【技术实现步骤摘要】
一种带有分子标签的单链建库方法和接头组合、试剂盒
本专利技术属于基因测序文库
，尤其涉及一种带有分子标签的单链建库方法和接头组合、试剂盒。
技术介绍
血浆游离DNA又称cfDNA(cellfreeDNA)，是指外周中游离于细胞外的DNA，cfDNA的来源既包括正常细胞，也有异常细胞(如肿瘤细胞)或者外源的微生物(如病毒DNA)，具体包括自身正常细胞代谢的凋亡小体，肿瘤细胞碎片，外泌体等。循环肿瘤DNA(CirculatingtumorDNA)ctDNA是指从原发肿瘤甚至是转移形成的新肿瘤细胞破裂掉落下来到循环外周血中的DNA。ctDNA在临床医学中具有重要意义，通过检测ctDNA在肿瘤的早期检测，肿瘤的靶向治疗和后期的疾病监控等方面具有重要的临床价值。ctDNA检测难点有主要是由于是含量低，人群在10ng-25ng。另外发现有部分ctDNA呈单链形式，双链建库往往会忽略这类单链DNA，造成检测有遗漏。目前采用NGS方法的主流检测过程均会涉及到PCR扩增和测序，这两个过程都会出现一些系统错误，如illuminaH...
【技术保护点】
1.一种带有分子标签的单链建库方法，其特征在于，包括如下步骤：/n提供样本DNA，将所述样本DNA进行磷酸化处理，得到单链DNA模板；/n将所述单链DNA模板的3’端连上第一接头，得到第一连接产物；/n将所述第一连接产物的5’端连上第二接头，得到第二连接产物；/n利用通用引物对所述第二连接产物进行PCR扩增，得到文库；/n其中，所述第一接头和/或所述第二接头含有分子标签，且所述第一接头和第二接头为双链接头。/n
【技术特征摘要】
1.一种带有分子标签的单链建库方法，其特征在于，包括如下步骤：
提供样本DNA，将所述样本DNA进行磷酸化处理，得到单链DNA模板；
将所述单链DNA模板的3’端连上第一接头，得到第一连接产物；
将所述第一连接产物的5’端连上第二接头，得到第二连接产物；
利用通用引物对所述第二连接产物进行PCR扩增，得到文库；
其中，所述第一接头和/或所述第二接头含有分子标签，且所述第一接头和第二接头为双链接头。
2.如权利要求1所述的带有分子标签的单链建库方法，其特征在于，所述样本DNA包括cfDNA，或打断至100-400bp的gDNA；和/或，
所述单链建库方法得到的文库用于甲基化测序，在将所述样本DNA进行磷酸化处理的步骤之前，先用重亚硫酸盐处理。
3.如权利要求1所述的带有分子标签的单链建库方法，其特征在于，所述磷酸化处理包括多聚核苷酸激酶PNK处理；和/或，
将所述单链DNA模板的3’端连上第一接头的步骤中使用的是T4DNA连接酶；和/或，
将所述第一连接产物的5’端连上第二接头的步骤中使用的是T4DNA连接酶。
4.如权利要求1-3任一项所述的带有分子标签的单链建库方法，其特征在于，所述第一接头由互补配对的SEQIDNO.1和SEQIDNO.2组成，所述第二接头由互补配对的SEQIDNO.3和SEQIDNO.4组成；其中，SEQIDNO.1中的Na和SEQIDNO.2中的Nb为互补配对的分子标签，SEQIDNO.3中的Nc和SEQIDNO.4中的Nd为互补配对的分子标签；或者，
所述第一接头由互补配对的SEQIDNO.7和SEQIDNO.8组成，所述第二接头由互补配对的SEQIDNO.9和SEQIDNO.10组成，其中，SEQIDNO.7中的Ne和SEQIDNO.8中的Nf为互补配对的分子标签，SEQIDNO.9中的Ng和SEQIDNO.10中的Nh为互补配对的分子标签。
5.如权利要求4所述的带有分子标签的单链建库方法，其特征在于，当所述第一接头由的SEQIDNO.1和SEQIDNO.2组成，所述第二接头由SEQIDNO.3和...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐飞岳，
申请(专利权)人：深圳易倍科华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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