负免疫检查点受体与WT1肿瘤疫苗的免疫调节剂及用途制造技术

本发明专利技术提供了负免疫检查点受体(CTLA‑4、PD‑1)与WT1肿瘤疫苗的免疫调节剂及用途，它们用来提高WT1肿瘤疫苗治疗肿瘤的疗效、降低负免疫检查点受体(CTLA‑4、PD‑1)抑制剂的副作用；同时，CTLA‑4、PD‑1抑制剂与WT1肿瘤疫苗联合，提高肿瘤免疫疗法效果。本发明专利技术涉及的免疫调节剂是CD13/APN的抑制剂。

Immunomodulators and uses of negative immunocheckpoint receptor and WT1 tumor vaccine

【技术实现步骤摘要】
负免疫检查点受体与WT1肿瘤疫苗的免疫调节剂及用途
本专利技术提供了负免疫检查点受体(CTLA-4、PD-1)与WT1肿瘤疫苗的免疫调节剂及用途，它们用来提高WT1肿瘤疫苗治疗肿瘤的疗效、降低负免疫检查点受体(CTLA-4、PD-1)抑制剂的副作用；同时，CTLA-4、PD-1抑制剂与WT1肿瘤疫苗联合，提高肿瘤免疫疗法效果。本专利技术涉及的免疫调节剂是CD13/APN的抑制剂。
技术介绍
人类N端氨基酶(AminopeptidaseN，简称为APN)，又称为人类CD13(本文以下称为CD13/APN)被发现存在于人体中。主要分布于肺、肠、肾的上皮细胞、纤维母细胞及中性粒细胞。(参见文献XuYetal.Antitumoractivityofactinonininvitroandinvivo.ClinCancerRes1998Jan；4(1)：171-6)。F23是抗CD13/APN单克隆抗体，已知F23作用于CD13/APN活性点。CD13/APN主要是通过其N端酶学功能来调控某些活性信号蛋白。它可以灭活或激活某种多肽或蛋白，70％的白血病细胞表达这种CD13/APN。曾有人用F23作为抗肿瘤剂，如用于治疗白血病等(参见文献XuY，ScheinbergDA.，Eliminationofhumanleukemiabymonoclonalantibodiesinanathymicnudemouseleukemiamodel.ClinCancerRes1995Oct；1(10)：1179-87)。已有人发现，某些小分子化合物也可作为CD13/APN抑制剂。(参见文献XuY，WellnerD，ScheinbergDA.CrypticandregulatoryepitopesinCD13/aminopeptidaseN.ExpHematol1997Jun；25(6)：521-9)。这些小分子化合物包括商品名为ACTINONIN、BESTATIN和AMASTATIN等的药物(可购自SIGMA公司)。癌症(肿瘤)免疫疗法目前成为重要攻克癌症的方向。2018年诺贝尔医学奖授予JamesPAllison和TasukuHonjo“因为他们通过抑制负免疫调节来发现癌症免疫疗法”。美国艾利森和日本本庶佑因发现两个T细胞负免疫检查点受体(CTLA-4、PD-1)的作用原理，通过抑制这两个负免疫检查点受体，让T细胞重新活跃起来杀死肿瘤细胞。由于美国艾利森和日本本庶佑抑制这两个负免疫检查点受体时，没有优选肿瘤特异性靶标，如果T细胞过于活跃，同样会把正常的健康细胞清除掉，导致严重的药物副作用，可以引发人体器官衰竭。本专利技术阐述一种免疫调节机理，提供优选肿瘤特异性靶标与调控CD13/APN来降低负免疫检查点受体抑制剂的副作用。靶向PD-1的药物与其他负免疫检查点受体(如CTLA-4)相结合，可增强T细胞的免疫反应。程序性细胞死亡蛋白1，也称为PD-1和CD279(分化簇279)，是细胞表面的一种蛋白质，通过下调调节免疫系统对人体细胞的反应。免疫系统，通过抑制T细胞炎症活动促进自身耐受。这可以预防自身免疫性疾病，但它也可以阻止免疫系统杀死癌细胞。PD-1是免疫检查点，通过两种机制防止自身免疫。首先，它促进淋巴结中抗原特异性T细胞的凋亡(程序性细胞死亡)。其次，它可以减少调节性T细胞(抗炎，抑制性T细胞)的细胞凋亡。PD-1抑制剂是阻断PD-1的一类新药，可激活免疫系统以攻击肿瘤，并用于治疗某些类型的癌症。人类中的PD-1蛋白由PDCD1基因编码。PD-1是一种细胞表面受体，属于免疫球蛋白超家族，在T细胞和pro-B细胞上表达。PD-1结合两种配体PD-L1和PD-L2。在参与细胞凋亡的基因筛选中，TasukuHonjo及其同事于1992年在京都大学发现并命名为PD-1。在1999年，同一组实验证明，PD-1无活性的小鼠易患自身免疫性疾病，因此得出结论PD-1是免疫应答的负调节因子。PD-1有两个配体，PD-L1和PD-L2，它们是B7家族的成员。PD-L1蛋白在巨噬细胞和树突状细胞(DC)上响应LPS和GM-CSF处理上调，在T细胞和B细胞上TCR和B细胞受体信号上调，PD-L1在几乎所有鼠肿瘤细胞系中表达，包括用IFN-γ处理后的PA1骨髓瘤，P815肥大细胞瘤和B16黑素瘤。PD-L2表达受到更多限制，主要由DCs和少数肿瘤细胞系表达。PD-1是268个氨基酸的I型膜蛋白。PD-1是扩增的CD28/CTLA-4家族T细胞调节因子的成员。蛋白质的结构包括细胞外IgV结构域，随后是跨膜区和细胞内尾。细胞内尾部含有位于基于免疫受体酪氨酸的抑制基序和基于免疫受体酪氨酸的开关基序的两个磷酸化位点，这表明PD-1负调节T细胞受体TCR信号。这与配体结合后SHP-1和SHP-2磷酸酶与PD-1的细胞质尾部的结合一致。此外，PD-1连接上调E3-泛素连接酶CBL-b和c-CBL，触发T细胞受体下调。PD-1在活化的T细胞，B细胞和巨噬细胞的表面上表达，表明与CTLA-4相比，PD-1更广泛地负调节免疫应答。几个证据表明PD-1及其配体负调节免疫反应。已显示PD-1基因敲除小鼠分别在C57BL/6和BALB/c背景上发展出狼疮样肾小球肾炎和扩张型心肌病。在体外，用PD-L1-Ig处理抗CD3刺激的T细胞导致T细胞增殖和IFN-γ分泌减少。IFN-γ是促进T细胞炎症活性的关键促炎细胞因子。T细胞增殖减少也与减弱的IL-2分泌相关，这些数据表明PD-1负调节T细胞反应。使用PD-L1转染的DC和表达PD-1的转基因(Tg)CD4+和CD8+T细胞的实验表明CD8+T细胞更易受PD-L1的抑制，尽管这可能取决于TCR信号传导的强度。与负调节CD8+T细胞反应的作用相一致，使用慢性感染的LCMV病毒载体模型，RafiAhmed的研究表明，PD-1-PD-L1相互作用抑制病毒特异性CD8+T的效应功能的激活，扩增和获得。细胞可通过阻断PD-1-PD-L1相互作用而逆转。PD-L1在肿瘤细胞上的表达通过PD-1与效应T细胞的结合来抑制抗肿瘤活性。PD-L1在肿瘤中的表达与食管癌，胰腺癌和其他类型癌症的存活率降低相关，突出了该途径作为免疫治疗的靶点。触发PD-1，在单核细胞上表达并在单核细胞活化时上调，其配体PD-L1诱导IL-10产生，从而抑制CD4T细胞功能。在小鼠中，当注射抗CD3抗体并且大量胸腺细胞经历凋亡时，在胸腺中诱导该基因的表达。在BALB/c背景上繁殖的该基因缺陷的小鼠出现扩张性心肌病并死于充血性心力衰竭。这些研究表明，这种基因产物在T细胞功能中也很重要，有助于预防自身免疫性疾病。PD-1在CD8+T细胞上的过度表达是T细胞衰竭的指标之一(慢性感染或癌症中)。PD-1，PD-1的配体，在几种癌症中高度表达，因此PD-1在癌症免疫逃避中的作用已经确立。正在开发用于增强免疫系统的靶向PD-1的单克隆抗体用于治疗癌症。许多肿瘤细胞表达PD-L1，一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.人类N端氨基酶CD13/APN的特异性抑制剂在制备负免疫检查点受体(CTLA-4、PD-1)与肿瘤靶向WT1多肽的免疫调节剂的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.人类N端氨基酶CD13/APN的特异性抑制剂在制备负免疫检查点受体(CTLA-4、PD-1)与肿瘤靶向WT1多肽的免疫调节剂的药物中的应用。


2.权利要求1所述的人类N端氨基酶CD13/APN的特异性抑制剂是F23。


3.权利要求1所述的人类N端氨基酶CD13/APN的特异性抑制剂是ACTINONIN、BESTATIN和AMASTATIN。


4.新合成的H...

【专利技术属性】
技术研发人员：许洋，
申请(专利权)人：许洋，
类型：发明
国别省市：北京;11