猫血清白蛋白重组蛋白及其在毕赤酵母中的高效表达方法技术

本发明专利技术提供了一种猫血清白蛋白重组蛋白及其在毕赤酵母中的高效表达方法。涉及了猫血清白蛋白重组核苷酸序列(如SEQ ID NO：3所示)、含有该核苷酸序列的载体和含有前述载体的工程细胞。本发明专利技术基于猫血清白蛋白基因的天然序列，对其密码子进行优化，使其更适合于在酵母细胞中表达，将改造后的编码猫血清白蛋白的DNA序列克隆至毕赤酵母表达载体pPICK9中，转化毕赤酵母表达菌株GS115，经过G418加压筛选，得到高效表达猫血清白蛋白的克隆株，表达水平可达2g/L。本发明专利技术的方法表达的蛋白接近天然，表达效率高、操作过程简单，适宜于大规模工业化生产。

Cat serum albumin recombinant protein and its efficient expression in Pichia pastoris

【技术实现步骤摘要】
猫血清白蛋白重组蛋白及其在毕赤酵母中的高效表达方法
本专利技术属于生物
，具体涉及猫血清白重组蛋白及其在毕赤酵母中的高效表达方法。
技术介绍
猫血清白蛋白(Felineserumalbumin,FSA)是由584个氨基酸组成的单链蛋白质，分子质量为65.85kDa。是血清中含量最高、功能较多的一种蛋白质。血浆胶体渗透压维持主要依靠血浆中白蛋白(血清白蛋白构成血浆胶体渗透压的75％～80％左右)。1g白蛋白产生的渗透压相当于20ml血浆或40ml全血所得到的血流动力学效应。猫白蛋白是由肝细胞合成的，当肝脏发生病变时，白蛋白的合成发生障碍，特别是发生肝硬化时，白蛋白的合成明显减少，导致疾病发生。白蛋白的生物学作用如下：1、白蛋白可以增加血容量和维持血浆胶体的渗透压，主要用于调节组织与血管之间水分的动态平衡。2、白蛋白的运输和解毒的作用，白蛋白能与体内许多难溶性的小分子结合形成易溶的物质，可以运输不同的物质，也可以把有毒的物质运输到解毒器官，有助于人体健康。3、白蛋白对球蛋白起到一种胶体保护的稳定作用，当肝功能异本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猫血清白蛋白重组核苷酸序列，其特征在于：所述猫血清白蛋白重组核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种猫血清白蛋白重组核苷酸序列，其特征在于：所述猫血清白蛋白重组核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。


2.一种猫血清白蛋白重组蛋白，其特征在于：该猫血清白蛋白重组蛋白是由权利要求1所述猫血清白蛋白重组核苷酸序列编码获得；
优选地，所述猫血清白蛋白重组蛋白包含如下氨基酸序列或与其具有85％以上同源性的氨基酸序列：SEQIDNO：4所示的氨基酸序列。


3.一种载体，其特征在于：所述载体含有权利要求1中编码该猫血清白蛋白重组蛋白的DNA序列。


4.一种工程细胞，其特征在于：所述工程细胞含有权利要求3所述的载体。


5.一种猫血清白蛋白重组蛋白在毕赤酵母中的高效表达方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将编码猫血清白蛋白重组蛋白的DNA序列和毕赤酵母表达载体pPIC9K分别用SnaBI和NotI酶切，琼脂糖凝胶电泳分离、纯化回收，经T4DNA连接酶连接过夜，次日用连接产物转化大肠杆菌JM109感受态细胞，涂布至含有Amp的LB平板上，37℃培养过夜；次日，从平板上挑取单菌落，扩增后提取重组质粒；
其中，编码猫血清白蛋白重组蛋白的DNA序列如SEQIDNO：3所示；
(2)将携带重组质粒pPIC9K-fsa的大肠杆菌接种于培养基中，37℃培养过夜，用质粒提取试剂盒提取质粒，用NanoDrop定量后，用SalI酶切过夜，用DNA提取试剂盒回收，得到线性化的pPIC9K-fsa质粒，-20℃保存备用；
(3)取线性化的pPIC9K-fsa质粒，用电转仪转化GS115感受态细胞，用SalI将pPIC9K-fsa质粒线性化，取7～10μg线性化后的质粒，用电穿孔仪电转化毕赤酵母GS115感受态细胞；电穿孔后，将细胞与1～3ml预冷的山梨醇混合，28℃孵育1～3h；随后将其涂在MD平板上，并28℃倒置培养48～72h，筛...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘继红，纪志辉，石文达，刘方，董昊，王宏伟，
申请(专利权)人：泰州博莱得利生物科技有限公司，北京博莱得利生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32