用于解除免疫细胞免疫抑制的组合物、抗原递呈细胞及其制备方法技术

本发明专利技术公开用于解除免疫细胞免疫抑制的组合物、抗原递呈细胞及其制备方法。本发明专利技术的组合物包含下述(a)和(b)成分或编码它们的核酸：(a)可溶性TGF‑β调节肽、其突变体或其功能片段和(b)可溶性PD1与可溶性Gal9结合肽的融合蛋白、其突变体或其功能片段。本发明专利技术的组合物能够协同提高T淋巴细胞的免疫应答。

Composition, antigen presenting cell and preparation method for relieving immunosuppression of immune cells

【技术实现步骤摘要】
用于解除免疫细胞免疫抑制的组合物、抗原递呈细胞及其制备方法
本专利技术涉及免疫学以及医药领域，具体地涉及用于解除免疫细胞免疫抑制的组合物、抗原递呈细胞及其制备方法。
技术介绍
近年来，有大量的使用负载了抗原的DC疫苗治疗肿瘤的报道，从目前报道的数据来看，DC疫苗似乎代表了一种用于改善的肿瘤免疫治疗的新的非常有潜力的方法。然而，单独的DC疫苗的使用通常不能导致所期待的免疫治疗效果的改善，不能得到令人满意的临床效果。PD-1在活化的T细胞、B细胞以及在参与调解免疫激活与耐受平衡的单核细胞上表达。其主要作用是在针对感染的炎性应答中限制炎性周围的T细胞活性和限制自身免疫性。该调节的基础是PD-1分子的配体PD-L1和PD-L2相应多种促炎性因子被上调，并且可以结合炎症组织中活化T细胞上的PD-1分子，抑制T细胞功能，从而限制免疫应答。另外，发现在多种不同的肿瘤中，PD-L1表达通常上调，其通过与肿瘤浸润的淋巴细胞上面的PD-1结合而抑制局部的抗肿瘤T细胞应答，从而导致免疫逃逸的发生。研究发现在宫颈癌和肝癌中，有近半数以上的肿瘤浸润CD8阳性T细胞表达PD-1分子，其与肿瘤细胞表面表达的PD-L1分子结合后，可以导致T细胞的耗竭以及凋亡。最近，已经有数个靶向PD-1受体及其配体PD-L1以及CTLA-4的免疫检验点抑制剂药物获批上市。这些免疫检验点抑制剂在多种肿瘤如黑色素瘤，肾癌、结直肠癌、非小细胞肺癌和肝癌等患者中都有比较好的临床疗效。然而，目前的多个临床研究数据表明，仅仅使用免疫检验点抑制剂如PD-1/PD-L1抗体临床应答率较低，如在肝癌患者中，仅仅15％左右的患者能够获得临床受益。在更近的研究中，已经有在临床模型中评价了与PD-1途径免疫检验点抑制剂组合的抗肿瘤效果。Gal9结合肽参与T细胞衰竭过程的Tim3/Gal9通路。应用抗Gal9结合肽抗体可对化疗和DNA疫苗产生协同作用。抗Gal9结合肽治疗增强Tc的细胞毒活性，并抑制Tim3+的肿瘤相关树突状细胞，从而对肿瘤细胞产生更有效的杀伤。不过目前国内外尚无Gal9结合肽靶点相关药品获批上市。目前有13种处在临床试验阶段的Gal9结合肽抗体及7种相关药品。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人在免疫调节剂研发领域进行了深入研究，基于高通量筛选技术发现，通过使用可溶性PD1与可溶性Gal9结合肽的融合蛋白和可溶性TGF-β调节肽可增强信号通路阻断，发挥各组分的协同作用，解除T淋巴细胞的免疫抑制，大大提升抗原递呈细胞的活性。至少部分地基于上述发现完成了本专利技术。具体地，本专利技术包括以下内容。本专利技术的第一方面，提供一种用于解除免疫细胞免疫抑制的组合物，该组合物包含下述(a)和(b)成分，或编码(a)或(b)成分至少之一的核酸：(a)可溶性TGF-β调节肽、其突变体或其功能片段；和(b)可溶性PD1和可溶性Gal9结合肽的融合蛋白、其突变体或其功能片段。在某些具体实施方案中，可溶性TGF-β调节肽的序列为下述(a’)至(c’)中的一种：(a’)SEQIDNo.1所示的氨基酸序列；(b’)与(a’)具有相同物种来源且同源性为95％以上的氨基酸序列；(c’)在(a’)的基础上经氨基酸突变得到且保留活性的序列。在某些具体实施方案中，所述可溶性TGF-β调节肽为TGFBR3在金属蛋白酶作用下进行裂解后产生的可溶性功能片段。在某些具体实施方案中，所述编码(a)成分的核酸包括编码TGFBR3胞外结构域的核酸，编码所述(b)成分的核酸包括编码Tim3的胞外结构域的核酸和编码可溶性PD1的胞外结构域的核酸。在某些具体实施方案中，编码所述(a)成分的核酸具有SEQIDNo.2所示的序列，所述编码(b)成分的序列具有SEQIDNo.3所示的序列。本专利技术的第二方面，提供一种工程化的抗原递呈现细胞，其能够用于解除肿瘤免疫抑制，在工程化的免疫细胞内包含第一方面所述的组合物。在某些具体实施方案中，所述抗原递呈细胞进一步包括抗原或表达所述抗原的核酸。在某些具体实施方案中，抗原递呈细胞为树突状细胞。本专利技术的第三方面，提供工程化的抗原递呈细胞的制备方法，包括使含有第一方面所述的组合物包含于抗原递呈细胞，从而获得所述工程化的抗原递呈细胞的步骤。在某些具体实施方案中，工程化的抗原递呈细胞的制备方法包括：(1)构建能够产生(a)和(b)成分的核酸；(2)从静脉血中分离得到外周血单核细胞，并诱导分化得到抗原递呈细胞；和(3)将步骤(1)的核酸引入步骤(2)的抗原递呈细胞，并在适于所述核酸表达的条件下培养所述抗原递呈细胞。本专利技术还提供第一方面所述的组合物在调节T细胞活性中的应用。本专利技术通过利用TGF-β调节肽，其与TGF-β的亲和力大于与TGFBR1或TGFBR2的亲和力，从而解除TGFβ对DC成熟的阻断，进而解除T细胞功能丧失的免疫抑制状态。另一方面，本专利技术还利用PD1-Gal9结合肽的整合蛋白来进一步大大增强解除T细胞抑制的效果，释放其杀伤肿瘤的功能。经实验证实TGF-β通路的阻断以及与PD1-Gal9结合肽的组合能够产生多通路协同作用，大大提高了各成分的效果。附图说明图1为使用编码本专利技术组合物各组分蛋白的mRNA以及抗原mRNA转染DC细胞后，在体外致敏T细胞的实验中CD8T细胞免疫应答结果。图1的各组柱中，从左到右分别为CD8IFN-γ+；CD8IFN-γ+,TNF-α+；CD8TNF-α+细胞占总CD8T细胞的比例。图2为使用编码本专利技术组合物各组分蛋白的mRNA以及抗原mRNA转染DC细胞后，在体外致敏T细胞的实验中CD4T细胞免疫应答结果。图2的各组柱中，从左到右分别为CD4IFN-γ+；CD4IFN-γ+,TNF-α+；CD4TNF-α+细胞占总CD8T细胞的比例。具体实施方式现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为具体公开了该范围的上限和下限以及它们之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。本专利技术中，术语“突变体”是指与天然存在蛋白或野生型蛋白相比具有突变但基本同源且仍保留原有活性的蛋白。其中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于解除免疫细胞免疫抑制的组合物，其特征在于，包含下述(a)和(b)成分，或编码(a)或(b)成分的核酸：/n(a)可溶性TGF-β调节肽、其突变体或其功能片段；和/n(b)可溶性PD1与可溶性Gal9结合肽的融合蛋白、其突变体或其功能片段。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于解除免疫细胞免疫抑制的组合物，其特征在于，包含下述(a)和(b)成分，或编码(a)或(b)成分的核酸：
(a)可溶性TGF-β调节肽、其突变体或其功能片段；和
(b)可溶性PD1与可溶性Gal9结合肽的融合蛋白、其突变体或其功能片段。


2.根据权利要求1所述的用于解除免疫细胞免疫抑制的组合物，其特征在于，所述可溶性TGF-β调节肽的序列为下述(a’)至(c’)之一：
(a’)SEQIDNo.1所示的氨基酸序列；
(b’)与(a’)具有相同物种来源且同源性为95％以上的氨基酸序列；
(c’)在(a’)的基础上经氨基酸突变得到且保留活性的序列。


3.根据权利要求1所述的用于解除免疫细胞免疫抑制的组合物，其特征在于，所述可溶性TGF-β调节肽为TGFBR3在金属蛋白酶作用下进行裂解后产生的可溶性功能片段。


4.根据权利要求1所述的用于解除免疫细胞免疫抑制的组合物，其特征在于，所述编码(a)成分的核酸包括编码TGFBR3胞外结构域的核酸，编码所述(b)成分的核酸包括编码Tim3的胞外结构域的核酸和编码PD1的胞外结构域的核酸。


5.根据权利要求4所述的用于解除免疫细...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋俊，林鑫，
申请(专利权)人：启辰生生物科技珠海有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44