本发明专利技术公开了单纯疱疹病毒相关抗原短肽及其应用。所述单纯疱疹病毒相关抗原短肽序列如SEQ ID NO:1‑16任一所示。该短肽具有与DC细胞上MHC I类和MHC II分子高度的亲和力，并能有效地使其起到抗原提呈作用，具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力。将该短肽中的至少一条体外致敏树突状细胞，制备的DC疫苗能够预防单纯疱疹病毒相关疾病，具有良好的临床转化前景。而且，本发明专利技术的抗原短肽长度较短，化学合成难度小，可以直接合成得到高纯的产物，应用成本大大降低，同时效果明确，具有很好的应用前景。
Herpes simplex virus associated antigen short peptide and its application
【技术实现步骤摘要】
单纯疱疹病毒相关抗原短肽及其应用
本专利技术属于生物医药
更具体地，涉及单纯疱疹病毒相关抗原短肽及其应用。
技术介绍
人单纯疱疹病毒(humansimplexvirus，HSV)。HSV具有较宽的宿主范围，在人群中分布广泛，感染率高，能在人体内多种细胞中增殖，HSV基因组约150KB，至少可以编码70多种蛋白，其至少含有11中胞壳糖蛋白，在病毒复制和致病中发挥着至关重要的作用。HSV感染典型特征为皮肤损伤水泡，其还可以在神经细胞内潜伏感染。目前已证实，HSV可以引起多种慢性疾病的发生，HSV-2型是高血压的高危因素，高血压病人HSV感染率较高；其还可以促进平滑肌细胞脂肪沉积；阿尔默茨海莫病患者可能与HSV感染有关，其可能与淀粉样蛋白和tau蛋白学说有关；帕金森病人中HSV-1基因阳性率更高，另外HSV与多种肿瘤相关，肿瘤患者血清检测HSV感染率更高。目前对HSV感染尚缺乏疗效肯定的抗病毒药物。目前预防其感染主要还是以避免接触活动期HSV感染为主，如抗病毒药阿昔洛韦和更昔洛韦等，但是均不能清除潜伏感染状态的病毒或防止潜伏感染。虽说HSV抗体并不能有效阻止潜伏病毒的激活，但可使病情减轻。HSV目前尚无有效疫苗。免疫学表明，树突状细胞(dendriticcell，DC)是目前所知的，功能最强的抗原提呈细胞，被认为是机体免疫反应的始动者，在免疫应答中处在中心位置。成熟的DC表达丰富的、与抗原提呈相关的MHCI类和MHCII类分子，其可以摄取、加工处理并提呈抗原；参与免疫记忆的维持；分泌细胞因子调节免疫应答。而能与MHCI类和MHCII类分子结合的单纯疱疹病毒抗原多肽尤为关键。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有单纯疱疹病毒疫苗的不足，提供能与MHCI类和MHCII类分子结合的单纯疱疹病毒抗原多肽，提供基于DC技术的HSV疫苗，可应用于采用DC技术防治HSV相关慢性疾病，联合干细胞因子/vitrogen增加成熟DC细胞活性，同时通过多种HSV特异性抗原肽，促进DC细胞活化，达到预防单纯疱疹病毒感染和治疗的目的，具有很好的应用前景。本专利技术的目的是提供HSV抗原相关短肽。本专利技术另一目的是提供所述HSV抗原相关短肽在制备HSV抗原多肽DC疫苗方面的应用。本专利技术再一目的是提供一种HSV抗原多肽DC疫苗。本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：提供HSV相关抗原短肽，其序列如SEQIDNO:1-16任一所示。提供所述HSV相关抗原短肽在制备单纯疱疹病毒抗原多肽DC疫苗方面的应用。提供所述HSV相关抗原短肽在制备HSV相关疾病的防治药物中的应用。另外还提供一种单纯疱疹病毒相关慢病防治的DC疫苗，由上述单纯疱疹病毒相关抗原短肽和树突状细胞加载得到。具体地，是由SEQIDNO:1-16中至少一条所示短肽联合体外致敏树突状细胞，从而获得的自体树突状细胞制剂。SEQIDNO:1-SEQIDNO:16所述的单纯疱疹病毒相关抗原短肽能够诱导DC起到抗原提呈作用。具体地，疫苗为静脉回输型疫苗。在所述单纯疱疹病毒相关慢病防治的DC疫苗的制备方法中，选用干细胞因子或vitrogen因子作为佐剂增加DC细胞活性，特异性的抗原肽体外致敏树突状细胞，获得自体树突状细胞制剂，作为静脉回输型单纯疱疹病毒相关慢病防治疫苗。具体制备方法为：以成熟促进因子，同时以干细胞因子或Vitrogan因子作为佐剂，促进DC细胞成熟；然后向诱导成熟的DC细胞培养体系中加入权利要求1所述短肽，收集负载有短肽片段的DC细胞，用生理盐水洗涤后，用生理盐水重悬即得到DC疫苗。更具体地，作为一种可选择的方案，所述单纯疱疹病毒相关慢病防治的DC疫苗的制备步骤如下：S1.DC细胞的提取与诱导：S11.获取未成熟DC细胞采集健康捐献者的外周血，通过淋巴细胞分离液分离出单个核细胞，培养基中，37℃、5％CO2条件下常规培养3小时后，贴壁细胞为未成熟DC细胞；S12.未成熟DC细胞的扩增培养37℃、5％CO2条件下培养5天，期间隔天换液，完成未成熟DC细胞(imDC细胞)的扩增培养；S13.DC细胞的诱导加入成熟促进因子，同时以干细胞因子或Vitrogan因子作为佐剂，促进DC细胞成熟；S2.多肽的负载：诱导DC细胞成熟5天后，向培养体系中加入权利要求1所述短肽；S3.制备DC疫苗：离心收集负载有短肽片段的DC细胞，用生理盐水洗涤细胞3次，最后将负载有短肽片段的DC细胞用生理盐水重悬，即得到DC疫苗。另外所述DC疫苗在制备单纯疱疹病毒相关慢性疾病的防治药物中的应用也应在本专利技术的保护范围之内。本专利技术结合生物信息学技术预测HSV自身可以做为抗原的序列簇，并经过大量研究摸索，得到的16条单纯疱疹病毒抗原肽具有与DC细胞上MHCI类和MHCII分子高度的亲和力，并能有效地使其起到抗原提呈作用，具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力，并且提示其具有良好的临床转化及疾病防治前景。本专利技术选用特异性的表位多肽，体外致敏自体DC细胞，制备DC细胞制剂，对患者进行静脉回输，重建机体全身免疫平衡，启动免疫系统，对感染微生物的特异性预防。本专利技术采用的DC技术，用多种特异性抗原肽联合激活树突细胞，这些抗原肽具有极强的特异性，诱导具有更高活性的树突状细胞携带多种抗原信息，回输进入人体后可刺激机体免疫，可以达到诱导人体产生针对单纯疱疹病毒产生特异性抗体，及针对单纯疱疹病毒特异性的CTL细胞，从而可以有效防治单纯疱疹病毒相关慢性疾病的发生发展。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了序列如SEQIDNO:1-16所示的单纯疱疹病毒抗原多肽，这些抗原肽具有与DC细胞上MHCI类和MHCII分子高度的亲和力，并能有效地使其起到抗原提呈作用，具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力。而且本专利技术的短肽长度较短，化学合成难度小，可以直接合成得到高纯的产物，应用成本大大降低，具备良好的多肽疫苗及DC疫苗的潜力，能够预防单纯疱疹病毒相关疾病，尤其是相关慢性疾病，具有良好的临床转化及实际应用前景。基于本专利技术单纯疱疹病毒抗原肽制备DC疫苗用于单纯疱疹病毒防治的技术具有诸多优势：(1)DC体外激活后，干细胞因子/Vitrogen因子可以增加DC细胞活性，增加识别抗原提成能力，回输体内后促进产生免疫应答。(2)长期免疫记忆：由于使用特异抗原肽与具有记忆功能的免疫细胞充分接触，回输体内后，使免疫细胞具有了精确长久的免疫记忆，加强了免疫防治效果，为防止再感染或预防提供了长期保护。(3)DC回输后体内后，可以重建机体免疫，从而达到防治体内感染病毒的目的。附图说明图1为DC疫苗治疗组和多肽-DC疫苗对照组对靶细胞的杀伤活性的对比。图2为体外DC致敏T细胞，CCK-8法检测空白对照组、DC疫苗组、多肽疫苗组、多肽-DC疫苗组T细胞活性变化。图3为小鼠免疫6周后，ELISA检测空白对本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.单纯疱疹病毒相关抗原短肽，其特征在于，其序列如SEQ ID NO:1-16任一所示。/n
【技术特征摘要】
1.单纯疱疹病毒相关抗原短肽，其特征在于，其序列如SEQIDNO:1-16任一所示。
2.权利要求1所述短肽在制备防治单纯疱疹病毒相关慢病的DC疫苗方面的应用。
3.权利要求1所述短肽在制备防治单纯疱疹病毒相关慢性疾病的药物中的应用。
4.一种单纯疱疹病毒抗原多肽DC疫苗，其特征在于，由权利要求1所述短肽和树突状细胞加载得到。
5.根据权利要求4所述DC疫苗，其特征在于，是由SEQIDNO:1-16中至少一条所示短肽联合体外致敏树突状细胞获得的自体树突状细胞制剂。
6.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄燕花，赵乙木，罗夫·辛克纳吉，孙晨，
申请(专利权)人：维塔恩广州医药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。