调节补体依赖性细胞溶解效应子功能的修饰的人IGM恒定区制造技术

本公开提供了经修饰的人IgM重链恒定区，所述经修饰的人IgM重链恒定区例如在Cμ3结构域中包含一个或多个氨基酸取代，其中相对于相应的野生型人IgM抗体，包含所述经修饰的IgM恒定区和对靶抗原有特异性的重链可变区的经修饰的人IgM抗体表现出对表达所述靶抗原的细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)降低。

Modified human IgM constant region regulating complement dependent cytolysis effector function

The present disclosure provides a modified human IgM heavy chain constant region, wherein the modified human IgM heavy chain constant region includes, for example, one or more amino acid substitutions in the C \u03bc 3 domain, wherein, compared with the corresponding wild-type human IgM antibody, the modified human IgM antibody including the modified IgM constant region and the modified human IgM antibody against the original specific heavy chain variable region of the target antibody show the ability to express the target antigen The complement dependent cytotoxicity (CDC) of cells decreased.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】调节补体依赖性细胞溶解效应子功能的修饰的人IGM恒定区相关申请的交叉引用本申请要求2017年4月7日提交的美国临时专利申请序列号62/483,087的权益，该临时专利申请通过引用整体并入本文。
技术介绍
补体依赖性细胞毒性是抗体用于使先天免疫系统的组分破坏入侵微生物的效应子功能。治疗性抗体可以使用补体系统以使补体系统攻击被抗体靶向的细胞，例如肿瘤细胞。通过第一组分C1q与IgG的Fc区或与IgM的FcMu区的结合而触发补体级联。抗体六聚化导致六聚体C1q复合物的形成，这进一步触发下游补体组分并且以膜攻击复合物(MAC)的形成而结束，膜攻击复合物通过细胞膜穿孔和引起的渗透性休克导致细胞死亡。IgM同种型的抗体是多聚体(五聚体和六聚体)，并且特别适合C1q的结合和多聚化。实际上，IgM抗体可以比相应的IgG抗体好30至100倍地固定补体。然而，对于那些使用IgM抗体使细胞表面受体多聚化以影响下游信号传导的适应症，并不总是希望保留这种强大的补体结合能力。例如，IgM抗体可以用于通过接合TNF受体超家族成员如CD40、OX40或GITR而激活T细胞。在每种情况下，多聚化驱动的下游信号传导可用于引起强大的激动剂活性和T细胞增殖。然而，如果IgM抗体的补体固定活性保持完整，则它可能潜在地抵消IgM抗体对这些靶的激动剂活性。因此，本领域需要鉴定可以减少或消除补体结合和所引起的补体依赖性细胞毒性(CDC活性)的IgM重链恒定区突变。已经鉴定了小鼠IgM中增强或降低CDC活性的突变。参见，例如，Arya,S.等，J.Immunol.152:1206-1212(1994)，Wright,J,F.等，J.Biol.Chem.263:11221-11226(1988)，及Wright,J.F.等，J.Biol.Chem.265:10506-10513(1989)。本领域仍然需要鉴定和表征CDC活性改变的经修饰的人IgM抗体。
技术实现思路
本公开提供了一种经修饰的人IgM恒定区，其相对于野生型人IgM恒定区包括一个或多个氨基酸取代，其中至少一个氨基酸取代位于Cμ3结构域中从SEQIDNO:1的T302到SEQIDNO:1的K322范围的位置，并且其中包括所述经修饰的IgM恒定区和对靶抗原有特异性的重链可变区的经修饰的IgM抗体相对于相应的野生型人IgM抗体，表现出对表达所述靶抗原的细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)降低。在某些方面，所述经修饰的人IgM恒定区包括位于SEQIDNO:1的氨基酸T302、C303、T304、V305、T306、H307、T308、D309、L310、P311、S312、P313、L314、K315、Q316、T317、I318、S319、R320、P321和/或K322处的至少一个氨基酸取代。例如，所述经修饰的人IgM恒定区可以包括位于SEQIDNO:1的位置L310处、SEQIDNO:1的位置P311处、SEQIDNO:1的位置P313处、SEQIDNO:1的位置K315处或其任何组合处的至少一个氨基酸取代。在某些方面，至少一个氨基酸取代可以位于SEQIDNO:1的位置L310处，例如，SEQIDNO:1的L310可以被丙氨酸(L310A)、丝氨酸(L310S)、天冬氨酸(L310D)或甘氨酸(L310G)取代。在某些方面，SEQIDNO:1的L310可以被丙氨酸(L310A)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQIDNO:15。在某些方面，SEQIDNO:1的L310可以被天冬氨酸(L310D)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQIDNO:23。在某些方面，至少一个氨基酸取代可以位于SEQIDNO:1的位置P311处，例如，SEQIDNO:1的P311可以被丙氨酸(P311A)、丝氨酸(P311S)或甘氨酸(P311G)取代。在某些方面，SEQIDNO:1的P311可以被丙氨酸(P311A)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQIDNO:2。在某些方面，至少一个氨基酸取代可以位于SEQIDNO:1的位置P313处，例如，SEQIDNO:1的P313可以被丙氨酸(P313A)、丝氨酸(P313S)或甘氨酸(P313G)取代。在某些方面，SEQIDNO:1的P313可以被丝氨酸(P313S)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQIDNO:3。在某些方面，至少一个氨基酸取代可以位于SEQIDNO:1的位置K315处，例如，SEQIDNO:1的K315可以被丙氨酸(K315A)、丝氨酸(K315S)、天冬氨酸(K315D)、谷氨酰胺(K315Q)或甘氨酸(P313G)取代。在某些方面，SEQIDNO:1的K315可以被丙氨酸(K315A)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQIDNO:16。在某些方面，SEQIDNO:1的(K315)可以被天冬氨酸(K315D)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQIDNO:24。在某些方面，SEQIDNO:1的K315可以被谷氨酰胺(K315Q)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQIDNO:25。在某些方面，如本文所提供的经修饰的人IgM恒定区可以包括两个或更多个氨基酸取代。例如，如本文所提供的经修饰的人IgM恒定区可以包括在SEQIDNO:1的位置L310、P311、P313或K315中的两处或更多处的氨基酸取代。在某些方面，如本文所提供的经修饰的人IgM恒定区可以包括在SEQIDNO:1的位置P311和P313处的氨基酸取代。例如，SEQIDNO:1的P311可以被丙氨酸(P311A)、丝氨酸(P311S)或甘氨酸(P311G)取代，并且SEQIDNO:1的P313可以被丙氨酸(P313A)、丝氨酸(P313S)或甘氨酸(P313G)取代。在某些方面，SEQIDNO:1的P311可以被丙氨酸(P311A)取代并且SEQIDNO:1的P313可以被丝氨酸(P313S)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQIDNO:4。在某些方面，如本文所提供的经修饰的人IgM恒定区可以包括在SEQIDNO:1的位置L310和K315处的氨基酸取代。例如，L310可以被丙氨酸(L310A)或丝氨酸(L310S)取代，并且K315可以被丙氨酸(K315A)或丝氨酸(K315S)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQIDNO:17或SEQIDNO:18。在某些方面，如本文所提供的经修饰的人IgM恒定区可以包括在SEQIDNO:1的位置L310和P311处的氨基酸取代。例如，L310可以被丙氨酸(L310A)取代，并且P311可以被丙氨酸(P311A)取代，例如，所述经修饰的IgM恒定区可以包括SEQIDNO:19。在某些方面，如本文所提供的经修饰的人IgM恒定区可以包括在SEQIDNO:1的位置L310和P313处的氨基酸取代。例如，L310可以被丙氨酸(L310A)取代并且P313可以被丝氨酸(P313S)取代，例如，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种经修饰的人IgM恒定区，其相对于野生型人IgM恒定区包含一个或多个氨基酸取代，其中至少一个氨基酸取代位于Cμ3结构域中从SEQ ID NO:1的T302到SEQ ID NO:1的K322范围的位置，并且其中包含所述经修饰的IgM恒定区和对靶抗原有特异性的重链可变区的经修饰的IgM抗体相对于相应的野生型人IgM抗体表现出对表达所述靶抗原的细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)降低。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170407 US 62/483,0871.一种经修饰的人IgM恒定区，其相对于野生型人IgM恒定区包含一个或多个氨基酸取代，其中至少一个氨基酸取代位于Cμ3结构域中从SEQIDNO:1的T302到SEQIDNO:1的K322范围的位置，并且其中包含所述经修饰的IgM恒定区和对靶抗原有特异性的重链可变区的经修饰的IgM抗体相对于相应的野生型人IgM抗体表现出对表达所述靶抗原的细胞的补体依赖性细胞毒性(CDC)降低。


2.如权利要求1所述的经修饰的人IgM恒定区，其中所述至少一个氨基酸取代位于SEQIDNO:1的氨基酸T302、C303、T304、V305、T306、H307、T308、D309、L310、P311、S312、P313、L314、K315、Q316、T317、I318、S319、R320、P321和/或K322处。


3.如权利要求2所述的经修饰的人IgM恒定区，其中所述至少一个氨基酸取代位于SEQIDNO:1的位置L310处、SEQIDNO:1的位置P311处、SEQIDNO:1的位置P313处、SEQIDNO:1的位置K315处或其任何组合处。


4.如权利要求3所述的经修饰的人IgM恒定区，其中所述氨基酸取代位于SEQIDNO:1的位置L310处。


5.如权利要求4所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的L310被丙氨酸(L310A)、丝氨酸(L310S)、天冬氨酸(L310D)或甘氨酸(L310G)取代。


6.如权利要求5所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的L310被丙氨酸(L310A)取代。


7.如权利要求6所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:15。


8.如权利要求5所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的L310被天冬氨酸(L310D)取代。


9.如权利要求8所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:23。


10.如权利要求3所述的经修饰的人IgM恒定区，其中所述氨基酸取代位于SEQIDNO:1的位置P311处。


11.如权利要求10所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的P311被丙氨酸(P311A)、丝氨酸(P311S)或甘氨酸(P311G)取代。


12.如权利要求11所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的P311被丙氨酸(P311A)取代。


13.如权利要求12所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:2。


14.如权利要求3所述的经修饰的人IgM恒定区，其中所述氨基酸取代位于SEQIDNO:1的位置P313处。


15.如权利要求14所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的P313被丙氨酸(P313A)、丝氨酸(P313S)或甘氨酸(P313G)取代。


16.如权利要求15所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的P313被丝氨酸(P313S)取代。


17.如权利要求16所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:3。


18.如权利要求3所述的经修饰的人IgM恒定区，其中所述氨基酸取代位于SEQIDNO:1的位置K315处。


19.如权利要求18所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的K315被丙氨酸(K315A)、丝氨酸(K315S)、天冬氨酸(K315D)、谷氨酰胺(K315Q)或甘氨酸(P313G)取代。


20.如权利要求19所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的K315被丙氨酸(K315A)取代。


21.如权利要求20所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:16。


22.如权利要求19所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的K315被天冬氨酸(K315D)取代。


23.如权利要求22所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:24。


24.如权利要求19所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的K315被谷氨酰胺(K315Q)取代。


25.如权利要求24所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:25。


26.如权利要求3所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含在SEQIDNO:1的位置P311和P313处的氨基酸取代。


27.如权利要求26所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的P311被丙氨酸(P311A)、丝氨酸(P311S)或甘氨酸(P311G)取代，并且其中SEQIDNO:1的P313被丙氨酸(P313A)、丝氨酸(P313S)或甘氨酸(P313G)取代。


28.如权利要求27所述的经修饰的人IgM恒定区，其中SEQIDNO:1的P311被丙氨酸(P311A)取代并且SEQIDNO:1的P313被丝氨酸(P313S)取代。


29.如权利要求28所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:4。


30.如权利要求3所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含在SEQIDNO:1的位置L310和K315处的氨基酸取代，其中L310被丙氨酸(L310A)或丝氨酸(L310S)取代并且K315被丙氨酸(K315A)或丝氨酸(K315S)取代。


31.如权利要求30所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:17或SEQIDNO:18。


32.如权利要求3所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含在SEQIDNO:1的位置L310和P311处的氨基酸取代，其中L310被丙氨酸(L310A)取代并且P311被丙氨酸(P311A)取代。


33.如权利要求32所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:19。


34.如权利要求3所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含在SEQIDNO:1的位置L310和P313处的氨基酸取代，其中L310被丙氨酸(L310A)取代并且P313被丝氨酸(P313S)取代。


35.如权利要求34所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:20。


36.如权利要求3所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含在SEQIDNO:1的位置P311和K315处的氨基酸取代，其中P311被丙氨酸(P311A)取代并且K315被丙氨酸(K315A)取代。


37.如权利要求36所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:21。


38.如权利要求3所述的经修饰的人IgM恒定区，其包含SEQIDNO:1的位置P313和K315处的氨基酸取代，其中P313被丝氨酸(P313S)取代并且K315被丙氨酸(K315A)取代。

【专利技术属性】
技术研发人员：R·巴利加，D·吴，
申请(专利权)人：IGM生物科学股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US