本发明专利技术公开了一种具有降血糖功能的小豆肽组合物及其制备方法和应用，小豆肽组合物包括：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的多肽。本发明专利技术得到的小豆肽组合物与挤压小豆蛋白相比，达到小豆蛋白的同等甚至略优的α糖苷酶抑制率的用量仅为挤压蛋白的十分之一，具有优异的降血糖功能，而且该组合物的结构清晰，分子量大小明确，对进一步研究红小豆的降糖原理起到进一步推动作用。
Soybean peptide composition with hypoglycemic function and its preparation method and Application
【技术实现步骤摘要】
具有降血糖功能的小豆肽组合物及其制备方法和应用
本专利技术涉及蛋白质有效成分的确定制备领域。更具体地说，本专利技术涉及一种具有降血糖功能的小豆肽组合物及其制备方法和应用。
技术介绍
红小豆具有降血糖的功效；植物学家通过对红小豆的降糖原理进行分析研究，发现红小豆是通过对糖苷酶进行抑制，使得血糖得到下降的，为了提高降血糖的效果，前人对红小豆采用了多种提取手段，以期望能找到红小豆中主要起到降血糖作用的有效成分，以便于提高降血糖的效果；CN103565904A公开了一种小豆在制备降血糖药物或降血糖食品中的应用，充分说明了小豆的降血糖效果；CN103743869B公开了一种提高红小豆降血糖效果的物质的确定方法，其主要是确定了红小豆中起到降糖作用的重要的关键性生物活性物质，得到挤压小豆蛋白和多糖；上述现有技术中对红小豆具体起到降糖活性的物质的研究还不够深入，并没有获得具有该降糖生物活性物质的具体结构或者序列表，特别是小豆蛋白。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供一种具有降血糖功能的小豆肽及其制备方法和应用，其得到的小豆肽组合物结构明了，提取步骤简单，条件宽松，得到的小豆肽相比挤压小豆蛋白在等量使用条件下，具有等同甚至更好的降血糖效果。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了一种具有降血糖功能的小豆肽组合物，或其药学上可接受的盐，所述小豆肽组合物包括SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示氨基酸序列的多肽，所述小豆肽组合物的相对分子质量为10560。一种具有降血糖功能的小豆肽的制备方法：将挤压小豆蛋白粉进行进一步处理得到，具体纯化步骤为：S1、取挤压小豆蛋白粉，将挤压小豆蛋白粉溶于平衡液中，转速12000r离心15-25min，取上清液；S2、将S1得到的上清液用脱盐柱除盐，具体顺序为：先用2倍柱体积的平衡液冲柱子至基线平衡，上样，用洗脱液洗脱；其中，洗脱液的盐梯度为0-1MNaCl，至基线完全平衡为止，上样进行洗脱，洗脱流速均为4mL/min，采用波长280nm的紫外波进行监测，取含量最大的峰的洗脱液透析合并，将合并后的洗脱液冻干，得到除盐后的混合物；S3、利用HitrapSP-FF预装柱，设置流速为1mL/min，S2得到的除盐后的混合物为原始样品，上样；具体过程为：预装柱先经平衡液洗脱4CV，上样后再经过平衡液平衡5CV,最后洗脱液洗脱，梯度为0-1MNaCl，洗脱体积为2CV，采用280nm紫外波长在线检测洗脱峰，合并主峰，经过流水透析3天；在环境为4℃的条件下，放置12h，再冻干备用，得到纯化后的样品；纯化后的样品分为流穿部分和收集部分，流穿部分是电导未出峰之前280nm蛋白收集峰，收集部分是电导出峰后收集得到的280nm蛋白收集峰；S4、将S3中的收集部分经高效液相色谱检测，采用制备色谱进行分离，收集出峰时间第10.5分钟开始出峰的单峰样品。优选的是，所述平衡液为20mMHAC-NaAC，pH为4.5。优选的是，所述洗脱液为20mMHAC-NaAC，pH为4.5，1MNaCl。优选的是，所述S2中的脱盐柱使用后采用0.5MNaOH的再生液清洗，清洗完后用20％乙醇保存柱子。优选的是，所述挤压小豆蛋白粉的制备方法为：挤压小豆粉加去离子水恒温水浴浸泡过夜，用1M氢氧化钠调pH到8.0-10.0，室温下搅拌25-35min，3000r/min离心5-15min，分别得到第一次上清液和沉渣，向沉渣中加5倍去离子水，再用1M氢氧化钠调pH到8.0-10.0，搅拌离心，得到第二次上清液，合并第一次上清液和第二次上清液得总上清液，用1NHCl调总上清液的pH值至4-5，离心，收集沉淀用蒸馏水洗涤沉淀至中性，真空冻干，得到挤压小豆蛋白粉。优选的是，所述挤压小豆粉的具体制备方法为:取红小豆，粉碎、过筛，得小豆粉；在小豆粉中添加水，搅拌均匀；取搅拌后的小豆粉，进行两次挤压膨化，膨化后的小豆粉粉碎、过筛得到。优选的是，第一次挤压膨化的温度范围为140-160℃、第二次挤压膨化温度范围为120-140℃。优选的是，一种具有降血糖功能的小豆肽的应用，制备成药学上可接受的用于降血糖的赋形剂。本专利技术至少包括以下有益效果：第一、通过对挤压小豆蛋白进行进一步处理，得到了挤压小豆蛋白具有降血糖活性的主要的多肽氨基酸序列组，并确定了提取条件，进一步提高了红小豆降血糖的利用率；第二、通过检测小豆肽和挤压小豆蛋白的α-糖苷酶抑制率，可以得出提取到的小豆肽具有挤压小豆蛋白相当甚至更优的降血糖活性。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。<实施例1>一种具有降血糖功能的小豆肽的制备方法：步骤一、挤压小豆粉的制备：取红小豆，粉碎、过60目筛，得小豆粉；在小豆粉中添加水，搅拌均匀；取搅拌后的小豆粉，进行挤压膨化，初次挤压膨化的温度范围为140-160℃、二次挤压膨化温度范围为120-140℃，将二次挤压膨化后的小豆粉粉碎、过筛得到。步骤二、挤压小豆蛋白粉的提取：将挤压小豆粉加去离子水中，30℃恒温水浴浸泡过夜，用1M氢氧化钠溶液调节pH值，使pH值为9.0，室温下搅拌30min，3000r/min离心10min，收集上清液，沉渣加5倍去离子水再调pH＝9.0，搅拌离心，合并两次离心所得上清液，用1NHCl调上清液pH＝4.5，离心，收集沉淀用蒸馏水洗涤沉淀至pH＝7.0，真空冷冻干燥以保证蛋白活性，冻干得到挤压小豆蛋白粉。步骤三、小豆肽的提取：S1、取挤压小豆蛋白粉，将挤压小豆蛋白粉溶于平衡液中，转速12000r离心20min，取上清液；S2、将上清液用脱盐柱除盐，具体顺序为：先用2倍柱体积的平衡液冲柱子至基线平衡，上样，用洗脱液洗脱，盐梯度为0-1MNaCl至基线完全平衡为止，上样进行洗脱，洗脱的流速均为4mL/min，以10mL/管接收洗脱液，采用波长280nm的紫外波进行监测，取含量最大的峰的洗脱液透析合并，将合并后的洗脱液冻干；S3、利用HitrapSP-FF预装柱，设置流速为1mL/min，S2得到的除盐后的混合物为原始样品，上样；具体过程为：预装柱先经平衡液洗脱4CV，上样后再经过平衡液平衡5CV,最后洗脱液洗脱，梯度为0-1MNaCl，洗脱体积为2CV，每25mL/tube收集洗脱液，采用280nm紫外波长在线检测洗脱峰，合并主峰，经过流水透析3天；在环境为4℃的条件下，放置12h，再冻干备用，得到纯化后的样品；纯化后的样品分为流穿部分和收集部分，流穿本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.具有降血糖功能的小豆肽组合物，或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述小豆肽组合物包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的多肽。/n
【技术特征摘要】
1.具有降血糖功能的小豆肽组合物，或其药学上可接受的盐，其特征在于，所述小豆肽组合物包括SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示氨基酸序列的多肽。
2.如权利要求1所述的具有降血糖功能的小豆肽组合物的制备方法，其特征在于，将挤压小豆蛋白粉进行进一步处理得到，具体纯化步骤为：
S1、取挤压小豆蛋白粉，将挤压小豆蛋白粉溶于平衡液中，转速12000r离心15-25min，取上清液；
S2、将S1得到的上清液用脱盐柱除盐，具体顺序为：先用2倍柱体积的平衡液冲柱子至基线平衡，上样，用洗脱液洗脱；其中，洗脱液的盐梯度为0-1MNaCl，至基线完全平衡为止，上样进行洗脱，洗脱流速均为4mL/min，采用波长280nm的紫外波进行监测，取含量最大的峰的洗脱液透析合并，将合并后的洗脱液冻干，得到除盐后的混合物；
S3、利用HitrapSP-FF预装柱，设置流速为1mL/min，S2得到的除盐后的混合物为原始样品，上样；具体过程为：预装柱先经平衡液洗脱4CV，上样后再经过平衡液平衡5CV,最后洗脱液洗脱，梯度为0-1MNaCl，洗脱体积为2CV，采用280nm紫外波长在线检测洗脱峰，合并主峰，经过流水透析3天；在环境为4℃的条件下，放置12h，再冻干备用，得到纯化后的样品；
纯化后的样品分为流穿部分和收集部分，流穿部分是电导未出峰之前280nm蛋白收集峰，收集部分是电导出峰后收集得到的280nm蛋白收集峰；
S4、将S3中的收集部分经高效液相色谱检测，制备色谱进行分离，收集出峰时间第10.5分钟开始出峰的单峰样品。
3.如权利要求2所述的具有降血糖功能的小豆肽组合物的制备方法，其特征在于，所述平衡液为20mMH...
【专利技术属性】
技术研发人员：任贵兴，么杨，
申请(专利权)人：中国农业科学院作物科学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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