一种用于减低骨肉瘤顺铂耐药性的药物组合物制造技术

本发明专利技术的目的在于提供一种用于减低骨肉瘤顺铂耐药性的药物组合物，所述药物组合物包括长链非编码RNA的抑制剂，该长链非编码RNA为DANCR Gene ID 57291，具有8304bp的长度，相应的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术通过分子生物学验证，发现lncRNA DANCR和骨肉瘤对顺铂的耐药密切相关，抑制lncRNA DANCR的表达能够降低骨肉瘤细胞对顺铂的耐药性，提高患者的预后及生存率，可用于临床治疗，减低患者的耐药性具有很好的实际应用价值。

A pharmaceutical composition for reducing cisplatin resistance of osteosarcoma

【技术实现步骤摘要】
一种用于减低骨肉瘤顺铂耐药性的药物组合物
本专利技术属于生物医学领域，提供了一种用于减低骨肉瘤顺铂耐药性的药物组合物。
技术介绍
骨肉瘤为间叶组织来源的好发于青少年患者长骨干骺端的原发性恶性骨肿瘤，在原发性骨肿瘤中，骨肉瘤的发病率仅次于浆细胞骨髓瘤，居第2位。骨肉瘤患者死亡率较高，化疗是骨肉瘤治疗的一线治疗方法之一。尽管在癌症初期内有比较好的治疗效果，但是随着用药时间的不断延长，大多数骨肉瘤患者开始对化疗药产生一定的耐药性。近些年来，大量研究表明骨肉瘤高死亡率很可能是由于一些肿瘤细胞在长期使用化疗药物后对化疗药物产生耐药性所导致的，因此深入研究骨肉瘤获得耐药性的机制，并籍此逆转耐药成为骨肉瘤中待解决的关键问题。长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的转录物，不具有编码蛋白质的能力。许多研究表明，lncRNAs与多种肿瘤的化学药物耐药性密切相关。lncRNAATB在乳腺癌中过度表达且与乳腺癌患者曲妥珠单抗耐药性呈正相关；lncRNALEIGC与胃癌患者的5氟尿嘧啶耐药有关；lncRNAHOTAIR与乳腺癌及非小细胞肺癌的耐药相关；lncRNANCK1-AS1可通过调节miR-137/TRIM24途径增加胶质瘤细胞对替莫唑胺的耐药性；许多lncRNAs，如HOTAIR，UCA1和MALAT1已被证明是肿瘤的发展和进展过程中的重要调节剂。目前，有关LncRNA在骨肉瘤耐药方向中的研究基本空白。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于减低骨肉瘤顺铂耐药性的药物组合物，更具体的涉及lncRNADANCR在降低骨肉瘤顺铂耐药性中的应用。本专利技术进行测序通过分子生物学验证，结果显示，发现lncRNADANCR和骨肉瘤对顺铂的耐药密切相关，抑制lncRNADANCR表达能降低骨肉瘤细胞对顺铂的耐药性，可用于临床治疗，减低患者的耐药性具有很好的实际应用价值。本专利技术采用了如下技术方案：一种用于减低骨肉瘤顺铂耐药性的产品，其特征在于，所述产品包含抑制长链非编码RNA表达的试剂，所述长链非编码RNA为DANCRGeneID57291，具有8304bp的长度，相应的DNA序列如SEQIDNO.1所示。本专利技术还提供了一种用于降低骨肉瘤患者顺铂耐药性的药物组合物，所述药物组合物包括DANCR的抑制剂。进一步，所述抑制剂不受限制，只要是可以降低DANCR表达水平或降低DANCR功能活性的均可。所述抑制剂包括DANCR本身、抑制型miRNA、抑制型转录调控因子或抑制型靶向小分子化合物。所述药物组合物含有药学中可接受的辅料或者辅助性成分。本专利技术所述药物组合物可以作为医药单独施用或与其他药物一起施用，可以与本专利技术的药物组合物一起施用的其他药物不受限制，只要它不损害本专利技术的治疗性或预防性药物组合物的效果即可。本专利技术所述药物组合物可根据需要制备成各种剂型，包括但不限于，经皮、粘膜、鼻、口颊、舌下或经口使用的片剂、溶液剂、颗粒剂、贴剂、膏剂、胶囊剂、气雾剂或栓剂。本专利技术所述药物组合物的施用途径不受限制，只要它能发挥期望的治疗效果或预防效果即可，包括但不限于静脉内，腹膜内，眼内，动脉内，肺内，口服，小泡内，肌肉内，气管内，皮下的，通过皮肤，通过胸膜，局部的，吸入，通过粘膜，皮肤，肠胃，关节内，心室内，直肠，阴道，颅骨内，尿道内，肝内，瘤内。在某些情况下，可以系统地给药，在某些情况下是局部地给药。本专利技术所述药物组合物的剂量不受限制，只要获得期望的治疗效果或预防效果即可，可以依据症状、性别、年龄等来恰当的确定。本专利技术药物组合物的剂量可以使用例如对疾病的治疗效果或者预防效果作为指标来确定。本专利技术还提供了一种诊断骨肉瘤的方法，所述方法包括如下步骤：(1)获得受试者的样品；(2)检测受试者样品中的DANCR的表达水平；(3)将测得的DANCR的表达水平与受试者的患病与否关联起来。(4)与对照相比，DANCR的表达水平增高，则该受试者被判断患有骨肉瘤、或者该受试者患有骨肉瘤的风险高、或者骨肉瘤患者被判断为预后不良。本专利技术还提供了一种降低骨肉瘤患者的顺铂耐药性的方法，所述方法包括降低DANCR表达量或者降低DANCR的调节活性。本专利技术的优点和有益效果：本专利技术发现了一种降低骨肉瘤顺铂耐药的分子标志物，使用该标志物可以降低骨肉瘤患者的顺铂耐药性，提高患者对顺铂的敏感性，提高患者的预后及生存率。附图说明图1显示利用qPCR检测DANCR表达情况的统计图(**代表P<0.05)；图2显示MTT方法检测顺铂对不同处理细胞的IC50的影响的统计图(**代表P<0.05)；图3显示EdU染色法检测DANCR敲低对骨肉瘤细胞顺铂耐药性影响的统计图(**代表P<0.05)。具体实施方式下面结合附图和实施例对本专利技术做进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人的实验室手册中所述的条件，或者按照制造厂所建议的条件。实施例1DANCR敲低实验1、骨肉瘤细胞的培养与转染1.1细胞培养将骨肉瘤细胞株U2os用含有10％胎牛血清，青、链霉素各100U/ml的DMEM于37℃、5％CO2的饱和湿度箱中培养。1.2细胞转染(1)转染前24小时，在400ul无抗生素培养基中接种0.5-2*105个肿瘤细胞，转染时细胞融合度为30-50％。(2)用50ulOpti-MEM稀释shRNA，其相应DNA序列如SEQIDNO.2所示(转染细胞的终浓度为50nM)，轻轻吹吸3-5次混匀。(3)轻轻颠倒混匀转染试剂，用50uLOpti-MEM稀释1ulLipo2000，轻轻吹吸3-5次混匀，室温下静置5min。(4)混匀转染试剂和shRNA稀释液，轻轻吹吸3-5次混匀，室温下静置20min。(5)转染复合物加入到24孔板中，100uL/孔，前后轻摇细胞板混合均匀。(6)细胞板置于37℃、5％CO2培养箱中培养18-48小时。转染4-6小时后换新鲜培养基。2、利用qPCR实验检测shDANCR的表达情况2.1提取细胞总RNA利用常规方法进行操作。2.2逆转录以提取的总RNA(1ug)为模板，加入以下反应体系，具体为：5xPrimeScrimeBuffer4ul，PrimeScrimeRTEnzymeMix1ul,OligodTPrimer(50uM)1ul，Random6mers(100uM)1uL，以无RNA酶的ddH2O将反应体积补足为20uL。将上述混合液置于37℃15min，85℃5s，即获得cDNA，可用于lncRNAReal-timePCR检测。2.3qPCR按日本Takara公司的SYBRPremixExTaqTM(TliRNase本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于减低骨肉瘤顺铂耐药性的产品，其特征在于，所述产品包含抑制长链非编码RNA表达的试剂，所述长链非编码RNA是DANCR，其相应DNA序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于减低骨肉瘤顺铂耐药性的产品，其特征在于，所述产品包含抑制长链非编码RNA表达的试剂，所述长链非编码RNA是DANCR，其相应DNA序列如SEQIDNO.1所示。


2.一种用于减低骨肉瘤顺铂耐药性的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含长链非编码RNA的抑制剂，所述长链非编码RNA是DANCR，其相应DNA序列如SEQIDNO.1所示。


3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，所述抑制剂包括抑...

【专利技术属性】
技术研发人员：王勇，潘海，王宁宁，李姗姗，刘一泽，赵伟，黄旭阳，徐天策，夏书月，
申请(专利权)人：沈阳医学院附属中心医院，
类型：发明
国别省市：辽宁;21