一种基于改造核糖体结合位点提高ε-己内酯产量的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于改造核糖体结合位点提高ε‑己内酯产量的方法。该方法以pRSFDuet为出发载体，将chmo基因和RBS

A method to improve the production of \u03b5 - caprolactone based on the modification of ribosome binding sites

【技术实现步骤摘要】
一种基于改造核糖体结合位点提高ε-己内酯产量的方法
本专利技术涉及ε-己内酯合成领域，具体涉及一种基于改造核糖体结合位点提高ε-己内酯产量的方法。
技术介绍
ε-己内酯，无色油状液体，具有芳香气味，一种无毒的重要的有机化合物中间体。该物质在工业应用范围广泛，可用于合成橡胶、合成纤维和合成树脂方面的生产；可用于制造己内酰胺、己二酸、粘合剂、涂料、环氧树脂稀释剂和溶剂；也可与各种树脂掺合改善其光泽、透明性和防粘性；还可用于医学材料，模拟人体皮肤等。目前，工业上生产-己内酯的能力已达到上万吨的规模。目前，ε-己内酯的生产方法有两种：化学氧化法和生物转化法。工业上主要用UCC(UnionCarbideCorporation)化学法产ε-己内酯，通过添加过氧酸氧化底物环己酮得到目的产物。在该方法中，会伴随一些非环境友好型的有机试剂，会对环境造成污染。由于化学法操作繁琐、环境问题严重等缺点，通过更为安全和高效的生物催化法越来越受欢迎。内酯主要是通过Baeyer-Villiger氧化环酮实现，其中主要是通过过氧化物使临近羰基的C-C键的氧化裂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于改造核糖体结合位点提高ε-己内酯产量的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)将chmo序列和RBS

【技术特征摘要】
20191130 CN 201911208924X1.一种基于改造核糖体结合位点提高ε-己内酯产量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将chmo序列和RBS21-adh序列插入pRSFDuet载体中，得到重组质粒pRSF-RBS10-CHMO-RBS21-ADH；
(2)根据步骤(1)所述重组质粒pRSF-RBS10-CHMO-RBS21-ADH设计chmo序列的核糖体结合位点序列，得到RBS11序列；
(3)将步骤(2)所述RBS11序列利用同源重组的方法替换chmo序列的核糖体结合位点序列，得到重组质粒pRSF-RBS11-CHMO-RBS21-ADH；
(4)将步骤(3)所述重组质粒pRSF-RBS11-CHMO-RBS21-ADH导入大肠杆菌感受态细胞E.coliBL21(DE3)中，得到工程菌株；
(5)诱导步骤(4)所述工程菌株表达蛋白，收菌，进行全细胞催化环己醇产ε-己内酯反应，得到ε-己内酯。


2.根据权利要求1所述的基于改造核糖体结合位点提高ε-己内酯产量的方法，其特征在于，步骤(2)所述RBS11序列如SEQIDNO...

【专利技术属性】
技术研发人员：李爽，熊婧卉，余皓，刘然，陈和锋，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44