胰岛素抵抗(IR)、遗传易感性、线粒体和内质网氧化应激等相关。由于肝脏组织中脂肪变性程度和炎症情况的不同，可从单纯性脂肪肝发展成非酒精性脂肪性肝炎，并进一步发展为肝硬化甚至肝癌。随着人们生活水平的提高，NAFLD的发病率也在逐年增加。目前发达国家中的发病率在20-30％，而中国成年人中的发病率约为15％，NAFLD已成为最常见的慢性肝病之一。NAFLD的病因及发病机制复杂，胰岛素抵抗(IR)、氧化应激和脂质过氧化是当前公认的关键因素，“二次打击”学说仍占主导地位。脂类在肝脏细胞的细胞质内的聚集(第一次打击)触发了一系列的细胞毒素事件(第二次打击)，导致了肝脏的炎症反应。“第一次打击”主要是指脂肪在肝脏细胞内的过度聚集，这一过程已经被证实与胰岛素抵抗(IR)有关，胰岛素抵抗(IR)会导致细胞内甘油三酯的合成与转运功能紊乱。第二次打击为氧化应激反应，是在“第一次打击”的基础上，由活性氧诱导的发生在肝脏实质细胞内的炎症反应。目前，NAFLD的干预措施主要有两大类，即生活方式的改变和药物治疗。大量的临床研究已经证明，选择健康的食物，控制饮食，积极锻炼身体，可以有效改善NAFLD。此外，天然多糖的活性研究是近年来预防及治疗NAFLD的一个新的热点，牛蒡(ArctiumlappaL.)作为一种广泛分布于亚欧地区的菊科草本植物，现已被证实具有治疗糖尿病、降血糖、抗炎等作用，现有研究表明牛蒡子及牛蒡茶对于辅助降低血脂、降体重具有积极的作用，然而目前尚未有关于从牛蒡根中提取出重均分子量为3000-5000Da的牛蒡根多糖对于治疗非酒精性脂肪肝的相关报道。
技术实现思路
本专利技术针对牛蒡在代谢类疾病领域研究的不足，提供了一种牛蒡根多糖的新应用，具体涉及牛蒡根多糖在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。本专利技术的技术方案如下：牛蒡根多糖在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述牛蒡根多糖的重均分子量为3000-5000Da。根据本专利技术优选的，所述的牛蒡根多糖的制备方法步骤如下：(1)选择新鲜的牛蒡根，沸水浴5-10min灭酶，将牛蒡根去皮后切成薄片，以料液质量比1:10加入去离子水，设置浸提条件为60-95℃、50-90min，浸提2-3次，合并浸提液后过滤和抽滤，滤液离心收取上清液；(2)将步骤(1)中制得的上清液在50-70℃下浓缩至原有体积的1/4-3/4，收集浓缩液；之后加入4倍体积的80-100wt％乙醇过夜醇沉，离心保留沉淀；将沉淀以1：100-500的质量比溶解于去离子水中，离心收取上清液；(3)将步骤(2)制备得到的上清液进行脱色处理，收集脱色后的澄清液；(4)在步骤(3)制备的澄清液中加入三氯乙酸，使三氯乙酸的浓度为3-10wt％，充分振荡，离心弃去下层变性蛋白沉淀，上清液用1mol/LNaOH溶液中和，用截留分子量3000-5000Da的透析袋透析，得到保留液，浓缩，即得脱蛋白的粗多糖溶液；(5)将步骤(4)制得到的粗多糖溶液经冻干后得到牛蒡根多糖。进一步优选的，步骤(1)中所述的浸提条件为80℃、60min，浸提3次。进一步优选的，步骤(1)中所述离心为7000r/min离心20-30min。进一步优选的，步骤(2)中所述浓缩是将上清液在60℃下置于旋转蒸发仪中蒸发浓缩，浓缩至原有体积的1/2；所述醇沉是加入95wt％乙醇，醇沉后的沉淀以1：400的质量比溶解于去离子水中。进一步优选的，步骤(2)中所述离心为7000r/min离心10-30min。进一步优选的，步骤(3)中所述脱色处理采用的脱色柱为D301R脱色柱，流速为400-600μL/min；优选的脱色柱为D301R大孔树脂脱色柱，流速为500μL/min。进一步优选的，步骤(4)中所述三氯乙酸的浓度为5wt％。进一步优选的，步骤(4)中所述充分振荡的时间为10min；所述离心为3000-4000r/min离心10min。进一步优选的，步骤(4)中所述透析袋的截留分子量为3000-4000Da。根据本专利技术优选的，所述牛蒡根多糖的使用剂量为100-800mg/kg/d，优选为400mg/kg/d。一种治疗非酒精性脂肪肝的药物，其特征在于，所述药物包括有效剂量的上述重均分子量为3000-5000Da的牛蒡根多糖。根据本专利技术优选的，所述药物包括药学上可接受的辅料。有益效果：本专利技术提供了一种牛蒡根多糖的新应用，即重均分子量为3000-5000Da的牛蒡根多糖在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用。本专利技术通过HFD(高脂)饲料诱导建立非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠模型，对牛蒡根多糖治疗NAFLD的活性进行研究，结果表明牛蒡根多糖能够产生如下的治疗效果：牛蒡根多糖能够显著降低由HFD引起的肝重及肝指数异常升高；牛蒡根多糖能够显著改善由HFD引起的肝脏形态学异常；牛蒡根多糖能够显著降低由HFD引起的肝脏胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的积累；牛蒡根多糖能够显著降低由HFD引起的小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的升高；牛蒡根多糖能够显著降低由HFD引起的小鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平的提高；因此，牛蒡根多糖能够对NAFLD起到积极的治疗作用。附图说明图1为不同小鼠肝脏组织切片H&E染色和油红O染色结果；图中，a为H&E染色结果，b为油红O染色结果，从左到右依次为空白对照组、HFD模型组、牛蒡根多糖低剂量组、牛蒡根多糖中剂量组、牛蒡根多糖高剂量组。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术的技术方案做进一步阐述，具体实施例仅用于说明本专利技术的技术方案，而非限制本专利技术的保护范围。实施例中涉及的材料及药品，若无特殊说明，均为普通市售产品。实施例中涉及的百分比，若无特殊说明，均为质量百分比。实施例1：牛蒡根多糖的制备牛蒡根多糖的制备方法，包括步骤如下：(1)选择新鲜的牛蒡根，沸水浴5-10min灭酶，将牛蒡根去皮后切成薄片，以料液质量比1:10加入去离子水，设置浸提条件为80℃、60min，浸提3次，合并浸提液后采用双层滤布进行过滤，之后使用布氏漏斗进行抽滤，滤液以7000r/min离心30min，收取上清液；(2)将步骤(1)中制得的上清液在60℃下置于旋转蒸发仪中蒸发浓缩，浓缩至原有体积的1/2，收集浓缩液；之后加入4倍体积的95wt％乙醇过夜醇沉，以7000r/min离心30min，保留沉淀；将沉淀以1：400的质量比溶解于去本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.牛蒡根多糖在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述牛蒡根多糖的重均分子量为3000-5000Da。/n

【技术特征摘要】
1.牛蒡根多糖在制备治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用，其特征在于，所述牛蒡根多糖的重均分子量为3000-5000Da。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的牛蒡根多糖的制备方法步骤如下：
(1)选择新鲜的牛蒡根，沸水浴5-10min灭酶，将牛蒡根去皮后切成薄片，以料液质量比1:10加入去离子水，设置浸提条件为60-95℃、50-90min，浸提2-3次，合并浸提液后过滤和抽滤，滤液离心收取上清液；
(2)将步骤(1)中制得的上清液在50-70℃下浓缩至原有体积的1/4-3/4，收集浓缩液；之后加入4倍体积的80-100wt％乙醇过夜醇沉，离心保留沉淀；将沉淀以1：100-500的质量比溶解于去离子水中，离心收取上清液；
(3)将步骤(2)制备得到的上清液进行脱色处理，收集脱色后的澄清液；
(4)在步骤(3)制备的澄清液中加入三氯乙酸，使三氯乙酸的浓度为3-10wt％，充分振荡，离心弃去下层变性蛋白沉淀，上清液用1mol/LNaOH溶液中和，用截留分子量3000-5000Da的透析袋透析，得到保留液，浓缩，即得脱蛋白的粗多糖溶液；
(5)将步骤(4)制得到的粗多糖溶液经冻干后得到牛蒡根多糖。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王佳玥，陈希瑞，张华忠，
申请(专利权)人：博德生物技术德州有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37