神经调节蛋白1在制备增强TRPC6通道活性产品中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种神经调节蛋白1在制备增强TRPC6通道活性产品中的应用。本发明专利技术通过免疫荧光实验发现TRPC6通道蛋白在海马区与NRG1的ErbB4受体共标；进一步通过免疫印迹证明了NRG1能促进TRPC6通道蛋白的亚硝基化。然后通过全细胞膜片钳实验证明亚硝基化抑制剂和TRPC6通道阻断剂都能够阻断NRG1‑ErbB4通路对GABA释放的促进作用，同时在表达ErbB4受体的中间神经元上敲除TRPC6通道阻断了NRG1对促进GABA释放的作用，进而导致神经元节律性振荡和精神分裂症样行为学的异常。本发明专利技术的研究结果表明，NRG1能够通过促进TRPC6通道蛋白的亚硝基化来激活TRPC6通道，进而增加GABA的释放。

【技术实现步骤摘要】
神经调节蛋白1在制备增强TRPC6通道活性产品中的应用
本专利技术涉及神经系统疾病治疗领域，尤其涉及一种神经调节蛋白1在制备增强TRPC6通道活性产品中的应用。
技术介绍
经典瞬时受体电位通道6型(TransientReceptorPotentialCationChannelSubfamilyCMember6，TRPC6)通道是一类非选择性阳离子通道，属于瞬时受体电位通道家族(TRP)。TRPC6通道在外周和神经系统内都有丰富的表达，在中枢神经系统中主要表达在神经元上，其中在海马、皮层以及背侧纹状体中表达较高，与精神分裂症、脑卒中、老年痴呆、癫痫等多种神经系统疾病相关。在外周则主要表达在内皮细胞上，与家族遗传性局灶性节段性肾小球硬化、肾功能衰竭等疾病相关。该离子通道特异性的调节剂是深入研究TRPC6离子通道在疾病中的作用机制研究的重要工具。目前关于TRPC6通道的高选择性小分子激动剂的产品非常少。由于TRPC6是一种非选择性的阳离子通道，能够调节胞内的Ca2+浓度。而蛋白质巯基亚硝基化(proteinS-nitrosylation)作为一种可逆的蛋白质转录后修饰，可以通过亚硝基与蛋白质半胱氨酸巯基共价结合，进而完成调节离子通道、代谢酶、半胱氨酸蛋白酶、磷酸酶活性等过程。有文献报道TRPC6通道通过调节心肌细胞的亚硝基化，从而参与了杜氏肌萎缩症的发病机制。然而，关于TRPC6通道自身的亚硝基化参与的其他生理和病理过程未见有相关报道。TRPC6离子通道特异性的调节剂是深入研究TRPC6离子通道在疾病中的作用机制研究的重要工具。目前围绕作用于TRPC6通道活性的试剂产品以抑制剂或拮抗剂为主，而用于制备激活/促进/增强TRPC6通道活性的试剂产品种类非常有限。其中贯叶金丝桃素(Hyperforin，Hyp)是唯一已知的TRPC6通道选择性激活剂，尽管其被广泛应用，但其化学稳定性较差，化学上不稳定；后续开发出了Hyp9(一种间苯三酚衍生物)，它能够增加钙进入细胞的数量，并选择性增加TRPC6通道电流，然而除此之外，该激动剂Hyp9特异性不足，还能间接抑制突触后5-羟色胺和去甲肾上腺素的再摄取。TRPC6通道激动剂产品稀少不利于现有技术对TRPC6通道的生理病理学机制研究，也不利于开发出以TRPC6通道为作用靶点的新用途。目前，通过离子通道蛋白亚硝基化进而增强TRPC6通道活性的试剂产品未见报道。神经调节蛋白1(Neuregulin-1，NRG1)是一类包含表皮生长因子样结构域(EGF)的多肽类神经生长因子，由位于8号染色体短臂的8p12-21区域的Nrg1基因编码。目前有超过30种的异构剪切体被发现，根据N末端的不同分为I到VI种类型。NRG1主要是通过作用于ErbB4受体发挥生理功能。在过去十几年中的研究表明NRG1和ErbB4受体在发育和成年的大脑都有丰富的表达，包括与精神疾病密切相关的前额皮质(PFC)和海马体(Hippocampus)等脑区，其中ErbB4被发现主要表达在γ-氨基丁酸(GABA)能中间神经元上。GABA是一种广泛分布于中枢神经系统内的抑制性神经递质，主要用于调控神经元的兴奋性，维持神经系统兴奋和抑制平衡，对于调节神经系统稳态具有重要作用；此外，GABA能突触传递异常可导致多种精神类疾病的发生和发展，调节GABA能突触传递已成为治疗失眠、癫痫、焦虑和精神分裂症等神经系统疾病非常重要的手段之一。研究发现NRG1在海马、前额叶、杏仁核等脑区可以通过ErbB4受体增强GABA释放，进而影响了锥体神经元的兴奋性和突触可塑性，在精神分裂症、癫痫和中风等神经和精神疾病的发病和治疗中发挥重要的作用。截至目前，还未见到NRG1通过亚硝基化作用影响TRPC6通道功能的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种神经调节蛋白1在制备增强TRPC6通道活性产品中的应用，在神经和精神疾病治疗领域具有较好的应用前景。为实现以上目的，本专利技术提供一种神经调节蛋白1在制备增强TRPC6通道活性产品中的应用。具体的，所述神经调节蛋白1通过促进TRPC6亚硝基化来增强TRPC6通道活性。具体的，所述增强TRPC6通道活性产品为TRPC6通道的激动剂。在本专利技术一些实施例中，所述增强TRPC6通道活性产品为治疗神经和精神疾病的药物。在本专利技术一些实施例中，所述神经和精神疾病包括精神分裂症、焦虑症、失眠、癫痫、中风、抑郁、自闭症等中的至少一种。在本专利技术一些实施例中，所述神经调节蛋白1为天然提取的神经调节蛋白1或者基因重组表达的神经调节蛋白1。在本专利技术一些实施例中，所述基因重组表达的神经调节蛋白1的氨基酸序列如序列表中序列1所示。在本专利技术一些实施例中，所述增强TRPC6通道活性产品为制剂或包括所述制剂的试剂盒。在本专利技术一些实施例中，所述制剂包括粉剂与液体制剂中的至少一种。在本专利技术一些实施例中，所述粉剂为粉针剂，所述液体制剂为注射液。在本专利技术一些实施例中，所述神经调节蛋白1为人源性神经调节蛋白1。本专利技术的有益效果：本专利技术通过免疫荧光实验发现TRPC6通道蛋白在海马区与NRG1的ErbB4受体共标；进一步通过免疫印迹证明了NRG1能促进TRPC6通道蛋白的亚硝基化。然后通过全细胞膜片钳实验证明亚硝基化抑制剂和TRPC6通道阻断剂都能够阻断NRG1-ErbB4通路对GABA释放的促进作用，同时在表达ErbB4受体的中间神经元上敲除TRPC6通道阻断了NRG1对促进GABA释放的作用，进而导致神经元节律性振荡和精神分裂症样行为学的异常。本专利技术的研究结果表明，NRG1能够通过促进TRPC6通道蛋白的亚硝基化来激活TRPC6通道，进而增加GABA的释放。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对本专利技术范围的限定。图1示出了Erbb4-TD小鼠的大脑海马CA1区中ErbB4受体与TRPC6通道蛋白的共标情况。图2为rNRG1-β1促进TRPC6亚硝基化对升高C57BL/6小鼠海马CA1区mIPSCs频率作用的影响。A为rNRG1-β1对TRPC6及其亚硝基化水平的代表性Westernblot示意图(单位：kd)；B为rNRG1-β1对TRPC6亚硝基化水平的统计结果；C为rNRG1-β1对Biotin-TRPC6水平的统计结果。D为分别不存在亚硝基化抑制剂(左)、存在亚硝基化抑制剂N-乙基马来酰亚胺(NEM,右)时，加入rNRG1-β1前后的mIPSCs代表性示意图(比例尺：250ms，50pA)；E为各组mIPSCs的频率统计图。图3为阻断TRPC通道、TRPC5通道或TRPC6通道对rNRG1-β1升高C57BL/6小鼠海马CA1区mIPSCs频率作用的影响。A为分别存在TRPC通道阻断剂SKF96365(左)、TRPC5通道阻断剂Galangin(中)、TRPC6通道阻断剂本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.神经调节蛋白1在制备增强TRPC6通道活性产品中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.神经调节蛋白1在制备增强TRPC6通道活性产品中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述神经调节蛋白1通过促进TRPC6亚硝基化来增强TRPC6通道活性。


3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述增强TRPC6通道活性产品为治疗神经和精神疾病的药物。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述神经和精神疾病包括精神分裂症、焦虑症、失眠、癫痫、中风、抑郁、自闭症等中的至少一种。


5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述神经调节蛋白1为天然提取的神经调节蛋白1或者基因重组表...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈永君，夏宇岑，万超凡，颜靖岚，姚琳，许能贵，
申请(专利权)人：广州中医药大学广州中医药研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44