一种检测H7N9亚型禽流感病毒基因组包装变异的实时荧光绝对定量RT-PCR方法技术

本发明专利技术涉及病毒检测技术领域，具体涉及一种检测H7N9亚型禽流感病毒基因组包装变异的实时荧光绝对定量RT‑PCR方法。本发明专利技术提供分别针对HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因的高度保守区的特异性引物对，利用这些特异性引物对进行实时荧光定量RT‑PCR检测H7N9亚型流感病毒基因组中HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因的拷贝数，进而检测H7N9亚型流感病毒的基因组包装变异。该方法具有特异性高、灵敏度高、准确性高、检测时间较短，成本低等优势，能够对病毒滴度较低的临床样品做出准确诊断，适用于H7N9亚型禽流感病毒的临床诊断和流行病控制。

A real-time fluorescence absolute quantitative RT-PCR method for detecting the package variation of H7N9 subtype avian influenza virus genome

【技术实现步骤摘要】
一种检测H7N9亚型禽流感病毒基因组包装变异的实时荧光绝对定量RT-PCR方法
本专利技术涉及病毒检测
，具体涉及用于实时荧光定量RT-PCR检测H7N9亚型禽流感病毒及其基因组包装变异的引物组、试剂盒以及利用该引物组进行实时荧光绝对定量RT-PCR检测H7N9亚型禽流感病毒基因组包装变异的方法。
技术介绍
H7N9亚型禽流感病毒为新型重配病毒，已有研究表明该病毒的HA基因来源于鸭群中流行的H7亚型流感病毒，NA基因来源于鸭群或者野鸟中的N9亚型流感病毒，内部基因来源于中国鸡群中流行的H9N2病毒。为了检测H7N9亚型流感病毒并研究其基因组的变异和进化情况，需要对病毒的基因片段进行定性及定量。禽流感病毒的常规检测方法主要为鸡胚病毒分离试验和HA、HI试验。采用鸡胚进行病毒的分离培养(一般需要2～3天)，然后采用血凝抑制试验进行流感病毒亚型及分支的鉴定(一般需要1天)。HA、HI试验特异性好，但其操作过程繁琐费时。而利用常规方法，即收集有血凝性的鸡胚尿囊液提取RNA，运用流感病毒HA、NA基因的通用引物进行全长扩增并克隆测序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于实时荧光定量RT-PCR检测H7N9亚型禽流感病毒及其基因组包装变异的引物组，其特征在于，包括用于扩增HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因片段的特异性引物对，所述特异性引物对的序列如SEQ ID NO.1-16所示。/n

【技术特征摘要】
1.用于实时荧光定量RT-PCR检测H7N9亚型禽流感病毒及其基因组包装变异的引物组，其特征在于，包括用于扩增HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因片段的特异性引物对，所述特异性引物对的序列如SEQIDNO.1-16所示。


2.权利要求1所述的引物组在制备用于实时荧光定量RT-PCR检测H7N9亚型禽流感病毒及其基因组包装变异的试剂或试剂盒中的应用。


3.一种用于实时荧光定量RT-PCR检测H7N9亚型禽流感病毒及其基因组包装变异的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的引物组。


4.权利要求1所述的引物组或权利要求3所述的试剂盒在鉴定H7N9亚型禽流感病毒中的应用。


5.权利要求1所述的引物组或权利要求3所述的试剂盒在H7N9亚型禽流感病毒HA、NA、PB2、PB1、PA、NP、M、NS基因拷贝数定量检测中的应用。


6.权利要求1所述的引物组或权利要求3所述的试剂盒在H7N9亚型禽流感病毒基因组包装变异检测中的应用。


7.权利要求1所述的引物组或权利要求3所述的试剂盒在H7N9亚型禽流感病毒突变株检测或进化分析中的应用。


8.一种检测H7N9亚型禽流感病毒及其基因组包装变...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘金华，佟琪，祖之鹏，高卫华，蒲娟，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11