与一种精子区带结合蛋白的自身抗原性抗原决定基相对应的精子抗原制造技术

编码一种Ｓｐ１７蛋白的分离的ＤＮＡ选自由以下物质组成的组中 （ａ）分离的ＤＮＡ基本上由编码具有本文以ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ∶２给出的氨基酸序列的人Ｓｐ１７蛋白的ＤＮＡ组成； （ｂ）分离的ＤＮＡ，在０．３ＭＮａＣｌ，０．０３Ｍ柠檬酸钠和０．１％ＳＤＳ在６０℃的严格洗涤的条件下可与上面（ａ）中分离的ＤＮＡ杂交，并能编码一种人Ｓｐ１７蛋白； （ｃ）分离的ＤＮＡ，因遗传密码的简并性而在核苷酸序列上不同于上述（ａ）和（ｂ）的分离的ＤＮＡ，并能编码一种人Ｓｐ１７蛋白； （ｄ）前面的能编码抗原性肽的片段，该抗原性肽能与可结合人Ｓｐ１７蛋白的抗体结合。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是在国家健康研究中心授权号No.U54 HD29009的政府资助下完成的。政府对本专利技术具有确定的权利。本专利技术涉及的领域本专利技术涉及一类抗原，以及用这类抗原进行治疗和诊断的方法。这些抗原相关于精子的透明区结合蛋白上的自身抗原性抗原决定基。本专利技术的背景自身抗原是一个生物体的组织成分，生物体可以针对这种组织成分产生免疫应答。由这种自身引导的免疫应答产生的疾病就是自身免疫病(或“自身变态反应”)已知精子上的蛋白是有效力的自身抗原，对这些蛋白质的自身免疫已被确信是引起不育症的一个重要原因。R.Shabanowita和MO’Rand，Ann.NY Acad.Sci 541,621-632(1988)，在图7中描述了各种对人透明区有亲和性的人蛋白质。M.O’Rand和E.Widgren，U.S.Patent No.5,175,148，公开了一种相关于兔精上膜自身抗原(RSA)的一种自身抗原性表位的精子抗原。RSA现已知是一个蛋白家族，有4种低分子量糖蛋白(RSA-1，2，3，414K，16K，17K，18K)，其功能是充当高亲和性区结合蛋白。对兔RSA3(也称“Sp17”)的克隆化在R.Richardson and M.O’Rand，Mol.Biol.Cell.3，15a(1992)中有描述。本专利技术的概述本专利技术的一个方面是分离的编码人Sp17蛋白或抗原性肽的片段的DNA，选自由下列物质组成的组中(a)能编码人Sp17蛋白的DNA分离物(如SEQ ID No1的DNA)此Sp17蛋白具有本文给出的SEQ ID No2的氨基酸序列；(b)能与上面(a)中的DNA分离物杂交，并能编码一种人Sp17蛋白的DNA分离物；(c)由于遗传密码的简并性而在核苷酸序列上不同于上述(a)和(b)的DNA分离物，且它编码一种人Sp17蛋白；(d)前述的能编码抗原性肽的片段(即能与可结合人Sp17蛋白的抗体结合的肽，正如下面将描述的，典型的这种肽长6至25个氨基酸)。这些蛋白和肽有时在下文中就称作“抗原”，它们都可用作免疫避孕制剂和/或用于诊断自身免疫性不育症，就如下文所要讨论的。本专利技术的第二个方面是一个重组DNA序列，它包括载体DNA和一个上述的DNA，本专利技术的第三个方面是一种宿主细胞，它包含上文给出的一个重组DNA序列，并能表达由此DNA序列编码的Sp17蛋白及其抗原性肽片段。本专利技术的第四个方面是抗原性肽(下文也称作“抗原”或“多种抗原”)，可用作免疫避孕试剂或用于诊断自身免疫性不育。这种肽选自由下列物质组成的组中(1)哺乳动物Sp17蛋白的长为6至25个氨基酸的抗原性片段；(2)其抗原性等同物，所说的抗原性等同物是(a)一个修饰过的片段，包含经过在其序列上取代一或多个氨基酸而修饰得到的所说的抗原性片段，或(b)插入上述抗原性片段的序列中的一个更长的肽，它具有(i)多达4个另外的氨基酸残基附着在上述序列的C-末端，(ii)多达4个另外的氨基酸残基附着在上述序列的N-末端，或(iii)多达4个另外的氨基酸残基附着在上述序列的C-末端并同时有多达4个氨基酸残基附着在上述序列的N-末端，其中所说的抗原性等同物与结合哺乳动物Sp17蛋白所说的抗原性片段的抗体相结合。哺乳动物Sp17蛋白的抗原性片段选自由下列物质组成的组中(i)氨基酸4到氨基酸28片段，(ii)氨基酸34到氨基酸49片段，(iii)氨基酸55到氨基酸82片段，(iv)氨基酸117到氨基酸137片段，(v)在(i)至(iv)的片段中长至少有6个氨基酸的片段。本专利技术的第五个方面是一种免疫避孕法，它包含给一个受试者(例如，一个女性受试者)服用有效剂量的上述抗原，以减少该受试者的生育力。本专利技术的第六个方面是一种免疫避孕疫苗组合物，包含上面所提到的使受试者减少生育力的有效剂量的抗原与一个药用上可接受的载体的组合。本专利技术的第七个方面是检查受试者(例如，一个男性受试者)的自身免疫不孕症的方法，包括检测该受试者体内能结合上文提到的抗原的抗体的存在，而这种抗体的存在表明该受试者患有自免疫不孕症。本专利技术的第八个方面是一种无毒宿主细胞(例如，一种微生物宿主细胞)，它包含一个能编码上文提到的抗原的重组DNA序列，它还能表达这种编码抗原。本专利技术的第九个方面是一种免疫避孕疫苗配方，包含减少受试者的生育力有效量的上述无毒宿主细胞与一种药用上可接受的载体的组合。前述文中一个较优选的实施方案中，无毒微生物缺乏能编码β-天门冬氨酸半醛脱氢酶(asd)的一种天然功能性染色体基因，却包含能编码一种功能性asd多肽的重组基因。此重组基因与上文提到的编码一个或多个抗原的一个或多个基因相连。此无毒微生物可能还包括一个突变的cya基因，使这种微生物事实上不能产生功能性腺苷酸坏化酶；而且/或者此微生物还有一个突变的Crp基因，使它事实上不能产生功能性环AMP受体蛋白。在本文附图和下文提供的说明书中更详细地解释本专利技术。附图的简单描述附图说明图1显示了来自注射了其自身精子的雄兔的抗血清，与具有本文公开的SEQ ID NO3到SEQ ID NO49的氨基酸序列的兔Sp17系列十肽的结合。在此图中，每个十肽的SEQ ID NO数均提示在其左和/或右侧。图2显示了来自4例有高滴度抗精子抗体的切除输精管的男性的血清库，用图1所用的兔Sp17系列十肽进行测试的结合情况。图中所有峰值表示人自身抗原性，B细胞抗原决定基。图3显示了图1所述的系列十肽与来自用兔Sp17重组抗原免疫的雌兔的免疫血清的结合情况。图4显示了图1所术的系列十肽与用合成肽G22C免疫的雄兔体内提取的免疫血清的结合情况。图5显示了图1所示的系列十肽与用合成肽G22C免疫的雌兔体内提取的免疫血清的结合。图6描绘了用重组Sp17(融合蛋白)免疫小鼠对生育力的影响。六只小鼠接受了人Sp17。佐剂对照(例数为12)只接受了TITERMAXTM佐剂(由Sigma co.，St.Louis提供)。还有6只小鼠未接受注射。可见经人Sp17重组蛋白免疫的小鼠，其怀孕率下降了42％。图7给出了兔(RABSP17)，小鼠(MUSSP17)，和人(HUMSP17)的Sp17蛋白序列的序列对比。抗原性片段以黑框表示。数字编序是在人的序列编数的基础上从N-未端偏到C-末端，在另外几种哺乳动物的序列中有中断处，是为了使黑框中显示自身抗原性片段的序列对比最大，编数时跳过了这些中断处，使几种物种之间的自身抗原性片段的编数在黑框中有相关性。本专利技术的详细描述本文公开的氨基酸序列是从左至右按氨基端到羧基端的方向显示的。但序列中没有显示氨基和羧基的基团。本文中核苷酸序列只以单链形式，按5’-3’方向，从左至右显示。本文中核苷酸和氨基酸，是按IUPAC-IUB生物化学命名委员会建议的方法，或(对氨基酸)是按三字母密码来描述的，与37CFRξ1.822和已建立的用法相一致。例如见Patent In User Manual，99-102(Nov.1990)(U.S.Patent and Trddemark Office，Office of theAssistant Commissioner for Patents，Washington，D.C.，20231)；U.S.Patent No.4,8本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：MG奥’兰德，EE威德格雷恩，RT理查森，IA利，
申请(专利权)人：查珀尔希尔北卡罗来纳大学，
类型：发明
国别省市：