一种检测联苯菊酯的试纸条及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种检测联苯菊酯的试纸条及其应用。试纸条包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)，所述反应膜上具有包被有联苯菊酯半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有联苯菊酯单克隆抗体‑胶体金标记物。本发明专利技术还提供了一种应用上述联苯菊酯试纸条检测土壤及门窗洞等砌体墙中联苯菊酯残留的方法。本发明专利技术所提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低等特点，适合大量样本的筛查和现场监控。

A test strip for detecting bifenthrin and its application

【技术实现步骤摘要】
一种检测联苯菊酯的试纸条及其应用
本专利技术涉及一种检测联苯菊酯的试纸条及其应用，具体涉及一种用于检测联苯菊酯的胶体金试纸条，其特别适用于土壤及门窗洞等砌体墙中联苯菊酯残留的快速定性、定量检测。
技术介绍
联苯菊酯，又名为天王星，虫螨灵，毕芬宁，是一种高效合成除虫菊酯杀虫杀螨剂，具有触杀、胃毒作用，无内吸、熏蒸作用。杀虫谱广，对螨也有较好防效。作用迅速，在土壤中不移动，属于高效低毒农药，但其残留仍能引起人畜中毒，严重危害人类健康。由于不同的配比有不同的作用，同时卫生杀虫剂是防治害虫的化工产品，主要应用于人类居住的生活环境，直接关系到人们的身体健康和生命安全。在南方地区，该药物经常用于防治白蚁，当联苯菊酯含量低于15ppm时，则未达到标准，无法起到药物屏障作用；当联苯菊酯含量高于87ppm时，则浓度超标，造成土壤污染。因此，本申请对联苯菊酯残留量的检测方法具有实际意义，检测范围能够检测15ppm/87ppm。尤其是快速检测方法的建立将有利于提高监管手段和监督水平。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种灵敏度高、操作简单、成本低、检测时间短的联苯菊酯残留检测试纸条。本专利技术所提供的检测联苯菊酯残留的试纸条，包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)；所述反应膜上具有包被有联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有联苯菊酯单克隆抗体-胶体金标记物。所述联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物是由联苯菊酯半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。所述联苯菊酯单克隆抗体是以联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，是由联苯菊酯单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌获得；所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。所述样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)依次粘贴在底板(7)上，所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。本专利技术的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：1)制备喷涂有联苯菊酯单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；2)制备具有包被有联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。具体地说，步骤包括：1)半抗原制备：将化学反应得到联苯菊酯半抗原；2)将联苯菊酯半抗原与载体蛋白偶联，得到联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物；3)用联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到联苯菊酯单克隆杂交瘤细胞株；4)提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；5)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；6)将步骤3)制备的联苯菊酯单克隆抗体加入步骤5)制备的胶体金中，得到联苯菊酯单克隆抗体-胶体金标记物；7)将联苯菊酯单克隆抗体-胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，37℃烘1h后取出，置于干燥环境中保存备用；8)将联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物包被在反应膜上构成检测线，将羊抗鼠抗抗体包被在反应膜上构成质控线；9)将样品吸收垫用含0.5％牛血清白蛋白(体积分数)、pH为7.2、0.1mol/L磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；10)在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，样品吸收垫盖住结合物释放垫，最后切成3mm宽的小条，加塑料盒，真空包装，4～30℃条件下可保存12个月。本专利技术的另一个目的是提供一种应用上述试纸条检测蔬菜及农作物中联苯菊酯残留的方法，它包括步骤：(1)样品前处理；(2)用试纸条进行检测；(3)分析检测结果。本专利技术的联苯菊酯快速检测试纸条采用高度特异性的抗体抗原反应及竞争抑制免疫层析分析技术，将联苯菊酯单克隆抗体-胶体金标记物固定于结合物释放垫上，样品中的联苯菊酯在流动过程中，与结合物释放垫上的联苯菊酯单克隆抗体-胶体金标记物结合，形成药物-抗体-胶体金标记物。样本中的药物与反应膜检测线上的联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物竞争结合联苯菊酯单克隆抗体-胶体金标记物，根据检测线红色条带有无或颜色深浅来判断待测样品液中是否含有联苯菊酯残留。检测时，样品经处理后滴入试纸条孔内，当联苯菊酯在样品中的浓度低于检测限或为零时，单克隆抗体-胶体金标记物在层析过程中会与固定在反应膜上的联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物结合，在检测线(T)和质控线(C)内各出现一条红色条带；如果联苯菊酯在样品中的浓度等于或高于检测限，单克隆抗体-胶体金标记物会与联苯菊酯全部结合，从而在T线处因为竞争反应不会与联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带。本专利技术的试纸条具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。用本专利技术试纸条检测联苯菊酯残留的方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。附图说明图1为联苯菊酯半抗原合成图。图2为试纸条剖面结构示意图。具体实施方式下面结合具体的实施例来进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术，而不用来限制本专利技术的范围。实施例1联苯菊酯检测试纸条的制备该试纸条的制备方法主要包括以下步骤：1)制备喷涂有联苯菊酯单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；2)制备具有包被有联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和PVC底板组装成试纸条。下面分步详细叙述：1、联苯菊酯半抗原的制备取化合物a0.322g，加甲醇30ml溶解，澄清，标为A液，取化合物b0.155g，加水2ml溶解，加入到A液中，室温搅拌2h，停止反应，旋蒸，除去甲醇，加水60ml，乙酸乙酯80ml萃取，分去水相，有机相浓缩蒸干，上硅胶柱，石油醚/乙酸乙酯(v/v，5/1)洗脱分离，得到联苯菊酯半抗原产物化合物c0.38g，收率89.83％。2、免疫原的制备取联苯菊酯半抗原16mg，加DMF1ml溶解，澄清，加EDC14.2mg，加NHS9.87mg，室温反应2h，得到半抗原活化液A液；取牛血清白蛋白(BSA)，加0.05MPB缓冲液溶解，得到B液，将A液滴加到B液中，室温反应4h，0.02MPBS透析纯化3天，每天换液3次，离心分装，得到联苯菊酯-BSA偶联物，即为免疫原，-20℃保存，备用。3、包被原的制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测联苯菊酯的试纸条，包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)，其特征在于所述反应膜上具有包被有联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有联苯菊酯单克隆抗体-胶体金标记物，所述联苯菊酯半抗原的制备方法如下：/n取化合物a 0.322g，加甲醇30ml溶解，澄清，标为A液，取化合物b 0.155g，加水2ml溶解，加入到A液中，室温搅拌2h，停止反应，旋蒸，除去甲醇，加水60ml，乙酸乙酯80ml萃取，分去水相，有机相浓缩蒸干，上硅胶柱，石油醚/乙酸乙酯(v/v，5/1)洗脱分离，得到联苯菊酯半抗原产物化合物c 0.38g，收率89.83％。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测联苯菊酯的试纸条，包括样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)和底板(7)，其特征在于所述反应膜上具有包被有联苯菊酯半抗原-载体蛋白偶联物的检测线(5)和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线(6)，所述结合物释放垫(2)喷涂有联苯菊酯单克隆抗体-胶体金标记物，所述联苯菊酯半抗原的制备方法如下：
取化合物a0.322g，加甲醇30ml溶解，澄清，标为A液，取化合物b0.155g，加水2ml溶解，加入到A液中，室温搅拌2h，停止反应，旋蒸，除去甲醇，加水60ml，乙酸乙酯80ml萃取，分去水相，有机相浓缩蒸干，上硅胶柱，石油醚/乙酸乙酯(v/v，5/1)洗脱分离，得到联苯菊酯半抗原产物化合物c0.38g，收率89.83％。


2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述样品吸收垫(1)、结合物释放垫(2)、反应膜(3)、吸水垫(4)依次粘贴在底板(7)上。


3.如权利要求1-2任一项所述的试纸条，其特征在于所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。


4.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述联苯...

【专利技术属性】
技术研发人员：张亮，贾慧娴，熊先贵，彭凯俊，万宇平，王思忠，曾小虎，崔海峰，崔娜，
申请(专利权)人：成都市房屋安全事务中心，
类型：发明
国别省市：四川;51