促进抗原消除的抗原结合分子制造技术

本发明专利技术人创作了抗原结合分子，所述抗原结合分子含有：在pH酸性范围条件下具有人FcRn结合活性，且抗原结合分子的抗原结合活性随离子浓度条件而变化的抗原结合结构域；以及，在pH中性范围条件下Fcγ受体结合活性与EU编号297位连接的糖链为含岩藻糖糖链的天然型人IgG的Fc区的Fcγ受体结合活性相比高的Fcγ受体结合结构域。

Antigen binding molecules promoting antigen elimination

【技术实现步骤摘要】
促进抗原消除的抗原结合分子本申请是国际申请号PCT/JP2012/075092，国际申请日为2012年9月28日，进入中国国家阶段日期为2014年5月29日，中国国家申请号为201280058920.8，专利技术名称为“促进抗原消除的抗原结合分子”的分案申请。
本专利技术提供：使结合的抗原向细胞内的摄入得到促进的抗原结合分子、使每一分子可结合的抗原数目增加的抗原结合分子、使药代动力学得到改善的抗原结合分子、使在细胞外结合的抗原在细胞内的解离得到促进的抗原结合分子、使在不与抗原结合的状态下向细胞外的释放得到促进的抗原结合分子、具有使血浆中的总抗原浓度或游离抗原浓度减少的功能的抗原结合分子，含有该抗原结合分子的药物组合物，以及它们的制备方法。
技术介绍
抗体在血浆中的稳定性高、副作用也少，因而作为医药品受到关注。其中，IgG型的抗体药物有大量上市，现在也正在开发着数量众多的抗体药物(非专利文献1和非专利文献2)。另一方面，作为能适用于第二代抗体药物的技术，开发有各种技术，报道了使效应子功能、抗原结合能力、药代动力学、稳定性提高的技术或者使免疫原性风险降低的技术等(非专利文献3)。通常，抗体药物的给药量非常高，因而作为课题可考虑到难以制作皮下给药制剂，制备成本高等。作为降低抗体药物的给药量的方法，可考虑改善抗体的药代动力学的方法和使抗体与抗原的亲和性提高的方法。作为改善抗体的药代动力学的方法，报道有恒定区的人工氨基酸取代(非专利文献4和5)。作为增强抗原结合能力、抗原中和能力的技术，报道有亲和性成熟技术(非专利文献6)，通过对可变区的CDR区等的氨基酸导入突变可以增强对抗原的结合活性。通过增强抗原结合能力，可以使体外的生物活性提高，或者降低给药量，进而也可以使体内(机体内)的药效提高(非专利文献7)。另一方面，每一分子抗体能够中和的抗原量依赖于亲和性，可以通过增强亲和性来以少的抗体量中和抗原，可以通过各种方法增强抗体的亲和性(非专利文献6)。进而，只要可共价地与抗原结合，使亲和性无限大，则可以用一分子的抗体来中和一分子的抗原(二价的情形为二抗原)。但是，迄今为止的方法中，限制是一分子抗体对一分子抗原(二价的情形是二抗原)的化学计量的中和反应，不可能用抗原量以下的抗体量来完全中和抗原。即，在增强亲和性的效果方面存在限制(非专利文献9)。中和抗体的情形中，为了使其中和效果持续一定期间，需要给予机体内在该期间产生的抗原量以上的抗体量，仅通过上述的抗体药代动力学改善或者亲和性成熟技术，在降低必要抗体给药量方面存在限制。因此，为了用抗原量以下的抗体量来使抗原的中和效果持续目标期间，需要用一个抗体来中和多个抗原。作为实现其的新方法，最近报道了pH依赖性地与抗原结合的抗体(专利文献1)。在血浆中的中性条件下与抗原强结合、在内体内的酸性条件下从抗原解离的pH依赖性抗原结合抗体可以在内体内从抗原解离。pH依赖性抗原结合抗体在将抗原解离后，若抗体被FcRn再循环到血浆中，则可以再次与抗原结合，因而可以用一个pH依赖性抗原结合抗体重复与多个抗原结合。此外，与结合至FcRn而被再循环的抗体相比，抗原的血浆中滞留性非常短。这种血浆中滞留性长的抗体与其抗原结合时，抗体抗原复合体的血浆中滞留性变得与抗体同样地长。因此，抗原通过与抗体结合，不仅血浆中滞留性变长，而且血浆中抗原浓度上升。如此，pH依赖性抗原结合抗体可以用1个抗体与多个抗原结合，与通常的抗体相比，能促进抗原从血浆中的消除，因此具有通常的抗体所无法实现的作用。然而，迄今为止尚未报道有该pH依赖性抗原结合抗体的可以重复与抗原结合的效果以及使促进抗原从血浆中消除的效果进一步提高的抗体工程技术。IgG抗体通过与FcRn结合而具有长的血浆中滞留性。IgG和FcRn的结合仅在酸性条件下(pH6.0)被观察到，而在中性条件下(pH7.4)基本观察不到其结合。IgG抗体被非特异性地摄入细胞，但通过在内体内的酸性条件下与内体内的FcRn结合而返回到细胞表面上，在血浆中的中性条件下从FcRn解离。向IgG的Fc区导入突变而使其丧失在pH酸性条件下与FcRn的结合时，变得无法从内体内再循环到血浆中，因而抗体的血浆中滞留性显著受损。作为改善IgG抗体的血浆中滞留性的方法，报道有提高pH酸性范围条件下对FcRn的结合的方法。通过向IgG抗体的Fc区导入氨基酸取代，使pH酸性范围条件下对FcRn的结合提高，从内体内再循环到血浆中的效率提高，结果血浆中滞留性改善。作为IgG类抗体的效应子功能的抗体依赖性细胞毒活性(以下表示为ADCC)、补体依赖性细胞毒活性(以下表示为CDC)的研究，迄今为止进行了许多，在人IgG类之中，报道了IgG1亚类的抗体具有最高的ADCC活性、CDC活性(非专利文献13)。此外，作为由IgG类抗体介导的靶细胞的吞噬作用的抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)也作为抗体的效应子功能之一而被暗示(非专利文献14、非专利文献15)。IgG1亚类的抗体可能对肿瘤发挥这些效应子功能，因此使用IgG1亚类的抗体作为针对癌抗原的大部分的抗体药物。为了使IgG抗体介导ADCC、ADCP活性，有必要使IgG抗体的Fc区与存在于杀伤细胞、自然杀伤细胞、活化的巨噬细胞等效应细胞表面上的抗体受体(以下表示为Fcγ受体或FcγR)相结合。作为人的Fcγ受体的蛋白家族，报道有FcγRIa、FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIIa、FcγRIIIb的同种型，也报道有各自的同种异型(非专利文献16)。增强ADCC和ADCP等细胞毒性的效应子功能，作为有望用于增强抗癌抗体的抗肿瘤效果的手段而被关注。以抗体的抗肿瘤效果为目的的由Fcγ受体介导的效应子功能的重要性有使用小鼠模型的报道(非专利文献17、非专利文献18)。此外，在对人的临床效果与FcγRIIIa的高亲和性多态性(V158)和低亲和性多态性(F158)之间观察到了相关性(非专利文献19)。根据这些报道，暗示了：具有优化了与特定Fcγ受体的结合的Fc区的抗体介导更强的效应子功能，由此发挥有效的抗肿瘤效果。抗体对含有FcγRIa、FcγRIIa、FcγRIIIa、FcγRIIIb的活化受体、含有FcγRIIb的抑制受体各自的亲和性的平衡在优化抗体的效应子功能方面是重要的因素。通过增强对活化受体的亲和性，可以对抗体赋予介导更强的效应子功能的性质(非专利文献20)，因此作为使针对抗癌抗原的抗体药物的抗肿瘤活性增强或提高的抗体工程方法，迄今为止有各种的报道。已显示：关于Fc区与Fcγ受体的结合，抗体的铰链区以及CH2结构域内的数个氨基酸残基以及与CH2结构域结合的EU编号297位的Asn上所附加的糖链是重要的(非专利文献13、非专利文献21、非专利文献22)。围绕该结合位置，迄今为止研究了各种具有Fcγ受体结合特性的Fc区的突变体，得到了对活化Fcγ受体具有更高亲和性的Fc区突变体(专利文献2、专利文献3)。例如，Lazar等人通过将人IgG1的以EU编号表示的239位的Ser、330位的Ala、332位的Ile分别取代成Asp、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.含有抗原结合分子的药物组合物，其中，所述抗原结合分子含有：在pH酸性范围条件下具有人FcRn结合活性，且对抗原的结合活性随离子浓度条件而变化的抗原结合结构域；以及，在pH中性范围条件下Fcγ受体结合活性与EU编号297位连接的糖链为含岩藻糖糖链的天然型人IgG的Fc区的Fcγ受体结合活性相比高的Fcγ受体结合结构域。/n

【技术特征摘要】
20110930 JP 2011-217498;20120224 JP PCT/JP2012/0541.含有抗原结合分子的药物组合物，其中，所述抗原结合分子含有：在pH酸性范围条件下具有人FcRn结合活性，且对抗原的结合活性随离子浓度条件而变化的抗原结合结构域；以及，在pH中性范围条件下Fcγ受体结合活性与EU编号297位连接的糖链为含岩藻糖糖链的天然型人IgG的Fc区的Fcγ受体结合活性相比高的Fcγ受体结合结构域。


2.权利要求1所述的药物组合物，其中，上述抗原为可溶型抗原。


3.权利要求1或2所述的药物组合物，其中，上述离子浓度为钙离子浓度。


4.权利要求3所述的药物组合物，其中，上述抗原结合结构域为在高钙离子浓度条件下抗原结合活性高于在低钙离子浓度条件下对该抗原的结合活性的抗原结合结构域。


5.权利要求1或2所述的药物组合物，其中，上述离子浓度条件为pH条件。


6.权利要求5所述的药物组合物，其中，上述抗原结合结构域为在pH中性范围条件下抗原结合活性高于在pH酸性范围条件下对该抗原的结合活性的抗原结合结构域。


7.权利要求1～6中任一项所述的药物组合物，其中，上述抗原结合分子为具有针对上述抗原的中和活性的抗原结合分子。


8.权利要求1～7中任一项所述的药物组合物，其中，上述Fcγ受体结合结构域含有抗体的Fc区。


9.权利要求8所述的药物组合物，其中，上述Fc区是在Fc区的以EU编号表示的位点中选自以下的至少一个以上的氨基酸与天然型Fc区的对应位点的氨基酸不同的Fc区：221位、222位、223位、224位、225位、227位、228位、230位、231位、232位、233位、234位、235位、236位、237位、238位、239位、240位、241位、243位、244位、245位、246位、247位、249位、250位、251位、254位、255位、256位、258位、260位、262位、263位、264位、265位、266位、267位、268位、269位、270位、271位、272位、273位、274位、275位、276位、278位、279位、280位、281位、282位、283位、284位、285位、286位、288位、290位、291位、292位、293位、294位、295位、296位、297位、298位、299位、300位、301位、302位、303位、304位、305位、311位、313位、315位、317位、318位、320位、322位、323位、324位、325位、326位、327位、328位、329位、330位、331位、332位、333位、334位、335位、336位、337位、339位、376位、377位、378位、379位、380位、382位、385位、392位、396位、421位、427位、428位、429位、434位、436位和440位。


10.权利要求9所述的药物组合物，其中，上述Fc区是在Fc区的以EU编号表示的位点中含有选自以下的至少一个以上的氨基酸的Fc区：
221位的氨基酸为Lys或Tyr中的任一个；
222位的氨基酸为Phe、Trp、Glu或Tyr中的任一个；
223位的氨基酸为Phe、Trp、Glu或Lys中的任一个；
224位的氨基酸为Phe、Trp、Glu或Tyr中的任一个；
225位的氨基酸为Glu、Lys或Trp中的任一个；
227位的氨基酸为Glu、Gly、Lys或Tyr中的任一个；
228位的氨基酸为Glu、Gly、Lys或Tyr中的任一个；
230位的氨基酸为Ala、Glu、Gly或Tyr中的任一个；
231位的氨基酸为Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中的任一个；
232位的氨基酸为Glu、Gly、Lys或Tyr中的任一个；
233位的氨基酸为Ala、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
234位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
235位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
236位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
237位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
238位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
239位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
240位的氨基酸为Ala、Ile、Met或Thr中的任一个；
241位的氨基酸为Asp、Glu、Leu、Arg、Trp或Tyr中的任一个；
243位的氨基酸为Leu、Glu、Leu、Gln、Arg、Trp或Tyr中的任一个；
244位的氨基酸为His；
245位的氨基酸为Ala；
246位的氨基酸为Asp、Glu、His或Tyr中的任一个；
247位的氨基酸为Ala、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Thr、Val或Tyr中的任一个；
249位的氨基酸为Glu、His、Gln或Tyr中的任一个；
250位的氨基酸为Glu或Gln中的任一个；
251位的氨基酸为Phe；
254位的氨基酸为Phe、Met或Tyr中的任一个；
255位的氨基酸为Glu、Leu或Tyr中的任一个；
256位的氨基酸为Ala、Met或Pro中的任一个；
258位的氨基酸为Asp、Glu、His、Ser或Tyr中的任一个；
260位的氨基酸为Asp、Glu、His或Tyr中的任一个；
262位的氨基酸为Ala、Glu、Phe、Ile或Thr中的任一个；
263位的氨基酸为Ala、Ile、Met或Thr中的任一个；
264位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Trp或Tyr中的任一个；
265位的氨基酸为Ala、Leu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
266位的氨基酸为Ala、Ile、Met或Thr中的任一个；
267位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
268位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Trp中的任一个；
269位的氨基酸为Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
270位的氨基酸为Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Trp或Tyr中的任一个；
271位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
272位的氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
273位的氨基酸为Phe或Ile中的任一个；
274位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
275位的氨基酸为Leu或Trp中的任一个；
276位的氨基酸为、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
278位的氨基酸为Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp中的任一个；
279位的氨基酸为Ala；
280位的氨基酸为Ala、Gly、His、Lys、Leu、Pro、Gln、Trp或Tyr中的任一个；
281位的氨基酸为Asp、Lys、Pro或Tyr中的任一个；
282位的氨基酸为Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中的任一个；
283位的氨基酸为Ala、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg或Tyr中的任一个；
284位的氨基酸为Asp、Glu、Leu、Asn、Thr或Tyr中的任一个；
285位的氨基酸为Asp、Glu、Lys、Gln、Trp或Tyr中的任一个；
286位的氨基酸为Glu、Gly、Pro或Tyr中的任一个；
288位的氨基酸为Asn、Asp、Glu或Tyr中的任一个；
290位的氨基酸为Asp、Gly、His、Leu、Asn、Ser、Thr、Trp或Tyr中的任一个；
291位的氨基酸为Asp、Glu、Gly、His、Ile、Gln或Thr中的任一个；
292位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Pro、Thr或Tyr中的任一个；
293位的氨基酸为Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
294位的氨基酸为Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
295位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
296位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr或Val中的任一个；
297位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
298位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
299位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr中的任一个；
300位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp中的任一个；
301位的氨基酸为Asp、Glu、His或Tyr中的任一个；
302位的氨基酸为Ile；
303位的氨基酸为Asp、Gly或Tyr中的任一个；
304位的氨基酸为Asp、His、Leu、Asn或Thr中的任一个；
305位的氨基酸为Glu、Ile、Thr或Tyr中的任一个；
311位的氨基酸为Ala、Asp、Asn、Thr、Val或Tyr中的任一个；
313位的氨基酸为Phe；
315位的氨基酸为Leu；
317位的氨基酸为Glu或Gln；
318位的氨基酸为His、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr中的任一个；
320位的氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
322位的氨基酸为Ala、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Pro、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
323位的氨基酸为Ile；
324位的氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
325位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
326位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
327位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
328位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
329位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
330位的氨基酸为Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
331位的氨基酸为Asp、Phe、His、Ile、Leu、Met、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
332位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
333位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Val或Tyr中的任一个；
334位的氨基酸为Ala、Glu、Phe、Ile、Leu、Pro或Thr中的任一个；
335位的氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr中的任一个；
336位的氨基酸为Glu、Lys或Tyr中的任一个；
337位的氨基酸为Glu、His或Asn中的任一个；
339位的氨基酸为Asp、Phe、Gly、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Ser或Thr中的任一个；
376位的氨基酸为Ala或Val中的任一个；
377位的氨基酸为Gly或Lys中的任一个；
378位的氨基酸为Asp；
379位的氨基酸为Asn；
380位的氨基酸为Ala、Asn或Ser中的任一个；
382位的氨基酸为Ala或Ile中的任一个；
385位的氨基酸为Glu；
392位的氨基酸为Thr；
396位的氨基酸为Leu；
421位的氨基酸为Lys；
427位的氨基酸为Asn；
428位的氨基酸为Phe或Leu中的任一个；
429位的氨基酸为Met；
434位的氨基酸为Trp；
436位的氨基酸为Ile；以及
440位的氨基酸为Gly、His、Ile、Leu或Tyr中的任一个。


11.权利要求1～10中任一项所述的药物组合物，其中，上述EU编号297位连接的糖链为含岩藻糖糖链的天然型人IgG的Fc区是：EU编号297位连接的糖链为含岩藻糖糖链的天然型人IgG1、天然型人IgG2、天然型人IgG3或天然型人IgG4的任一个的Fc区。


12.权利要求1～11中任一项所述的药物组合物，其中，上述人Fcγ受体为FcγRIa、FcγRIIa(R)、FcγRIIa(H)、FcγRIIb、FcγRIIIa(V)或FcγRIIIa(F)。


13.权利要求1～11中任一项所述的药物组合物，其中，上述人Fcγ受体为FcγRIIb。


14.权利要求8～13中任一项所述的药物组合物，其中，上述Fc区是在Fc区的以EU编号表示的位点中含有以下的至少一个以上的氨基酸的Fc区：
238位的氨基酸为Asp，或
328位的氨基酸为Glu。


15.以下(i)～(vi)中任一项的方法，该方法包括使抗原结合分子与表达Fcγ受体的细胞在机体内或机体外进行细胞接触的步骤，所述抗原结合分子含有：在pH酸性范围条件下具有人FcRn结合活性，且对抗原的结合活性随离子浓度条件而变化的抗原结合结构域；以及，在pH中性范围条件下Fcγ受体结合活性与EU编号297位连接的糖链为含岩藻糖糖链的天然型人IgG的Fc区的Fcγ受体结合活性相比高的Fcγ受体结合结构域，
(i)使一分子的抗原结合分子可结合的抗原数目增加的方法；
(ii)使血浆中的抗原消除的方法；
(iii)改善抗原结合分子的药代动力学的方法；
(iv)促进在细胞外与抗原结合分子结合的抗原在细胞内从抗原结合分子解离的方法；
(v)促进不与抗原结合的状态的抗原结合分子向细胞外释放的方法；或
(vi)使血浆中的总抗原浓度或游离抗原浓度减少的方法。


16.权利要求15所述的方法，其中，上述抗原为可溶型抗原。


17.权利要求15或16所述的方法，其中，上述离子浓度为钙离子浓度。


18.权利要求17所述的方法，其中，上述抗原结合结构域为在高钙离子浓度条件下的抗原结合活性高于在低钙离子浓度条件下对该抗原的结合活性的抗原结合结构域。


19.权利要求15或16所述的方法，其中，上述离子浓度条件为pH条件。


20.权利要求19所述的方法，其中，上述抗原结合结构域为在pH中性范围条件下的抗原结合活性高于在pH酸性范围条件下对该抗原的结合活性的抗原结合结构域。


21.权利要求15～20中任一项所述的方法，其中，上述抗原结合分子为具有针对上述抗原的中和活性的抗原结合分子。


22.权利要求15～21中任一项所述的方法，其中，上述Fcγ受体结合结构域含有抗体的Fc区。


23.权利要求22所述的方法，其中，上述Fc区是在Fc区的以EU编号表示的位点中选自以下的至少一个以上的氨基酸与天然型Fc区的对应位点的氨基酸不同的Fc区：221位、222位、223位、224位、225位、227位、228位、230位、231位、232位、233位、234位、235位、236位、237位、238位、239位、240位、241位、243位、244位、245位、246位、247位、249位、250位、251位、254位、255位、256位、258位、260位、262位、263位、264位、265位、266位、267位、268位、269位、270位、271位、272位、273位、274位、275位、276位、278位、279位、280位、281位、282位、283位、284位、285位、286位、288位、290位、291位、292位、293位、294位、295位、296位、297位、298位、299位、300位、301位、302位、303位、304位、305位、311位、313位、315位、317位、318位、320位、322位、323位、324位、325位、326位、327位、328位、329位、330位、331位、332位、333位、334位、335位、336位、337位、339位、376位、377位、378位、379位、380位、382位、385位、392位、396位、421位、427位、428位、429位、434位、436位和440位。


24.权利要求23所述的方法，其中，上述Fc区是在Fc区的以EU编号表示的位点中含有选自以下的至少一个以上的氨基酸的Fc区：
221位的氨基酸为Lys或Tyr中的任一个；
222位的氨基酸为Phe、Trp、Glu或Tyr中的任一个；
223位的氨基酸为Phe、Trp、Glu或Lys中的任一个；
224位的氨基酸为Phe、Trp、Glu或Tyr中的任一个；
225位的氨基酸为Glu、Lys或Trp中的任一个；
227位的氨基酸为Glu、Gly、Lys或Tyr中的任一个；
228位的氨基酸为Glu、Gly、Lys或Tyr中的任一个；
230位的氨基酸为Ala、Glu、Gly或Tyr中的任一个；
231位的氨基酸为Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中的任一个；
232位的氨基酸为Glu、Gly、Lys或Tyr中的任一个；
233位的氨基酸为Ala、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
234位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
235位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
236位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
237位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
238位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
239位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
240位的氨基酸为Ala、Ile、Met或Thr中的任一个；
241位的氨基酸为Asp、Glu、Leu、Arg、Trp或Tyr中的任一个；
243位的氨基酸为Leu、Glu、Leu、Gln、Arg、Trp或Tyr中的任一个；
244位的氨基酸为His；
245位的氨基酸为Ala；
246位的氨基酸为Asp、Glu、His或Tyr中的任一个；
247位的氨基酸为Ala、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Thr、Val或Tyr中的任一个；
249位的氨基酸为Glu、His、Gln或Tyr中的任一个；
250位的氨基酸为Glu或Gln中的任一个；
251位的氨基酸为Phe；
254位的氨基酸为Phe、Met或Tyr中的任一个；
255位的氨基酸为Glu、Leu或Tyr中的任一个；
256位的氨基酸为Ala、Met或Pro中的任一个；
258位的氨基酸为Asp、Glu、His、Ser或Tyr中的任一个；
260位的氨基酸为Asp、Glu、His或Tyr中的任一个；
262位的氨基酸为Ala、Glu、Phe、Ile或Thr中的任一个；
263位的氨基酸为Ala、Ile、Met或Thr中的任一个；
264位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Trp或Tyr中的任一个；
265位的氨基酸为Ala、Leu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
266位的氨基酸为Ala、Ile、Met或Thr中的任一个；
267位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
268位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Trp中的任一个；
269位的氨基酸为Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
270位的氨基酸为Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Trp或Tyr中的任一个；
271位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
272位的氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
273位的氨基酸为Phe或Ile中的任一个；
274位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
275位的氨基酸为Leu或Trp中的任一个；
276位的氨基酸为、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
278位的氨基酸为Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp中的任一个；
279位的氨基酸为Ala；
280位的氨基酸为Ala、Gly、His、Lys、Leu、Pro、Gln、Trp或Tyr中的任一个；
281位的氨基酸为Asp、Lys、Pro或Tyr中的任一个；
282位的氨基酸为Glu、Gly、Lys、Pro或Tyr中的任一个；
283位的氨基酸为Ala、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Arg或Tyr中的任一个；
284位的氨基酸为Asp、Glu、Leu、Asn、Thr或Tyr中的任一个；
285位的氨基酸为Asp、Glu、Lys、Gln、Trp或Tyr中的任一个；
286位的氨基酸为Glu、Gly、Pro或Tyr中的任一个；
288位的氨基酸为Asn、Asp、Glu或Tyr中的任一个；
290位的氨基酸为Asp、Gly、His、Leu、Asn、Ser、Thr、Trp或Tyr中的任一个；
291位的氨基酸为Asp、Glu、Gly、His、Ile、Gln或Thr中的任一个；
292位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Pro、Thr或Tyr中的任一个；
293位的氨基酸为Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
294位的氨基酸为Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
295位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
296位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr或Val中的任一个；
297位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
298位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、His、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
299位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr中的任一个；
300位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp中的任一个；
301位的氨基酸为Asp、Glu、His或Tyr中的任一个；
302位的氨基酸为Ile；
303位的氨基酸为Asp、Gly或Tyr中的任一个；
304位的氨基酸为Asp、His、Leu、Asn或Thr中的任一个；
305位的氨基酸为Glu、Ile、Thr或Tyr中的任一个；
311位的氨基酸为Ala、Asp、Asn、Thr、Val或Tyr中的任一个；
313位的氨基酸为Phe；
315位的氨基酸为Leu；
317位的氨基酸为Glu或Gln；
318位的氨基酸为His、Leu、Asn、Pro、Gln、Arg、Thr、Val或Tyr中的任一个；
320位的氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Asn、Pro、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
322位的氨基酸为Ala、Asp、Phe、Gly、His、Ile、Pro、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
323位的氨基酸为Ile；
324位的氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
325位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
326位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Gly、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
327位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
328位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
329位的氨基酸为Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
330位的氨基酸为Cys、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
331位的氨基酸为Asp、Phe、His、Ile、Leu、Met、Gln、Arg、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
332位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Lys、Leu、Met、Asn、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr中的任一个；
333位的氨基酸为Ala、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Val或Tyr中的任一个；
334位的氨基酸为Ala、Glu、Phe、Ile、Leu、Pro或Thr中的任一个；
335位的氨基酸为Asp、Phe、Gly、His、Ile、Leu、Met、Asn、Pro、Arg、Ser、Val、Trp或Tyr中的任一个；
336位的氨基酸为Glu、Lys或Tyr中的任一个；
337位的氨基酸为Glu、His或Asn中的任一个；
339位的氨基酸为Asp、Phe、Gly、Ile、Lys、Met、Asn、Gln、Arg、Ser或Thr中的任一个；
376位的氨基酸为Ala或Val中的任一个；
377位的氨基酸为Gly或Lys中的任一个；
378位的氨基酸为Asp；
379位的氨基酸为Asn；
380位的氨基酸为Ala、Asn或Ser中的任一个；
382位的氨基酸为Ala或Ile中的任一个；
385位的氨基酸为Glu；
392位的氨基酸为Thr；
396位的氨基酸为Leu；
421位的氨基酸为Lys；
427位的氨基酸为Asn；
428位的氨基酸为Phe或Leu中的任一个；
429位的氨基酸为Met；
434位的氨基酸为Trp；
436位的氨基酸为Ile；以及
440位的氨基酸为Gly、His、Ile、Leu或Tyr中的任一个。


25.权利要求15～24中任一项所述的方法，其中，上述EU编号297位连接的糖链为含岩藻糖糖链的天然型人IgG的Fc区是：EU编号297位连接的糖链为含岩藻糖糖链的天然型人IgG1、天然型人IgG2、天然型人IgG3或天然型人IgG4的任一个的Fc区。


26.权利要求15～25中任一项所述的方法，其中，上述人Fcγ受体为FcγRIa、FcγRIIa(R)、FcγRIIa(H)、FcγRIIb、FcγRIIIa(V)或FcγRIIIa(F)。


27.权利要求15～25中任一项所述的方法，其中，上述人Fcγ受体为FcγRIIb。


28.权利要求22～27中任一项所述的方法，其中，上述Fc区是在Fc区的以EU编号表示的位点中含有以下的至少一个以上的氨基酸的Fc区：
238位的氨基酸为Asp，或
328位的氨基酸为Glu。


29.以下(i)～(vii)的任一项所述的方法，该方法包括：使抗原结合分子中的Fcγ受体结合结构域在pH中性范围条件下的Fcγ受体结合活性较EU编号297位连接的糖链为含岩藻糖糖链的天然型人IgG的Fc区在pH中性范围条件下的Fcγ受体结合活性增强的步骤，所述抗原结合分子含有在pH酸性范围条件下具有人FcRn结合活性、且对抗原的结合活性随离子浓度条件而变化的抗原结合结构域以及Fcγ受体结合结构域，
(i)使结合的抗原向细胞内的摄入得到促进的抗原结合分子的改变方法；
(ii)使一分子的抗原结合分子可结合的抗原数目增加的方法；
(iii)使抗原结合分子的血浆中抗原消除能力增大的方法；
(iv)改善抗原结合分子的药代动力学的方法；
(v)促进在细胞外与抗原结合分子结合的抗原在细胞内从抗原结合分子解离的方法；
(vi)促进在与抗原结合的状态下摄入到细胞内的抗原结合分子在不与抗原结合的状态下向细胞外释放的方法；或
(vii)可减少血浆中的总抗原浓度或游离抗原浓度的抗原结合分子的改变方法。


30.权利要求29所述的方法，其中，上述抗原为可溶型抗原。


31.权利要求29或30所述的方法，其中，上述离子浓度...

【专利技术属性】
技术研发人员：井川智之，前田敦彦，原谷健太，岩柳有起，橘达彦，
申请(专利权)人：中外制药株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP