一种检测犬cTnI的试纸条及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种检测犬cTnI的试纸条，包括：反应膜，其两端各设有一连接段，两连接段中间为检测段，检测段表面设有检测带，检测带上喷涂有包被用鼠抗犬cTnI单克隆抗体；样本垫，其一端设有连接段，样本垫的连接段覆盖并固定于硝酸纤维素膜的一连接段上，样本垫上喷涂有标记物，标记物中含有乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体；吸收垫，其一端设有连接段，吸收垫的连接段覆盖并固定于硝酸纤维素膜的另一连接段上。本发明专利技术提供的检测犬cTnI的试纸条，操作方便、快捷且灵敏度高。

Test paper strip for detecting dog cTnI and preparation method thereof

The invention discloses a test strip for detection of canine cTnI include: reaction film, its ends are respectively provided with a connecting section, the middle section is connected with two detection section, test section is arranged on the surface of detection, detection with spray coated anti canine cTnI using a monoclonal antibody; the sample pad, the other end is provided with a connecting section the connecting section, the sample pad is covered and fixed on nitrocellulose membrane as a connecting section, the sample pad are sprayed on the marker, marker containing latex fluorescent microspheres labeling of monoclonal antibodies against canine cTnI rats; absorption pad, the other end is provided with a connecting section, and a connecting section covering the absorption section of the fixed connection on the nitrocellulose membrane on the pad. The invention provides a test strip for detecting dog cTnI, which has the advantages of convenient operation, high speed and high sensitivity.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于宠物疾病临床诊断领域，具体涉及一种用免疫层析技术检测犬cTnI的试纸条及其制备方法。
技术介绍
肌钙蛋白复合物由3个亚基：心肌肌钙蛋白T（cTnT）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）和肌钙蛋白C（TnC）组成，它们帮助调节细胞的兴奋收缩偶联。cTnI是cTnC和钙离子结合前防止肌动蛋白与肌球蛋白相互作用的抑制元件。肌小节损伤导致cTnI和肌动蛋白脱离，随后细胞膜破裂cTnI进入血液循环。因此，在血清或血浆中检测到高水平的cTnI，被认为是心肌损伤和坏死的一个高度敏感和特异性的指标。cTnI在哺乳动物中密切同源，这也使得在犬猫上可以使用为人类开发的免疫测定方法来进行精确的测定。cTnI的免疫测定分析已经被证实可应用于犬。心肌肌钙蛋白可结合其他诊断方法，为脓毒血症和胃扩张扭转的预后提供有用的信息。急性心律失常或心收缩功能不全的犬，其cTnI水平极度升高，这与心肌炎时的表现相符，cTnI水平可以作为监测该疾病治疗效果的一个工具。Oyama等评估了269只有和无心脏病的cTnI。他们发现，与健康犬相比，心肌病犬、二尖瓣病变犬和主动脉下狭窄犬，其cTnI水平都显著增高。在市场上，用于诊断犬类cTnI的试剂非常少，而且大多是酶联免疫试剂，这种试剂不稳定且检测效率低，在实际应用中还同时存在检测时间过长、重复性差等缺点。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是：现有技术中用于检测犬类cTnI的试剂少，且存在不稳定、检测效率低、检测时间长和重复性差的缺点。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种方便、快捷且高灵敏度的检测犬cTnI的试纸条和及其制备方法。本专利技术提供的一种检测犬cTnI的试纸条，包括：反应膜，其两端各设有一连接段，两连接段中间为检测段，所述检测段表面设有检测带，所述检测带上喷涂有包被用鼠抗犬cTnI单克隆抗体；样本垫，其一端设有连接段，所述样本垫的连接段覆盖并固定于所述硝酸纤维素膜的一连接段上，样本垫上喷涂有标记物，标记物中含有乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体；吸收垫，其一端设有连接段，所述吸收垫的连接段覆盖并固定于所述硝酸纤维素膜的另一连接段上。作为优选技术方案，所述反应膜的检测段还设有质控带，所述质控带位于所述检测段上靠近所述吸收垫的一侧，而检测带位于所述检测段上靠近所述样本垫的一侧；其中，所述质控带上覆有特异性抗体；所述标记物中还含有乳胶荧光微球标记的与所述特异性抗体结合的抗原。作为优选技术方案，所述抗原为兔IgG，所述特异性抗体为羊抗兔IgG。作为优选技术方案，所述标记物中乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体与乳胶荧光微球标记的所述抗原的体积比为1:1~3:1。作为优选技术方案，所述标记物中乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体与所述乳胶荧光微球标记的兔IgG的体积比为2:1。作为优选技术方案，所述样本垫为玻璃纤维素膜，所述反应膜为硝酸纤维素膜，所述吸收垫为吸水纸。作为优选技术方案，上述的检测犬cTnI的试纸条，还包括底板，所述反应膜、样本垫和吸收垫均固定于所述底板上。本专利技术提供上述的检测犬cTnI的试纸条的制备方法，包括如下步骤：1）包被液制备：取包被用鼠抗犬cTnI单克隆抗体加入磷酸盐缓冲液中，制成检测带包被液；取所述特异性抗体加入磷酸盐缓冲液中，制成质控带包被液；2）反应膜的处理：反应膜的检测段上标记检测带和质控带，在检测带上喷覆检测带包被液，在质控带上喷覆质控带包被液，然后干燥；3）样本垫的预处理：将样本垫浸泡于样本垫处理液中，然后干燥（预处理能够降低背景信号，提高有效光信号，同时减小变异。）；4）乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体：乳胶荧光微球的分散液，离心，弃上清液后，用标记缓冲液复溶，并且同时加入碳二亚胺、标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体和N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌反应，随后加入赖氨酸，搅拌，然后离心，弃上清液，最后用标记稀释液复溶；5）乳胶荧光微球标记的所述抗原：取乳胶荧光微球的分散液，离心，弃上清液后用标记缓冲液复溶，并且同时加入碳二亚胺、所述抗原、N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌反应，随后加入赖氨酸，搅拌，然后离心，弃上清液，最后用标记稀释液复溶；6）取步骤4）得到的混合液与步骤5）得到的混合液混合，得到标记物混合液，然后喷覆在步骤3）得到的预处理后的样本垫的上表面，干燥；7）步骤6）得到的样本垫的连接段的下表面覆盖并且固定于所述反应膜的一连接段上，吸收垫的连接段覆盖并且固定于所述反应膜的另一连接段上。作为优选技术方案，步骤3）中所述样本垫处理液的配方如下：0.99g磷酸二氢钠，5.16g磷酸氢二钠，1g牛血清白蛋白，0.9g氯化钠，0.224gCTAC，0.05g叠氮钠，溶于100mL水中。作为优选技术方案，步骤4）和步骤5）中，所述标记缓冲液的配方为：碳酸钠4.33g、碳酸氢钠2.96g，溶于1000mL水中；所述标记稀释液的配方为：柠檬酸三钠7.33g、柠檬酸4.44g、氢氧化钠1g，溶于1000mL水中。本专利技术提供的检测犬cTnI的试纸条，操作方便、快捷且灵敏度高。附图说明图1：本专利技术检测犬cTnI的干式荧光免疫层析试纸条纵向截面结构示意图；图2：本专利技术检测犬cTnI的干式荧光免疫层析试纸条俯视图；图3：犬不同cTnI浓度的检测试纸条在紫外光照射下所拍照片，从左到右依次为0ng/mL、0.05ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、20ng/mL。具体实施方式下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。如图1和图2所示，本专利技术提供的检测犬cTnI的试纸条，包括：反应膜2（硝酸纤维素膜），其两端各设有一连接段（如图所示第一连接段20、第二连接段22），两连接段中间为检测段21，检测段21表面设有检测带5，检测带5上喷涂有包被用鼠抗犬cTnI单克隆抗体；样本垫1（玻璃纤维素膜），其一端设有连接段10，样本垫的连接段10覆盖并固定于反应膜的第一连接段20上；样本垫1上喷涂有标记物8，标记物8中含有乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体，具体在一实施方式中，是在靠近连接段10附近（距连接段2mm，标记物沿反应膜长度方向的长度为5mm）喷涂标记物8，乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体。吸收垫3（吸水纸），其一端设有连接段30，吸收垫的连接段30覆盖并固定于反应膜2的第二连接段22上；底板4，反应膜2、样本垫1和吸收垫3均固定于底板上。在实际应用中，反应膜的检测段还设有质控带7，质控带7位于检测段21上靠近吸收垫3的一侧，而检测带5位于检测段21上靠近样本垫1的一侧；其中，质控带7上覆有一特异性抗体层60；乳胶荧光微球层中还含有乳胶荧光微球标记的与交联特异性抗体结合的抗原。考虑到检测灵敏性，在本专利技术的优选实施方式中，抗原为兔IgG，特异性抗体为羊抗兔IgG，样本垫中乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体与乳胶荧光微球标记的抗原的体积比为1:1~3:1。最优选地，样本垫中乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体与乳胶荧光微球标记的兔IgG的体积比为2:1。考虑到，检测时的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测犬cTnI的试纸条，其特征在于，包括：反应膜，其两端各设有一连接段，两连接段中间为检测段，所述检测段表面设有检测带，所述检测带上喷涂有包被用鼠抗犬cTnI单克隆抗体；样本垫，其一端设有连接段，所述样本垫的连接段覆盖并固定于所述硝酸纤维素膜的一连接段上，样本垫上喷涂有标记物，标记物中含有乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体；吸收垫，其一端设有连接段，所述吸收垫的连接段覆盖并固定于所述硝酸纤维素膜的另一连接段上。

【技术特征摘要】
1.一种检测犬cTnI的试纸条，其特征在于，包括：反应膜，其两端各设有一连接段，两连接段中间为检测段，所述检测段表面设有检测带，所述检测带上喷涂有包被用鼠抗犬cTnI单克隆抗体；样本垫，其一端设有连接段，所述样本垫的连接段覆盖并固定于所述硝酸纤维素膜的一连接段上，样本垫上喷涂有标记物，标记物中含有乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体；吸收垫，其一端设有连接段，所述吸收垫的连接段覆盖并固定于所述硝酸纤维素膜的另一连接段上。2.根据权利要求1所述的检测犬cTnI的试纸条，其特征在于，所述反应膜的检测段还设有质控带，所述质控带位于所述检测段上靠近所述吸收垫的一侧，而检测带位于所述检测段上靠近所述样本垫的一侧；其中，所述质控带上覆有特异性抗体；所述标记物中还含有乳胶荧光微球标记的与所述特异性抗体结合的抗原。3.根据权利要求2所述的检测犬cTnI的试纸条，其特征在于，所述抗原为兔IgG，所述特异性抗体为羊抗兔IgG。4.根据权利要求2或3所述的检测犬cTnI的试纸条，其特征在于，所述标记物中乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体与乳胶荧光微球标记的所述抗原的体积比为1:1~3:1。5.根据权利要求4所述的检测犬cTnI的试纸条，其特征在于，所述标记物中乳胶荧光微球标记的标记用鼠抗犬cTnI单克隆抗体与所述乳胶荧光微球标记的兔IgG的体积比为2:1。6.根据权利要求1所述的检测犬cTnI的试纸条，其特征在于，所述样本垫为玻璃纤维素膜，所述反应膜为硝酸纤维素膜，所述吸收垫为吸水纸。7.根据权利要求1所述的检测犬cTnI的试纸条，其特征在于，还包括底板，所述反应膜、样本垫和吸收垫均固定于所述底板上。8.权利要求2~5任一项所述的检测犬cTnI的试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1）包...

【专利技术属性】
技术研发人员：林斯，
申请(专利权)人：北京华科泰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11