一种基于点击反应阻断免疫检查点的多肽组合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种基于点击反应阻断免疫检查点的多肽组合物及其制备方法和应用。所述多肽组合包括靶向单元和组装单元；所述靶向单元包括靶向片段和含炔基的疏水分子，所述靶向片段与含炔基的疏水分子通过酰胺键连接；所述组装单元为叠氮化的组装片段，所述组装片段为具有自组装能力的多肽序列。本发明专利技术提供的多肽组合物的靶向单元，可深入到深层肿瘤组织，精准定位癌细胞，多肽组合物的组装单元可以与靶向单元发生高效点击反应而偶联，同时组装单元在肿瘤组织原位自组装构筑多肽纳米纤维，实现免疫检查点的长效阻断，减少免疫逃逸，达到长效的免疫治疗效果。

A peptide composition based on click response blocking immunocheckpoint and its preparation method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种基于点击反应阻断免疫检查点的多肽组合物及其制备方法和应用
本专利技术属于医药
，具体涉及一种基于点击反应阻断免疫检查点的多肽组合物及其制备方法和应用。
技术介绍
免疫系统具有识别、清除体内恶变细胞，抵御肿瘤发生发展的免疫监视功能。但是肿瘤细胞可通过多种机制，例如抗原表达受损、在肿瘤微环境中分泌免疫抑制因子、下调自然杀伤细胞(Naturalkillercell,NK)活性、调节免疫检查点(Immunecheckpoints)通路抑制T细胞活性等逃避机体免疫监视。免疫治疗是继手术、放疗、化疗和分子靶向药物又一能够延长肺癌患者生存的方法。传统意义上的免疫治疗主要通过诱导产生或强化抗肿瘤免疫反应进行治疗，但由于免疫检查点等抑制性免疫调节作用的存在，往往不能产生持久有效的抗肿瘤免疫效应。免疫检查点在维持自我耐受以及调节T细胞方面起着至关重要的作用。免疫检查点阻断(ImmuneCheckpointBlockadeTherapy,ICB)是通过分子抑制剂抑制受体表达，触发免疫抑制信号通路，该方式可消除患者的部分肿瘤，改善生存期。目前，免疫检查点阻断方法在治疗各种类型的肿瘤(包括乳腺癌，非小细胞肺癌，黑色素瘤等)中已取得了显著成功。抗程序性死亡蛋白1(Programmeddeath1,PD-1)抗体是目前研究最多，临床发展最快的一种免疫疗法。PD-1起作用在免疫反应的效应阶段，其表达于活化的T细胞，B细胞及髓系细胞，其有两个配体，即程序性死亡分子配体-1(Programmeddeathligand1,PD-L1)和PD-L2。在肿瘤细胞中过表达的PD-L1是一种重要的免疫抑制分子，PD-1与PD-L1的结合介导T细胞活化的共抑制信号，抑制T细胞的杀伤功能，对人体免疫应答起到负调节作用。华裔科学家陈列平实验室首先发现PD-L1在肿瘤组织高表达，而且调节肿瘤浸润CD8+T细胞的功能。阻断PD-1/PD-L1之间的相互作用可避免免疫逃逸地发生，使T细胞攻击肿瘤，从而导致肿瘤细胞死亡。因此，以PD-1/PD-L1为靶点的免疫调节对抗肿瘤有重要的意义。CN109985238A公开了一种基于免疫检查点阻断的抗肿瘤药物组合物及其应用，并阐明其在肿瘤治疗过程中的生物学机制。所述基于免疫检查点阻断的抗肿瘤药物组合物包含免疫检查点抑制剂和巨噬细胞反应阻断物。其中PD-L1抑制剂为Atezolizumab、Durvalumab或Avelumab，该药物组合物抗癌效果良好；由于免疫检查点抑制剂和巨噬细胞反应阻断物分别清除了两个不同的促肿瘤因素，两者联合用药产生了协同作用，可更有效抑制肿瘤生长。目前应用于临床的免疫检查点抑制剂还包括纳武单抗、派姆单抗、匹利珠单抗、伊匹单抗和曲美莫单抗等，这些单克隆抗体能够有效阻断PD-1/PD-L1、CTLA-4等免疫检查点的抑制性免疫调节作用，从而间接强化抗肿瘤免疫反应。然而以上免疫检查点抑制剂存在分子量较大、肿瘤渗透性差、PD-L1占有率低以及抑制时间短等问题，使其难以实现有效地肿瘤治疗。因此，如何实现提高药物的肿瘤渗透性、实现深层穿透，同时长效阻断免疫检查点是免疫治疗中亟待解决的问题。
技术实现思路
鉴于现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种基于点击反应(ClickReaction)阻断免疫检查点的多肽组合物及其制备方法和应用。本专利技术提供的多肽组合物，以通过点击反应在癌细胞膜上构建自组装纳米纤维，不仅增强了其渗透性，而且延长了免疫检查点的阻断时间，实现高性能的免疫治疗效果。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：第一方面，本专利技术提供一种基于点击反应阻断免疫检查点的多肽组合物，所述多肽组合包括靶向单元和组装单元；所述靶向单元包括靶向片段和含炔基的疏水分子，所述靶向片段与含炔基的疏水分子通过酰胺键连接；所述组装单元为叠氮化的组装片段，所述组装片段为具有自组装能力的多肽序列。本专利技术提供的多肽组合物包括靶向单元和组装单元，靶向单元具有靶向免疫检查点的功能，组装单元具有组装功能，而且靶向单元中含炔基的疏水分子可以与组装单元上的叠氮基团发生高效点击反应。靶向单元和组装单元在使用时间隔给药，靶向单元特异性识别肿瘤细胞并结合到免疫检查点上，随后组装单元与靶向单元通过点击反应进行偶联，同时组装单元在原位自组装形成纳米纤维。最终，原位形成的纳米纤维可更好地阻断免疫检查点，避免免疫逃逸的发生，达到长效的免疫治疗效果。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述靶向单元的受体为免疫检查点。优选地，所述免疫检查点为细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CytotoxicTLymphocyteantigen4,CTLA-4)、程序性死亡受体1(Programmeddeath-1,PD-1)、程序性死亡因子配体-1(programmeddeath-1Ligand,PD-L1)、淋巴细胞活化基因-3(Lymphocyteactivationgene-3,LAG-3)或淋巴细胞免疫球蛋白-3(Tcellimmunoglobulin-3,TIM-3)中任意一种，优选为PD-L1。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述靶向片段为多肽序列SCFPNWSLRPMNQM。优选地，所述多肽序列SCFPNWSLRPMNQM对应的靶向受体为PD-L1。优选地，所述组装片段包括多肽序列KLVFFAE、KLVFF、FF或YFF中的任意一种。优选地，所述组装片段为多肽序列MDEKAQKGPAKLVFFACEKG。优选地，所述组装单元为MDEKAQKGPAKLVFFACEK(N3)G。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述含炔基的疏水分子包括含氮杂环。优选地，所述含氮杂环为本专利技术中，含炔基的疏水分子为通过加成反应连接在与起始端丝氨酸相邻的半胱氨酸上。优选地，所述多肽组合物的给药方式为静脉给药、皮下给药或腹腔给药中的任意一种或至少两种的组合，优选为静脉给药。优选地，所述给药浓度小于100μM，优选为10-50μM，例如可以是10μM、15μM、20μM、25μM、30μM、35μM、40μM或50μM等。优选地，所述给药顺序为先进行靶向片段给药，再进行组装片段给药。优选地，所述靶向片段和组装片段的给药时间间隔为10-30min，例如可以是10min、15min、18min、20min、22min、25min、28min或30min等，优选为20-25min。若靶向片段和组装片段的给药时间间隔过短，在靶向片段靶向至肿瘤细胞之前，两者可能在会血液中发生组装，不在肿瘤处发生组装，从而无法阻断免疫检查点，影响治疗效果。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述靶向单元具有如式I所示的结构：优选地，所述组装单元具有如式II所示的结构：第二方面，本专利技术提供一种如第一方面所述的多肽组合物的制备方法，所述制备方法为：以氨基酸为原料通过多肽固相合成法合成靶向片段，再连接含炔基的疏水分子得到靶向单元本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于点击反应阻断免疫检查点的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合包括靶向单元和组装单元；/n所述靶向单元包括靶向片段和含炔基的疏水分子，所述靶向片段与含炔基的疏水分子通过酰胺键连接；/n所述组装单元为叠氮化的组装片段，所述组装片段为具有自组装能力的多肽序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于点击反应阻断免疫检查点的多肽组合物，其特征在于，所述多肽组合包括靶向单元和组装单元；
所述靶向单元包括靶向片段和含炔基的疏水分子，所述靶向片段与含炔基的疏水分子通过酰胺键连接；
所述组装单元为叠氮化的组装片段，所述组装片段为具有自组装能力的多肽序列。


2.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述靶向单元的受体为免疫检查点；
优选地，所述免疫检查点为CTLA-4、PD-1、PD-L1、LAG-3或TIM-3中任意一种，优选为PD-L1。


3.根据权利要求1或2所述的多肽组合物，其特征在于，所述靶向单元为多肽序列SCFPNWSLRPMNQM；
优选地，所述多肽序列SCFPNWSLRPMNQM对应的靶向受体为PD-L1。


4.根据权利要求1-3任一项所述的多肽组合物，其特征在于，所述组装片段包括多肽序列KLVFFAE、KLVFF、FF或YFF中的任意一种；
优选地，所述组装片段为多肽序列MDEKAQKGPAKLVFFACEKG；
优选地，所述组装单元为MDEKAQKGPAKLVFFACEK(N3)G。


5.根据权利要求1-4任一项所述的多肽组合物，其特征在于，所述含炔基的疏水分子包括含氮杂环；
优选地，所述含氮杂环为

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【专利技术属性】
技术研发人员：王浩，肖五一，王羿，安红维，侯大勇，
申请(专利权)人：国家纳米科学中心，
类型：发明
国别省市：北京;11