一种芽孢杆菌菌株FJAT-52631产生的脂肽及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种芽孢杆菌菌株FJAT‑52631产生的脂肽及其制备方法，属于微生物技术领域，所述的脂肽主要的有效成分为Fengycin。所述的制备方法包括菌株FJAT‑52631的活化，种子液的制备，发酵液的制备，脂肽的制备，还包括脂肽的纯化。所述的菌株为贝莱斯芽孢杆菌菌株FJAT‑52631，采用该菌株制备的脂肽对脂肪酶具有较强的抑制作用，可以有效抑制肠道中脂肪酶对脂肪的分解催化作用，达到减少脂肪吸收、控制和治疗肥胖的目的，具有广阔的应用前景。

Lipopeptide produced by a Bacillus strain fjat-52631 and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种芽孢杆菌菌株FJAT-52631产生的脂肽及其制备方法
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种贝莱斯芽孢杆菌菌株FJAT-52631产生的脂肽，以及脂肽的制备和纯化方法。
技术介绍
人们在与因热量摄入高于能量消耗而引起的肥胖的斗争中，关键性策略是控制能量平衡，即防止能量的长期积累对身体的损伤。通过提高每日平均代谢率和增加能量消耗，体育活动可能有助于预防肥胖。然而，临床数据显示，这种方法无法长期的控制并达到治疗肥胖的作用，阻止体重恢复的药物成为了治疗肥胖所必需的重要课题。减少多余膳食脂肪的吸收，成为治疗肥胖关键突破口，作为与膳食脂肪消化相关的酶，如十二指肠前脂肪酶(舌、胃脂肪酶)、胰腺脂肪酶(PL)、胆固醇-酯脂肪酶和盐刺激脂肪酶的成为治疗肥胖药物研究的关注对象。其中，胰腺脂肪酶是消化膳食甘油三酯的关键酶。目前欧洲唯一一种通过批准的抗肥胖药物奥利司他(Orlista)，就是利用该药物能够抑制PL活性，从而配合合理膳食达到减少脂肪吸收、控制和治疗肥胖的目的。但是长期服用奥利司他的患者会发生腹泻、胀气等副作用反应。因而，寻求低毒、高效的脂肪酶抑制剂成为了人们关注的课题。目前，已筛选的胰腺脂肪酶抑制剂主要来源于微生物和植物。从微生物代谢物中分离的脂肪酶抑制剂包括：链霉菌属代谢的Lipstatin(奥利司他)、Panclicins、Valilactone、Ebelactones和Esterastin；杉叶蕨藻产生的Caulerpenyne；真菌产生的Vibralactone和Percyquinin。从植物中提取的脂肪酶抑制剂包括：茶叶、大豆、人参、山茱萸、花生、苹果、葡萄藤、葡萄籽等植物中提取的多酚类、黄酮类、皂苷类、萜类、以及生物碱类等。芽胞杆菌脂肽是一类由氨基酸肽环和脂肪酸链构成的两性分子，具有强生物活性功能、不易产生耐药性、无毒副作用等优点，其具有抗菌、表面活性、抗癌等生物活性。有文献报道在小鼠高脂饮食中加入芽胞杆菌脂肽，能够抑制脂质消化，实现抗肥胖功效。不同芽胞杆菌菌株产生的脂肽组成不同，导致活性存在差异。因而筛选出高效抑制脂肪酶活性的脂肽，将其开发为脂肪酶抑制剂，从而抑制肠道中脂肪酶对脂肪的分解催化作用，达到减少脂肪吸收、控制和治疗肥胖的目的，其在预防肥胖方面具有较好的临床应用前景。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种低毒、高效的，由微生物代谢产生的能够抑制胰腺脂肪酶活性的脂肽。本专利技术是通过以下技术方案解决上述技术问题的：本实验室从福建省武夷山黄岗山土壤中分离并筛选得到具有很好生物防治作用的菌株FJAT-52631，并将对该菌株的理化特性进行测定分析，最终鉴定其为贝莱斯芽孢杆菌的一个菌株。所述的菌株FJAT-52631为贝莱斯芽孢杆菌菌株FJAT-52631(BacillusvelezensisFJAT-52631)，于2019年9月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山，保藏编号为CCTCCM2019760。所述的贝莱斯芽孢杆菌产生的脂肽，其特征在于：所述的脂肽包括Fengycin或Surfactin中的一种或两种。进一步的，所述的脂肽包括C14-C16iturinA、C12-C16surfactinA、C16surfactinA衍生物、C16/C18fengycinA、C16fengycinA2/B2、C16–C17fengycinB或C15fengycinA/B衍生物其中的一种以上。所述的贝莱斯芽孢杆菌产生的脂肽的制备方法具体包括以下步骤：菌株FJAT-52631的活化：用接种环将菌株FJAT-52631划线于NA培养基上，并于恒温培养箱中培养36-60h，培养温度25-35℃；种子液的制备：将上一步获得的单菌落接种于马铃薯葡萄糖营养肉汤培养基中，并将其置于恒温摇床振荡培养，温度25-35℃，培养24-48h后即得种子液；发酵液的制备：将上一步获得的种子液接种到已灭菌的马铃薯葡萄糖营养肉汤培养基中，接种量1-2％，边搅拌边培养，温度25-35℃；在发酵培养36-60h后，测得菌体浓度值为4.0-6.0×108CFU/mL时，则获得所需的发酵液；脂肽的制备：将上一步得到的发酵液离心，离心后弃去菌体得上清液，在上清液中加入1.5-2.5mol/L盐酸至pH<2，2-8℃静置24-48h后，离心得到沉淀；利用低温真空冷冻干燥将沉淀进行干燥后，得脂肽粉末。所述步骤的NA培养基的组分为：牛肉浸膏0.3％，蛋白胨0.5％，葡萄糖1％，琼脂1.8％，以水配制，pH7.0-7.2；所述的马铃薯葡萄糖营养肉汤培养基的组分为：马铃薯浸粉0.5％、蛋白胨1％、氯化钠0.5％、葡萄糖1.5％，以水配制，pH7.0-7.2；各培养基组分中的百分比均为重量比。进一步的，所述的脂肽的纯化方法为将脂肽粉末溶于水中，过滤后，上样于活化的C18固相萃取柱中，加入70％-90％甲醇淋洗，将淋洗液旋转蒸干即可，纯化得到的脂肽主要为Fengycin。进一步的，所述的脂肽在抑制脂肪酶活性中的应用。本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术的贝莱斯芽孢杆菌菌株产生的脂肽能够有效抑制脂肪酶活性，且与文献报道的减肥药奥林司他相当。(2)本专利技术纯化后得到的脂肽为Fengycin，纯度可达95％左右。(3)本专利技术的脂肽能够作为脂肪酶抑制剂，减少多余膳食脂肪的吸收，在预防肥胖方面具有较好的临床应用前景。附图说明图1为具体实施方式所述的菌株FJAT-46737的基因组圈图。图2为具体实施方式所述的脂肽混合物对米黑毛霉脂肪酶的活力影响。图3为具体实施方式所述的不同浓度脂肽下的酶活力和酶量的关系。图4为具体实施方式所述的脂肽混合物对脂肪酶抑制类型，图中线1-5所对应的浓度分别为：0.005，0.0045，0.004，0.0025，0mg/mL。图5为具体实施方式所述的米黑毛霉脂肪酶催化p-NPC16反应紫外-可见吸收光谱。图中(a)图为p-NPC16和米黑毛霉脂肪酶的峰位和峰形；(b)图为脂肽、p-NPC16和米黑毛霉脂肪酶的峰位和峰形，图中1-10代表10分钟内酶的变化；(c)图为脂肽对米黑毛霉脂肪酶内源荧光发射光谱的影响，图中1-7所对应的浓度分别是0,0.194,0.265,0.324,0.375,0.419和0.457mg/mL。图6为具体实施方式所述的80％甲醇洗脱物总离子流图。图7为具体实施方式所述的Fengycin脂肽对米黑毛霉脂肪酶的活力影响。图8为具体实施方式所述的不同浓度Fengycin脂肽下的酶活力和酶量的关系。图9为具体实施方式所述的Fengycin脂肽对脂肪酶抑制类型，线1-5对应浓度为：0.003，0.0025，0.002，0.0013，0mg/mL。图10为具体实施方式所述的脂肽Iturin对米黑毛霉脂肪酶的活力影响。图11为具体实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种芽孢杆菌菌株FJAT-52631产生的脂肽，其特征在于：所述的脂肽包括Fengycin或Surfactin中的一种或两种。/n

【技术特征摘要】
1.一种芽孢杆菌菌株FJAT-52631产生的脂肽，其特征在于：所述的脂肽包括Fengycin或Surfactin中的一种或两种。


2.根据权利要求1所述的芽孢杆菌菌株FJAT-52631产生的脂肽，其特征在于：所述的脂肽包括C14-C16iturinA、C12-C16surfactinA、C16surfactinA衍生物、C16/C18fengycinA、C16fengycinA2/B2、C16–C17fengycinB或C15fengycinA/B衍生物其中的一种以上。


3.一种如权利要求1所述的芽孢杆菌菌株FJAT-52631产生的脂肽的制备方法，其特征在于：所述的制备方法具体包括以下步骤：
菌株FJAT-52631的活化：用接种环将菌株FJAT-52631划线于NA培养基上，恒温培养36-60h，培养温度25-35℃；
种子液的制备：将上一步获得的单菌落接种于马铃薯葡萄糖营养肉汤培养基中，25-35℃恒温振荡培养24-48h后即得种子液；
发酵液的制备：将上一步获得的种子液接种到已灭菌的马铃薯葡萄糖营养肉汤培养基中，接种量1-2％，边搅拌边培养，温度25-35℃；在发酵培养3...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈梅春，朱育菁，刘波，王阶平，陈燕萍，肖荣凤，
申请(专利权)人：福建省农业科学院农业生物资源研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35