一种添加分子标签的多重PCR方法及建库仪器技术

本发明专利技术提供一种添加分子标签的多重PCR方法，所述方法包括：选择基因组位点或DNA区域作为DNA模板并进行引物组设计；对所述引物组添加对应的分子标签；使用所述引物组以及通用引物对所述DNA模板进行第一轮多重PCR扩增，得到第一产物；对所述第一产物进行第一纯化处理和切割不匹配分子标签处理，以得到第二产物；使用通用引物对所述第二产物进行第二轮多重PCR扩增并添加索引，以得到第三产物；对所述第三产物进行第二纯化处理，以得到文库。此外，本发明专利技术还提供一种应用上述方法的建库仪器。本发明专利技术提供的添加分子标签的多重PCR方法，确保一个DNA模板唯一对应一个分子标签，从而实现降低分子标签冗余，提高检测准确度，操作更简单，建库时间更短。

【技术实现步骤摘要】
一种添加分子标签的多重PCR方法及建库仪器
本专利技术涉及基因测序文库
,具体涉及一种添加分子标签的多重PCR方法及建库仪器。
技术介绍
目前NGS建库富集的方法主要有两种，一种是通过连接的方法加上接头，再通过探针富集的方法，常称之为探针捕获法。一种是通过PCR引物组经过多轮扩增建库富集，该方法称为多重PCR法。多重PCR法较探针法更快捷，灵活性更高而且成本更低，适用于起始量低，片段长度较大的样本。测序和建库过程中常常需要PCR的过程，尤其是多重PCR法，都会出现一些系统错误，如illuminaHiseq平台的测序错误率在0.1-0.3％。但随着对测序结果的准确度要求越来越高，需要添加分子标签(Uniquemolecularidentifier,UMI)。多重PCR法添加分子标签具有较高难度，如果借鉴探针法添加分子标签的方法，单纯地在引物上添加分子标签，随着扩增循环数地增加，引入的分子标签种类增多，面临着一个基因组模板对应多个分子标签的状况。这样就不是严格的一个模板对应一种分子标签，导致后期分析操作误认为有多个模板，结果可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种添加分子标签的多重PCR方法，其特征在于，所述方法包括：/n步骤S10：选择基因组位点或DNA区域作为DNA模板并进行引物组设计；/n步骤S20：对所述引物组添加对应的分子标签；/n步骤S30：使用所述引物组以及通用引物对所述DNA模板进行第一轮多重PCR扩增，得到第一产物；/n步骤S40：对所述第一产物进行第一纯化处理和切割不匹配分子标签处理，以得到第二产物；/n步骤S50：使用通用引物对所述第二产物进行第二轮多重PCR扩增并添加索引，以得到第三产物；/n步骤S60：对所述第三产物进行第二纯化处理，以得到文库。/n

【技术特征摘要】
1.一种添加分子标签的多重PCR方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤S10：选择基因组位点或DNA区域作为DNA模板并进行引物组设计；
步骤S20：对所述引物组添加对应的分子标签；
步骤S30：使用所述引物组以及通用引物对所述DNA模板进行第一轮多重PCR扩增，得到第一产物；
步骤S40：对所述第一产物进行第一纯化处理和切割不匹配分子标签处理，以得到第二产物；
步骤S50：使用通用引物对所述第二产物进行第二轮多重PCR扩增并添加索引，以得到第三产物；
步骤S60：对所述第三产物进行第二纯化处理，以得到文库。


2.根据权利要求1所述的添加分子标签的多重PCR方法，其特征在于，所述引物组设计的引物形式包括常规单链引物、发夹引物和欧米伽引物中的任意一种或多种。


3.根据权利要求1所述的添加分子标签的多重PCR方法，其特征在于，所述第一轮多重PCR扩增反应包括3个循环。


4.根据权利要求1所述的添加分子标签的多重PCR方法，其特征在于，所述步骤S40包括：
步骤S410：对所述第一产物加入纯化磁珠，洗涤纯化后加入适量去离子水溶解；
步...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐飞岳，王堰汇，缑灵山，
申请(专利权)人：深圳易倍科华生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44