一种间充质干细胞分泌因子的制备及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种间充质干细胞分泌因子的制备方法。与其他来源的间充质干细胞相比，如脐带间充质干细胞，本发明专利技术使用的多能诱导干细胞来源的间充质干细胞，来源更稳定，体外传代不易衰老。本方法制备工艺简单，所获得的间充质干细胞分泌因子，成分为人源性干细胞的分泌因子，避免了干细胞本身潜在的致瘤隐患，不含有任何外源性添加剂及防腐剂，不含支原体及内毒素，不易诱发敏感，便于储存，有更强的促血管生成能力及促皮肤缺损愈合能力，并对血管细胞增殖及血管新生有明显的促进作用，通过外敷的方式使用，可促进皮肤修复，延缓皮肤衰老，在皮肤损伤治疗及美容护肤产品的开发中具有强大的应用前景。

Preparation and application of a secretion factor of mesenchymal stem cells

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞分泌因子的制备及应用
本专利技术属于医疗健康领域，具体涉及一种基于多能诱导干细胞来源的间充质干细胞分泌因子的制备以及在促进血管新生及皮肤抗衰老修复方向的应用。
技术介绍
衰老是机体生命活动发展的必经阶段，而皮肤衰老是机体衰老最外在的特征。研究表明，皮肤衰老是一个复杂的生理过程，是由多种机制综合作用的结果，除了广义上的胶原纤维合成减少和弹力纤维变性，血管老化也被认为是皮肤衰老的重要标志之一。减缓血管老化，促进血管新生将是皮肤年轻化治疗的新方向。间充质干细胞(mesenchymalstemcell，MSC)具有组织修复能力强、自我更新能力强及多向分化，免疫原性低等特征，在临床应用中显示的极高的安全性，是组织工程学上理想的种子细胞。不同组织来源的MSC具有许多共同的生物学特性，但在免疫表型、分化潜能、转录组、蛋白质组和免疫调节活性等方面存在差异。来源于脐带的间充质干细胞(umbilicalcordderivedmesenchymalstemcells，uMSC)取材方便，无道德伦理争议，具有极强的免疫调节能力，是极具临床应用潜本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种间充质干细胞分泌因子的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n1)选用多能诱导干细胞，加入间充质干细胞完全培养基进行分化，12-16天后用对细胞进行分选，得到CD105阳性的细胞群，使用间充质干细胞完全培养基对获得的阳性细胞进行扩增；/n2)扩增至P4代次时对所得到的间充质干细胞进行表面标志物的鉴定，筛选具有间充质干细胞特征的细胞进行后续培养；/n3)继续培养至P5、P6、P7或P8代，当细胞汇合度为60％-70％时，吸去所述间充质干细胞完全培养基，使用平衡液润洗后，加入低糖DMEM；/n4)继续培养12-36小时后，收集细胞培养上清液，所述上清液经离心去除细胞碎片和杂质后过滤，即得包...

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞分泌因子的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)选用多能诱导干细胞，加入间充质干细胞完全培养基进行分化，12-16天后用对细胞进行分选，得到CD105阳性的细胞群，使用间充质干细胞完全培养基对获得的阳性细胞进行扩增；
2)扩增至P4代次时对所得到的间充质干细胞进行表面标志物的鉴定，筛选具有间充质干细胞特征的细胞进行后续培养；
3)继续培养至P5、P6、P7或P8代，当细胞汇合度为60％-70％时，吸去所述间充质干细胞完全培养基，使用平衡液润洗后，加入低糖DMEM；
4)继续培养12-36小时后，收集细胞培养上清液，所述上清液经离心去除细胞碎片和杂质后过滤，即得包含所述间充质干细胞分泌因子的溶液。


2.如权利要求1所述的间充质干细胞分泌因子的制备方法，其特征在于，所述的表面标志物为CD11、CD34、CD45、CD73、CD90和/或CD105中的一种或多种，所述间充质干细胞特征为CD11、CD34、CD45表达阳性率在0～2％区间内，CD73、CD90、CD105表达阳性率在90％～100％区间内。


3.如权利要求1所述的间充质干细胞分泌因子的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
对步骤1)-4)制备的间充质干细胞分泌因子进行支原体及内毒素检测，当结果为阴性时将制得的间充质干细胞分泌因子...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁小婷，林芳，刘中民，
申请(专利权)人：上海市东方医院同济大学附属东方医院，
类型：发明
国别省市：上海;31