提高米尔贝霉素A3/A4或其衍生物产量的方法技术

本发明专利技术涉及提高米尔贝霉素A3/A4或其衍生物产量的方法。本发明专利技术中，确定了以其基因组中A1和/或A2‑R两段基因簇作为重组克隆的靶标，在菌株中重组表达该两段基因簇，使得米尔贝霉素A3/A4或其衍生物的产量呈现极为显著的提高。本发明专利技术还提供了遗传工程化的米尔贝霉素A3/A4或其衍生物的生产菌及其应用。

Methods of increasing the yield of milbemycin A3 / A4 or its derivatives

【技术实现步骤摘要】
提高米尔贝霉素A3/A4或其衍生物产量的方法
本专利技术属于生物化工领域，更具体地，本专利技术涉及一种提高米尔贝霉素A3/A4或其衍生物产量的方法。
技术介绍
米尔贝霉素A3/A4是阿维菌素的结构类似物，同属于十六元环大环内酯的聚酮类化合物，分子式为C31H44O7/C32H46O7，其化学结构式如下：由于米尔贝霉素A3/A4活性高效、毒副作用低、安全可靠、易降解、以及它们在驱线虫和除杀体内外寄生虫均有优良的效果，因而被广泛应用于抗寄生虫药，其应用价值和研究前景越来越受到世界的关注。5-酮-米尔贝霉素(5-oxomilbemycin)A3/A4是化学法合成米尔贝肟(5-oximilbemycin)A3/A4的前体化合物，其分子式为C31H42O7/C32H44O7，化学结构式如下式左侧化合物：米尔贝肟(化学结构式如上式右侧化合物)是5-酮-米尔贝霉素A3/A4与羟胺发生肟化反应后的衍生物(化学反应式如上式)，其分子式为C31H43NO7/C32H45NO7。米尔贝肟主要用于防治宠物猫犬的体内外寄生虫，其杀本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高米尔贝霉素A3/A4或其衍生物的产量的方法，其特征在于，所述方法包括：在米尔贝霉素A3/A4或其衍生物的生产菌中，引入：/n(1)A1基因簇，和/或/n(2)A2-R基因簇或其变体，所述变体中milF基因被下调。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高米尔贝霉素A3/A4或其衍生物的产量的方法，其特征在于，所述方法包括：在米尔贝霉素A3/A4或其衍生物的生产菌中，引入：
(1)A1基因簇，和/或
(2)A2-R基因簇或其变体，所述变体中milF基因被下调。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的米尔贝霉素A3/A4的衍生物为5-酮-米尔贝霉素A3/A4。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的A1基因簇包括milA1基因；或
所述的A2-R基因簇包括milA2、milC、milE、milA4、sbi_00730、milF、sbi_00732、milA3、milR基因。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的A1基因簇为：
(a)SEQIDNO:1所示核苷酸序列或其简并序列的多核苷酸；
(b)核苷酸序列与SEQIDNO:1所示核苷酸序列或其简并序列互补的多核苷酸；
(c)核苷酸序列与SEQIDNO:1所示核苷酸序列或其简并序列的同源性≥85％的多核苷酸。


5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的A2-R基因簇为：
(a)SEQIDNO:2所示核苷酸序列或其简并序列的多核苷酸；
(b)核苷酸序列与SEQIDNO:2所示核苷酸序列或其简并序列互补的多核苷酸；或
(c)核苷酸序列与SEQIDNO:2所示核苷酸序列或其简并序列的同源性≥85％的多核苷酸。


6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，分别获取(1)和(2)的两种基因簇以及分别引入到米尔贝霉素A3/A4或其衍生物的生产菌中；较佳地，将(1)和(2)同时转入到米尔贝霉素A3/A4或其衍生物的生产菌中，或分别获取(1)和(2)的两种基因簇、拼接后转入到米尔贝霉素A3/A4或其衍生物的生产菌中；更佳地，分别获取(1)和(2)的两种基因簇、分别转入到米尔贝霉素A3/A4或其衍生物的生产菌中，之后通过接合转移的方式，获得同时携带(1)和(2)的两种基因簇的生产菌。


7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的米尔贝霉素A3/A4或其衍生物的生产菌包括：链霉菌(Streptomyces)；较佳地为吸水链霉菌(Streptomyceshygroscopicus)。


8.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈少欣，芦银华，姜卫红，卫科科，李雷，吴远杰，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，上海医药工业研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31