微波辅助法提取杜仲叶总黄酮的工艺及其在抗氧化剂中的应用制造技术

本发明专利技术涉及杜仲提取物的研究，具体涉及一种微波辅助法提取杜仲叶总黄酮的工艺及其在抗氧化剂中的应用，本发明专利技术以杜仲叶为原料，微波辅助法提取杜仲叶中的总黄酮，总黄酮的最佳提取条件通过设置单因素实验和响应面优化来确定，并提供了总黄酮的抗氧化性的应用。

Microwave assisted extraction of total flavonoids from Eucommia leaves and its application in antioxidants

【技术实现步骤摘要】
微波辅助法提取杜仲叶总黄酮的工艺及其在抗氧化剂中的应用
本专利技术属于涉及杜仲提取物的研究，具体涉及微波辅助法提取杜仲叶总黄酮的工艺及其在抗氧化剂中的应用。
技术介绍
杜仲是名贵古老的中药材，各国学者为了探明杜仲的治病机理，确定其活性物质，对杜仲的化学成分进行了大量的研究，主要成分有木脂素类、黄酮类等有机化合物，以及钙铁锰锌硒等矿物元素。杜仲具有许多药理作用,可以有效的降低血压、增补肝肾、强化筋骨等。所以研发人员曾对杜仲进行过多种方法的提取。《制药技术》2011年第20卷第12期“杜仲总黄酮的提取工艺优化”公开了一种利用微波提取法对杜仲提取总黄酮的方法，其工艺为：称取杜仲粉末10g(过60目筛)，分别采用回流提取法(加60％乙醇200mL，水浴回流60min，过滤，提取2次，合并滤液，定容至100mL)、超声提取法(置500mL锥形瓶中，加60％乙醇200mL，室温下超声提取60min，过滤，滤液定容至100mL)、微波提取法(加60％乙醇200mL，在微波功率200W条件下加热提取120s，过滤，共提取2次，合并滤液，定容至100mL)提取。但是，该方法提取率不高，并且对提取物的成分及应用没有进行研究。
技术实现思路
本专利技术为解决现有技术中的上述问题，通过研究，专利技术了一种微波辅助法提取杜仲叶总黄酮的工艺，并且提供所得杜仲叶总黄酮在抗氧化剂中的应用。本专利技术的方案是，微波辅助法提取杜仲叶总黄酮的工艺，包括如下步骤：微波辅助法提取杜仲叶总黄酮的工艺，包括如下步骤：(1)取杜仲叶干燥、粉碎，然后过30-50目筛；(2)取步骤(1)所得的杜仲叶粉末，与乙醇混合，料液比1：10-35，乙醇浓度30％-80％，；(3)微波提取15-35min，然后冷却分离。本专利技术的另一优选方案是，所述料液比1：25-30。本专利技术的另一优选方案是，所述乙醇浓度为50％。本专利技术还提供所述微波辅助法提取杜仲叶总黄酮的工艺提取的杜仲叶总黄酮提取物的应用，其应用为将所得提取物用于抗氧化剂。更进一步地，将所得提取物用于食品抗氧化剂。本专利技术主要研究杜仲叶总黄酮的提取、含量的测定以及其抗氧化活性。用微波辅助法提取杜仲叶总黄酮，并通过单因素实验找出杜仲叶总黄酮提取条件的取值范围，来设计响应面方案，对杜仲叶中总黄酮的提取条件进行优化，探讨各提取条件对杜仲叶中总黄酮化合物提取率的影响，确定其最佳工艺条件。同时，以水溶性维生素E(Trolox)为阳性对照，研究杜仲叶总黄酮对2-2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基的清除能力，以维生素C为阳性对照研究杜仲叶总黄酮对1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH)自由基的清除能力和总抗氧化还原能力，进而评价其体外抗氧化活性，以期为杜仲叶抗氧化功能成分在食品用天然抗氧化产品的工业化生产提供理论依据。抗氧化剂多用于食品保鲜医学等方面，人工合成的抗氧化剂如BHT，TBHQ等，虽然具有较强的抗氧化能力，但经研究发现它们有一定的毒性，因而寻找安全、天然的食品抗氧化剂日益成为研究热点。本专利技术的抗氧化剂具有安全无毒的优势，能广泛应用于食品添加剂，作为抗氧化剂使用。附图说明图1是本专利技术实施例提取时间对总黄酮提取率的影响曲线图；图2是本专利技术实施例提取温度对总黄酮提取率的影响曲线图；图3是本专利技术实施例料液比对总黄酮提取率的影响曲线图；图4是本专利技术实施例溶剂浓度对总黄酮提取率的影响曲线图；图5是本专利技术实施例料液比与提取时间对总黄酮得率影响的响应曲面图；图6a是本专利技术实施例溶剂浓度与提取时间对总黄酮得率影响的响应曲面图；图6b是本专利技术实施例提取温度与溶剂浓度对总黄酮得率影响的响应曲面图；图7是不同浓度Trolox溶液对ABTS·+自由基清除率曲线图；图8是不同浓度的乙醇提取物(EE)对ABTS·+自由基清除率曲线图；图8a是不同浓度VC溶液对DPPH自由基清除能力曲线图；图9是不同浓度样品对DPPH自由基清除率曲线图；具体实施方式下面结合附图对本专利技术进行详细描述，本部分的描述仅是示范性和解释性，不应对本专利技术的保护范围有任何的限制作用。此外，本领域技术人员根据本文件的描述，可以对本文件中实施例中以及不同实施例中的特征进行相应组合。实施例为了优化杜仲叶总黄酮的提取工艺并测定其抗氧化活性，以总黄酮得率为响应值，在单因素实验基础上，采用响应面设计对杜仲叶总黄酮的提取条件进行优化，得出最优条件为提取温度为38℃，料液比1:24.8g:ml，提取时间20.34min，溶剂浓度为44％，在此条件下，杜仲叶总黄酮得率为2.21％。在最优条件下用ABTS、DPPH方法以水溶性维生素E和VC为阳性对照，测定杜仲叶提取物体外抗氧化活性，结果表明随着提取物浓度的增大，清除能力也加强，显示出较好的量效关系。.实验部分1.1实验仪器和药品1.1.1实验仪器FA2004电子天平：上海舜宇恒平科学仪器有限公司；APEX微波合成萃取系统：上海屹尧仪器有限公司；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵：巩义市中天仪器科技有限公司；101-1AB型电热鼓风干燥箱：天津市泰斯特仪器有限公司；酶标仪：SPECTRAMAX；G2-XSQTof型UPLC-Q-TOF(美国沃特世公司，包括四元梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、电喷雾四级杆串联飞行时间质谱仪和MassLynxV4.1质谱工作站)。1.1.2实验药品杜仲叶：2017年3月采自湖南张家界；芦丁标准品：上海融禾医药科技发展有限公司；硝酸铝：成都金山化学试剂有限公司：亚硝酸钠，氢氧化钠：天津市永大化学试剂有限公司；无水乙醇：天津市富宇精细化工有限公司；上述试剂皆为分析纯。乙腈，甲醇(色谱纯)均购自德国Merck公司。水为超纯水。DPPH(1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基)：东京化成工业株式会社，ABTS试剂盒：碧云天生物技术有限公司。1.2实验方法1.2.1杜仲叶总黄酮提取工艺：杜仲叶干燥粉碎后，过40目筛，选取4个因素进行单因素实验，将单因素实验得到的结果进行响应面设计，称取一定的量按照一定的料液比在适当的温度下用微波提取，提取物进行抽滤，得到提取物处理保存待测定。1.2.2总黄酮含量测定精确称取芦丁对照品20mg,加70％乙醇溶液定容于100ml容量瓶中，得0.2mg/ml标准液[13]。配制质量浓度梯度：分别为0.02、0.04、0.08、0.12、0.16、0.20mg/ml。分别移取标准溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml芦丁标准液分置于6个10ml容量瓶中,用70％乙醇定容至刻度。准确移取上述样品溶液1.44mL，70％乙醇0.64mL,5％亚硝酸钠溶液0.16ml,混匀,放置6min,再加10％硝酸铝溶液0.16ml,混匀,放置6min,加4％氢氧化钠溶液1.6ml,摇匀,静置1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.微波辅助法提取杜仲叶总黄酮的工艺，其特征是，包括如下步骤：/n(1)取杜仲叶干燥、粉碎，然后过30-50目筛；/n(2)取步骤(1)所得的杜仲叶粉末，与乙醇混合，料液比1：10-35，乙醇浓度30％-80％，；/n(3)微波提取15-35min，然后冷却分离。/n

【技术特征摘要】
1.微波辅助法提取杜仲叶总黄酮的工艺，其特征是，包括如下步骤：
(1)取杜仲叶干燥、粉碎，然后过30-50目筛；
(2)取步骤(1)所得的杜仲叶粉末，与乙醇混合，料液比1：10-35，乙醇浓度30％-80％，；
(3)微波提取15-35min，然后冷却分离。


2.根据权利要求1所述微波辅助法提取杜仲叶总黄酮的工艺，其特征是，所述料液比1...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧阳辉，
申请(专利权)人：吉首大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43