一种用于检测非洲猪瘟病毒的恒温荧光扩增引物组、探针、方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种非洲猪瘟病毒核酸恒温荧光扩增的检测方法。本发明专利技术通过设计特异性引物以及探针，利用重组酶介导链替换核酸扩增技术，在恒温条件下对待检样品进行扩增，可在20min内完成对非洲猪瘟病毒的检测。本发明专利技术的试剂盒的灵敏性高，最低检出限为10copies/μL；特异性强，可为非洲猪瘟病毒的现场快速检测筛查提供有效的技术手段。

A constant temperature fluorescent amplification primer set, probe, method and kit for detection of African swine fever virus

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测非洲猪瘟病毒的恒温荧光扩增引物组、探针、方法及试剂盒
本专利技术属于病毒检测领域，具体涉及一种用于检测非洲猪瘟病毒的恒温荧光扩增引物组、探针、方法及试剂盒。
技术介绍
非洲猪瘟自1921年在肯尼亚首次报道后，一直存在于撒哈拉以南的非洲国家，1957年先后流传至西欧和拉美国家，多数被及时扑灭，但在葡萄牙，西班牙西南部和意大利的撒丁岛仍有流行。2007年以来，非洲猪瘟在全球多个国家发生、扩散、流行，特别是俄罗斯及其周边地区。2017年3月，俄罗斯远东地区伊尔库茨克州发生非洲猪瘟疫情，疫情发生地距离我国较近，仅为1000千米左右；另外，我国是养猪及猪肉消费大国，生猪出栏量、存栏量以及猪肉消费量均位于全球首位，每年种猪及猪肉制品进口总量巨大，与多个国家贸易频繁；而且，我国与其它国家的旅客往来频繁，旅客携带的商品数量多、种类杂。因此，非洲猪瘟传入我国的风险日益加大，一旦传入，其带来的直接以及间接损失将不可估量。对此，近年我国农业部发布了关于进一步加强非洲猪瘟风险防范工作的紧急通知。非洲猪瘟(Africanswinefever，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测非洲猪瘟病毒的恒温荧光扩增引物组，其特征在于，所述引物组的核苷酸序列为：/nASFV-F：5’-CAAGGTTCACGTTCTCRTTAAACCAAAAGCGC-3’；/nASFV-R：5’-CTTAATCCAGAGCGCAAGAGGGGGCTGATAG[FAM-dT][THF][BHQ1-dT]TTAGGGGTTTGAGGY-3’。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测非洲猪瘟病毒的恒温荧光扩增引物组，其特征在于，所述引物组的核苷酸序列为：
ASFV-F：5’-CAAGGTTCACGTTCTCRTTAAACCAAAAGCGC-3’；
ASFV-R：5’-CTTAATCCAGAGCGCAAGAGGGGGCTGATAG[FAM-dT][THF][BHQ1-dT]TTAGGGGTTTGAGGY-3’。


2.一种用于检测非洲猪瘟病毒的标记有THF残基的RAA-exo探针ASFV-P，其特征在于，所述探针的核苷酸序列为：
ASFV-P：5’-GGAYGCAACGTATCTGGACATAAGACGTAATG-3’。


3.根据权利要求2所述的探针，其特征在于，所述探针序列5’端标记的荧光基团为FAM，探针序列3’端标记的淬灭基团为BHQ1。


4.一种检测非洲猪瘟病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组、权利要求2或3所述的探针。


5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，还包括荧光RAA反应单元、BufferA、BufferB，阴性对照以及阳性对照；BufferA为水解缓冲液；BufferB为醋酸镁。


6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述的荧光RAA反应单元含有重组酶、单...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟少伦，王衡，娄亚坤，魏文康，赵林萍，付燕峰，吕殿红，龚浪，温肖会，翟颀，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物卫生研究所，华南农业大学，郑州中道生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44