一种同时检测副猪嗜血杆菌、猪细小病毒、猪圆环病毒2型的三重实时荧光PCR方法技术

本发明专利技术公开了一种利用特异性引物同时检测副猪嗜血杆菌（HPS）、猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒2型（PCV2）的三重实时荧光PCR方法，其包括步骤：（1）分别合成HPS、PPV、PCV2所对应的特异性引物；（2）提取猪组织研磨样品的DNA；（3）将步骤（1）所述的所有特异性引物置于三重荧光PCR反应体系中，以步骤（2）所述的DNA为模板，进行PCR扩增；根据熔解曲线来分析猪是否感染HPS、PPV、PCV2中的至少一种。本发明专利技术为多重荧光PCR的研究提供了便利，适用范围较广，同时具有广泛的科研价值和应用前景。

A triple real-time PCR method for simultaneous detection of Haemophilus parasuis, porcine parvovirus and porcine circovirus type 2

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测副猪嗜血杆菌、猪细小病毒、猪圆环病毒2型的三重实时荧光PCR方法
本专利技术属于猪病原检测
，具体涉及一种同时检测猪体内细菌和病毒感染(HPS、PPV和PCV2)的三重实时荧光PCR方法。
技术介绍
随着养殖规模的扩大，猪体内感染的疾病日益增多，给养猪业生产带来了巨大的经济损失。母猪感染猪细小病毒(PPV)会发生流产、死胎或产仔猪大量死亡，猪场一旦感染，3个月内100％感染，感染猪很长时间带毒、排毒。猪圆环病毒2型(PCV2)具有较强的致病性，可以感染不同日龄的猪。怀孕母猪感染后，经胎盘垂直感染给仔猪，初产母猪和新猪群产生繁殖障碍。这2种疾病在临床上呈现出相似的症状，又常常发生混合感染，使临床诊断非常困难，必须依靠实验室检测技术进行鉴别诊断。猪圆环病毒除导致繁殖障碍性疾病外，还可导致猪群产生严重的免疫抑制，从而容易继发或并发其他传染病。临床上单独圆环病毒感染的发病的病死率很低，80％以上的情况属于继发感染。在猪场中发现，圆环病毒和副猪嗜血杆菌混合感染的较为普遍。副猪嗜血杆菌感染可以引起猪的副猪嗜血杆菌病，以多发性纤维素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.三重实时荧光PCR同时检测副猪嗜血杆菌、猪细小病毒、猪圆环病毒2型的方法，其特征包括以下步骤：/n（1）、分别合成副猪嗜血杆菌（HPS）、猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒2型（PCV2）所对应的特异性引物；/n所述HPS扩增引物对为：/n正向：5' CACCCTTATCCTTTGTTGCC 3'/n反向：5' CACTTTCTGAGATTCACTCCACC 3'/n所述PPV扩增引物对为：/n正向：5' GATGGCTCAAACCGGAGGAG 3'/n反向：5' TGGAAAGTTCACATTGGCTGC 3'/n所述PCV2扩增引物对为：/n正向：5' TGCCCTAACCTATGAC...

【技术特征摘要】
1.三重实时荧光PCR同时检测副猪嗜血杆菌、猪细小病毒、猪圆环病毒2型的方法，其特征包括以下步骤：
（1）、分别合成副猪嗜血杆菌（HPS）、猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒2型（PCV2）所对应的特异性引物；
所述HPS扩增引物对为：
正向：5'CACCCTTATCCTTTGTTGCC3'
反向：5'CACTTTCTGAGATTCACTCCACC3'
所述PPV扩增引物对为：
正向：5'GATGGCTCAAACCGGAGGAG3'
反向：5'TGGAAAGTTCACATTGGCTGC3'
所述PCV2扩增引物对为：
正向：5'TGCCCTAACCTATGACCC3'
反向：5'TGTAGTTTGTAGTCTCAGCCAG3'
（2）、提取猪组织样品的DNA，按照宝生物科技有限公司TaKaRaMiniBESTUniversalGenomicDNAExtractionKitVer.5.0试剂盒（casno:9765）的说明书操作；
（...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡建和，张守平，胡斌，徐彦召，杭柏林，夏小静，孙亚伟，
申请(专利权)人：河南科技学院，
类型：发明
国别省市：河南;41