碱性磷酸酶标记物的稀释液及制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液及制备方法和应用，涉及医药试剂技术领域，本发明专利技术提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，包括锌离子、镁离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物、糖类化合物和基础缓冲液。本发明专利技术提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，通过各特定组分及特定组分浓度的相互配合，可提高碱性磷酸酶及其标记物在37℃环境下的热稳定性，从而提高其长期保存的稳定性，延长其有效期。此外，本发明专利技术通过确定碱性磷酸酶标记物的稀释液的特定组分，能够减少不必要的组分，节省成本。

Diluent, preparation and application of alkaline phosphatase marker

The invention provides a diluent of alkaline phosphatase marker, a preparation method and application thereof, relating to the technical field of pharmaceutical reagents. The diluent of alkaline phosphatase marker provided by the invention includes zinc ion, magnesium ion, protein compound, amphiphilic polymer, sugar compound and basic buffer. The diluent of the alkaline phosphatase marker provided by the invention can improve the thermal stability of the alkaline phosphatase and its marker under 37 \u2103 environment, thereby improving its long-term storage stability and extending its validity period through the coordination of each specific component and the concentration of the specific component. In addition, the invention can reduce unnecessary components and save cost by determining specific components of diluent of alkaline phosphatase marker.

【技术实现步骤摘要】
碱性磷酸酶标记物的稀释液及制备方法和应用
本专利技术涉及医药试剂
，尤其是涉及一种碱性磷酸酶标记物的稀释液及制备方法和应用。
技术介绍
碱性磷酸酶(ALP或AKP)是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。这种酶不是单一的酶，而是一组同功酶，其能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。碱性磷酸酶能够催化多种底物显色，因此碱性磷酸酶常作为一种标记酶，在临床免疫体外诊断行业有着广泛的应用。临床免疫体外诊断主要是依赖抗原抗体结合反应，并通过碱性磷酸酶催化底物显色，从而达到定量诊断的目的。因此，结合有碱性磷酸酶的抗原抗体试剂是临床免疫体外诊断试剂盒的重要组分，碱性磷酸酶的稳定性对检测结果的有效性和准确性至关重要。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。本专利技术的第二个目的在于提供上述碱性磷酸酶标记物的稀释液的制备方法，该方法操作简单、成本低廉，且制备得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液能够提高碱性磷酸酶标记物的稳定性。本专利技术的第三个目的在于提供上述碱性磷酸酶标记物的稀释液或应用上述的制备方法制备得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液在提高碱性磷酸酶标记物的稳定性中的应用。本专利技术提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：二价金属离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物、糖类化合物和基础缓冲液；其中，所述二价金属离子包括锌离子和镁离子，所述镁离子的浓度为1-50mM。进一步地，所述锌离子的浓度为0.005-10mM，优选为0.005-1mM，更优选为0.01-0.1mM。进一步地，所述镁离子的浓度为1-10mM，优选为1-5mM。进一步地，所述蛋白质类化合物的质量浓度为0.01％-1％(W/V)，优选为0.02％-0.5％(W/V)，更优选为0.05％-0.1％(W/V)。进一步地，所述蛋白质类化合物包括酪蛋白、白蛋白、明胶或黄原胶中的一种或多种，优选为酪蛋白。进一步地，所述两亲性多聚物包括PEG-PLGA、PA1080、CE510或CE210中的一种或多种，优选为PA1080。进一步地，所述糖类化合物包括蔗糖、葡萄糖、海藻糖或麦芽糖中的一种或多种，优选为蔗糖。进一步地，所述基础缓冲液包括磷酸盐、三(羟甲基)氨基甲烷、2-吗啉乙磺酸、3-吗啉丙磺酸或4-羟乙基哌嗪乙磺酸中的一种或多种，优选为3-吗啉丙磺酸。本专利技术还提供了上述的碱性磷酸酶标记物的稀释液的制备方法，所述方法包括将二价金属离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物和糖类化合物溶解于基础缓冲液中，得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液。另外，本专利技术还提供了上述的碱性磷酸酶标记物的稀释液或应用上述的制备方法制备得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液在提高碱性磷酸酶标记物的稳定性中的应用。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，包括锌离子、镁离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物、糖类化合物和基础缓冲液，该稀释液中的锌离子能够有效保证碱性磷酸酶中锌离子的含量，浓度为1-50mM的镁离子作为碱性磷酸酶的激活剂，能够有效提高碱性磷酸酶的催化效率，蛋白质类化合物作为保护剂能够防止溶液中碱性磷酸酶变性，两亲性多聚物和糖类化合物均能够对碱性磷酸酶起到保护作用、基础缓冲液能够起到维持溶液pH的作用，从而增加碱性磷酸酶的稳定性。本专利技术提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液，通过各特定组分及特定组分浓度的相互配合，可提高碱性磷酸酶及其标记物在37℃环境下的热稳定性，从而提高其长期保存的稳定性，延长其有效期。此外，本专利技术通过确定碱性磷酸酶标记物的稀释液的特定组分，能够减少不必要的组分，节省成本。本专利技术提供的上述碱性磷酸酶标记物的稀释液的制备方法，将特定的组分溶解于基础缓冲液中，即可得到所述碱性磷酸酶标记物的稀释液，该方法操作简单、成本低廉，且制备得到的碱性磷酸酶标记物的稀释液能够提高碱性磷酸酶标记物的稳定性。具体实施方式下面将结合实施方式和实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。根据本专利技术的一个方面，在至少一个实施例中提供了一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，所述稀释液主要由以下组分组成：二价金属离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物、糖类化合物和基础缓冲液；其中，所述二价金属离子包括锌离子和镁离子，所述镁离子的浓度为1-50mM。碱性磷酸酶是一种含锌的金属酶，本专利技术提供的稀释液中的锌离子能够有效保证碱性磷酸酶中锌离子的含量，即能够避免碱性磷酸酶受不可控因素的影响从而失去金属锌。在本专利技术中，锌离子可以来源于含锌的可溶性盐，例如可以为，但不限于氯化锌、硫酸锌、硝酸锌或其他在溶液状态下可以解离出锌离子的盐。浓度为1-50mM的镁离子作为碱性磷酸酶的激活剂，能够有效提高碱性磷酸酶的催化效率，同时提高碱性磷酸酶的刚性。在本专利技术中，镁离子可以来源于含镁的可溶性盐，例如可以为，但不限于氯化镁、硫酸镁、硝酸镁或其他在溶液状态下可以解离出镁离子的盐。在本专利技术中，镁离子的浓度例如可以为，但不限于1mM、5mM、10mM、15mM、20mM、25mM、30mM、35mM、40mM、45mM或50mM。镁离子的浓度低于1mM或高于50mM，均无法起到提高催化效率或提升酶刚性的目的。蛋白质类化合物通过优先吸附作用能够作为保护剂能够防止溶液中碱性磷酸酶变性，例如因分子外吸附变性或因分子间聚合变性。对蛋白质类化合物的种类不做限定，凡是能够起到优先吸附作用的蛋白质类化合物均在本专利技术的保护范围之内。两亲性多聚物和糖类化合物均能够对碱性磷酸酶起到保护作用。其中，两亲性多聚物是指在同一分子链中含有亲水链段和亲油链段的两端亲疏水性不同的高分子聚合物，由于其一端疏水一端亲水的特性，当选择合适分子量的该多聚物时，其疏水端能够插入生物大分子，如蛋白质的内部疏水区域，而亲水端贴合蛋白质的亲水表面，起到支撑蛋白质三维结构的作用，进而起到稳定其生物活性的作用。糖类化合物包括单糖、二糖和多糖，在本专利技术提供的碱性磷酸酶标记物的稀释液中添加糖类化合物，糖类通常具有5个以上的羟基，可以与蛋白质形成氢键以取代水，保证了蛋白质的稳定性；在溶液中它们易结合水分子，发生水合作用，减少了游离水的含量并增加了溶液的粘性，从而减缓晶核的生长过程，使形成的冰晶较细小，以达到保护的目的。基础缓冲液能够起到维持溶液pH的作用，将本专利技术提本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，其特征在于，所述稀释液主要由以下组分组成：/n二价金属离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物、糖类化合物和基础缓冲液；/n其中，所述二价金属离子包括锌离子和镁离子，所述镁离子的浓度为1-50mM。/n

【技术特征摘要】
1.一种碱性磷酸酶标记物的稀释液，其特征在于，所述稀释液主要由以下组分组成：
二价金属离子、蛋白质类化合物、两亲性多聚物、糖类化合物和基础缓冲液；
其中，所述二价金属离子包括锌离子和镁离子，所述镁离子的浓度为1-50mM。


2.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶标记物的稀释液，其特征在于，所述锌离子的浓度为0.005-10mM，优选为0.005-1mM，更优选为0.01-0.1mM。


3.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶标记物的稀释液，其特征在于，所述镁离子的浓度为1-10mM，优选为1-5mM。


4.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶标记物的稀释液，其特征在于，所述蛋白质类化合物的质量浓度为0.01％-1％(W/V)，优选为0.02％-0.5％(W/V)，更优选为0.05％-0.1％(W/V)。


5.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶标记物的稀释液，其特征在于，所述蛋白质类化合物包括酪蛋白、白蛋白、明胶或黄原胶中的一种或多种，优选为酪蛋白。


6.根据权利要求1所述的碱性磷酸酶标记物的稀释液，其特征在于，所述两亲性多聚物包括PEG-PLGA、PA1080、CE510或CE210中...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾敏霞，江冬青，邓京，易莹，张晓红，
申请(专利权)人：珠海丽珠试剂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44