一种多样本文库的构建方法及装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及基因高通量测序技术领域，尤其涉及一种多样本文库的构建方法及装置。用于提高处理效率，降低测序成本，该方法为：将片段化的若干DNA经过磁珠纯化后获得若干第一样本，将若干第一样本进行补平末端后得到若干第二样本，并在若干第二样本的溶液中加入第一试剂和第二试剂，获得若干第三样本，将若干第三样本进行接头补齐和P7标签扩增后得到多样本文库，其中，所述多样本文库中每个样本所携带的P5标签和P7标签用于唯一标识每个样本。这样，可以通过处理片段化的若干DNA，得到多样本文库，提升资源利用率，降低生产成本，并且，避免出现样本混乱的情况，提高对样本的识别性能，提高测序效率，满足对多样本文库的构建需求。

A construction method and device of multi sample library

【技术实现步骤摘要】
一种多样本文库的构建方法及装置
本专利技术涉及基因高通量测序
，尤其涉及一种多样本文库的构建方法及装置。
技术介绍
随着20世纪90年代人类基因组计划的启动，六国科学家耗资30亿美元，用时13年成功绘制了人类基因组序列图谱，奠定了人类探索生命本质的基础。人类基因组测序的完成标志着分子医学时代的到来，也催生了高通量测序(NextGenerationSequencing，NGS)技术，即，第二代测序技术。NGS技术被称为测序技术发展史上的一个里程碑，该技术可以对数百万个脱氧核糖核酸(DeoxyriboNucleicAcid，DNA)分子同时进行测序，这使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全面的分析成为可能，为生命科学基础研究、转化应用奠定了基础。经过十几年，NGS技术得到了飞速发展，NGS技术已经从科研的小众领域逐渐走向了临床，应用在产前筛查、肿瘤检测、遗传病筛查和胚胎植入前筛查等领域。无创产前诊断胚胎染色体非整倍性异常是应用成熟的第一个转化技术，部分国家或城市已将此项检查纳入居民医疗保障体系，临床应用的推广带动了测序市场的发展。但是，现有NGS技术难以满足对文库构建的日益增长要求，无法进一步提高测序效率，影响文库制备环节的效率，增加文库构建的成本，难以保证NGS技术的广泛推广。因此，需要设计一种多样本文库的构建方法以解决上述问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种多样本文库的构建方法及装置，以有效提高处理效率，降低测序成本。一种多样本文库的构建方法，包括：r>通过酶切获得片段化的若干脱氧核糖核酸DNA，并将所述若干DNA经过磁珠纯化后获得若干第一样本；将所述若干第一样本进行补平末端后得到若干第二样本，并在所述若干第二样本的溶液中加入第一试剂和第二试剂，获得若干第三样本，其中，所述第三样本中每个样本的5’端携带P5标签的P5接头，所述每个样本的3’端携带通用的P7接头；将所述若干第三样本进行接头补齐和P7标签扩增，得到多样本文库，其中，所述多样本文库中每个样本所携带的P5标签和P7标签用于唯一标识每个样本。可选的，在将所述若干第一样本进行补平末端后得到若干第二样本之后，在若干第二样本溶液中加入第一试剂和第二试剂，获得若干第三样本之前，进一步包括：根据预设的DNA样本数目，设置所述第一试剂的第一数目和所述第二试剂的第二数目；将包含所述P5接头的溶液按照预设的第一溶液浓度进行稀释，获得所述第一数目的所述第一试剂，以及将包含所述P7接头的溶液按照预设的第二溶液浓度进行稀释，获得所述第二数目的所述第二试剂。可选的，在根据所述预设的DNA样本数目，设置所述第一试剂的第一数目之后，在将包含所述P5接头的溶液按照预设的第一溶液浓度进行稀释之前，进一步包括：确定所述P5接头中正链的数量和反链的数量，并确定所述正链的数量和所述反链的数量中的最小值；按照所述最小值将正链和反链进行等量混合，获得具有双链结构的所述P5接头。可选的，将所述若干第三样本进行接头补齐和P7标签扩增，得到多样本文库，具体包括：确定所述若干第三样本中的各个接头的末端不平时，在所述末端处补充碱基，并将所述若干第三样本经过磁珠纯化后获得若干第四样本，其中，所述各个接头包括所述带P5标签的P5接头和所述通用的P7接头，所述各个接头是由若干碱基构成的序列；在若干第四样本溶液中加入第三试剂，并将所述若干第四样本经过磁珠纯化后获得若干第五样本，以及将携带所述P5标签和P7标签的所述若干第五样本作为所述多样本文库，其中，所述第三试剂携带所述P7标签的P7引物，所述第四样本中每个样本的3’端携带所述P7标签的P7接头。可选的，将包含所述P5接头的溶液按照预设的第一溶液浓度进行稀释，获得所述第一数目的所述第一试剂，具体包括：获取包含所述P5接头的所述溶液的浓度，并根据所述溶液的浓度与溶剂之间的对应关系确定需要添加的溶剂的体积；将所述溶液与所述体积的溶剂进行混合，获得所述第一试剂，其中，所述第一试剂的浓度等于所述第一溶液浓度。一种多样本文库的构建装置，可选的，包括：第一处理单元，用于通过酶切获得片段化的若干脱氧核糖核酸DNA，并将所述若干DNA经过磁珠纯化后获得若干第一样本；第二处理单元，用于将所述若干第一样本进行补平末端后得到若干第二样本，并在所述若干第二样本的溶液中加入第一试剂和第二试剂，获得若干第三样本，其中，所述第三样本中每个样本的5’端携带P5标签的P5接头，所述每个样本的3’端携带通用的P7接头；构建单元，用于将所述若干第三样本进行接头补齐和P7标签扩增，得到多样本文库，其中，所述多样本文库中每个样本所携带的P5标签和P7标签用于唯一标识每个样本。可选的，在将所述若干第一样本进行补平末端后得到若干第二样本之后，在若干第二样本溶液中加入第一试剂和第二试剂，获得若干第三样本之前，所述第二处理单元进一步用于：根据预设的DNA样本数目，设置所述第一试剂的第一数目和所述第二试剂的第二数目；将包含所述P5接头的溶液按照预设的第一溶液浓度进行稀释，获得所述第一数目的所述第一试剂，以及将包含所述P7接头的溶液按照预设的第二溶液浓度进行稀释，获得所述第二数目的所述第二试剂。可选的，在根据所述预设的DNA样本数目，设置所述第一试剂的第一数目之后，在将包含所述P5接头的溶液按照预设的第一溶液浓度进行稀释之前，所述第二处理单元进一步用于：确定所述P5接头中正链的数量和反链的数量，并确定所述正链的数量和所述反链的数量中的最小值；按照所述最小值将正链和反链进行等量混合，获得具有双链结构的所述P5接头。可选的，将所述若干第三样本进行接头补齐和P7标签扩增，得到多样本文库，所述构建单元具体用于：确定所述若干第三样本中的各个接头的末端不平时，在所述末端处补充碱基，并将所述若干第三样本经过磁珠纯化后获得若干第四样本，其中，所述各个接头包括所述带P5标签的P5接头和所述通用的P7接头，所述各个接头是由若干碱基构成的序列；在若干第四样本溶液中加入第三试剂，并将所述若干第四样本经过磁珠纯化后获得若干第五样本，以及将携带所述P5标签和P7标签的所述若干第五样本作为所述多样本文库，其中，所述第三试剂携带所述P7标签的P7引物，所述第四样本中每个样本的3’端携带所述P7标签的P7接头。可选的，将包含所述P5接头的溶液按照预设的第一溶液浓度进行稀释，获得所述第一数目的所述第一试剂，所述第二处理单元具体用于：获取包含所述P5接头的所述溶液的浓度，并根据所述溶液的浓度与溶剂之间的对应关系确定需要添加的溶剂的体积；将所述溶液与所述体积的溶剂进行混合，获得所述第一试剂，其中，所述第一试剂的浓度等于所述第一溶液浓度。一种存储介质，可选的，存储有用于实现多样本文库的构建方法的程序，所述程序被处理器运行时，执行以下步骤：通过酶切获得片段化的若干脱氧核糖核酸DNA，并本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多样本文库的构建方法，其特征在于，包括：/n通过酶切获得片段化的若干脱氧核糖核酸DNA，并将所述若干DNA经过磁珠纯化后获得若干第一样本；/n将所述若干第一样本进行补平末端后得到若干第二样本，并在所述若干第二样本的溶液中加入第一试剂和第二试剂，获得若干第三样本，其中，所述第三样本中每个样本的5’端携带P5标签的P5接头，所述每个样本的3’端携带通用的P7接头；/n将所述若干第三样本进行接头补齐和P7标签扩增，得到多样本文库，其中，所述多样本文库中每个样本所携带的P5标签和P7标签用于唯一标识每个样本。/n

【技术特征摘要】
1.一种多样本文库的构建方法，其特征在于，包括：
通过酶切获得片段化的若干脱氧核糖核酸DNA，并将所述若干DNA经过磁珠纯化后获得若干第一样本；
将所述若干第一样本进行补平末端后得到若干第二样本，并在所述若干第二样本的溶液中加入第一试剂和第二试剂，获得若干第三样本，其中，所述第三样本中每个样本的5’端携带P5标签的P5接头，所述每个样本的3’端携带通用的P7接头；
将所述若干第三样本进行接头补齐和P7标签扩增，得到多样本文库，其中，所述多样本文库中每个样本所携带的P5标签和P7标签用于唯一标识每个样本。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在将所述若干第一样本进行补平末端后得到若干第二样本之后，在若干第二样本溶液中加入第一试剂和第二试剂，获得若干第三样本之前，进一步包括：
根据预设的DNA样本数目，设置所述第一试剂的第一数目和所述第二试剂的第二数目；
将包含所述P5接头的溶液按照预设的第一溶液浓度进行稀释，获得所述第一数目的所述第一试剂，以及将包含所述P7接头的溶液按照预设的第二溶液浓度进行稀释，获得所述第二数目的所述第二试剂。


3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，在根据所述预设的DNA样本数目，设置所述第一试剂的第一数目之后，在将包含所述P5接头的溶液按照预设的第一溶液浓度进行稀释之前，进一步包括：
确定所述P5接头中正链的数量和反链的数量，并确定所述正链的数量和所述反链的数量中的最小值；
按照所述最小值将正链和反链进行等量混合，获得具有双链结构的所述P5接头。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，将所述若干第三样本进行接头补齐和P7标签扩增，得到多样本文库，具体包括：
确定所述若干第三样本中的各个接头的末端不平时，在所述末端处补充碱基，并将所述若干第三样本经过磁珠纯化后获得若干第四样本，其中，所述各个接头包括所述带P5标签的P5接头和所述通用的P7接头，所述各个接头是由若干碱基构成的序列；
在若干第四样本溶液中加入第三试剂，并将所述若干第四样本经过磁珠纯化后获得若干第五样本，以及将携带所述P5标签和P7标签的所述若干第五样本作为所述多样本文库，其中，所述第三试剂携带所述P7标签的P7引物，所述第四样本中每个样本的3’端携带所述P7标签的P7接头。


5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，将包含所述P5接头的溶液按照预设的第一溶液浓度进行稀释，获得所述第一数目的所述第一试剂，具体包括：
获取包含所述P5接头的所述溶液的浓度，并根据所述溶液的浓度与溶剂之间的对应关系确定需要添加的溶剂的体积；
将所述溶液与所述体积的溶剂进行混合，获得所述第一试剂，其中，所述第一试剂的浓度等于所述第一溶液浓度。


6.一种多样本文库的构建装置，其特征在于，包括：
第一处理单元，用于通过酶切获得片段化的若干脱氧核糖核酸DNA，并将所述若干DNA经过磁珠纯化后获得若干第一样本；
第二处理单元，用于将所述若干第一样本进行补平末端后得到若干第二样本，并在所述若干第二样本的溶液中加入第一试剂和第二试剂，获得若干第三样本，其中，所述第三样本中每个样本的5’端携带P5标签的P5接头，所述每个样本的3’端携带通用的P7接头；
构建单元，用于将所述若干第三样本进行接头...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈海波，
申请(专利权)人：深兰科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31