碱性磷酸酶标记信号放大系统技术方案

本发明专利技术公开一种碱性磷酸酶标记信号放大系统，以烷烃，烯烃或炔烃醇磷酸酯为底物，在碱性磷酸酶作用下产生游离的磷酸及相应的醇化合物，醇化合物在氧气的参与下经醇类氧化酶作用生产醛或酮化合物及过氧化氢（H2O2），生成的醛和酮化合物在NADH存在下经醇类脱氢酶作用还原成醇化合物，生成的醇化合物继续参与循环反应。循环生成的大量H2O2配合不同底物经过氧化物酶催化后可通过比色法、电化学法、化学发光法或荧光法进行检测。因此，本系统可灵敏的对单独的碱性磷酸酶或与抗原，半抗原，抗体，蛋白质，核酸及寡聚核苷酸相连接的碱性磷酸酶进行检测，起到放大信号作用。所述的底物结构式如下：

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种超灵敏的信号倍增系统，具体地说，涉及一种新的碱性磷酸酶标记信号放大系统。
技术介绍
酶作为灵敏的标记物已被广泛用于各种生化检测系统，如免疫测定(ELISA)，核酸测定(PCR和基因测序)等，其酶活力大小可用在一定条件下催化某一化学反应的速度来表示，催化反应速度愈大，活力愈高，反之则活力愈低，因此，测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。酶促反应速度常用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示，单独一个酶分子可以催化大量底物(如一分子高纯度酶在Imin内可催化10000-1000000分子的底物)，因而通过对产物生成及底物或共反应物消耗来反应的酶活力，检测的不是酶本身，而是大量生成的底物或消耗的产物，从而提供了高度放大的信号。目前利用工具酶结合其他分析检测手段的信号放大技术因其具有特异、灵敏、简便、快速等特点，已在生物医学研究领域及临床疾病的诊疗中得到广泛应用。相较于放射免疫(RIA)技术，酶联技术具有试剂半衰期长，对环境污染小，试验废物易于处理等优点，但其测定敏感性仍比不上RIA技术，在一些方面尤其在微量物质测定方面还不能替代RIA。但由于放射性物质对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种碱性磷酸酶标记信号放大系统，其特征在于该系统包括 (1)碱性磷酸酶底物，其结构通式如下式(I)所示2.根据权利要求I所述的碱性磷酸酶标记信号放大系统，其特征在于式(I)中所述的烷基，烯烃基和炔烃基为Cl-IO的烷基、C2-10的烯烃基或炔烃基；或Cl-IO的烷基、C2-10的烯烃基或炔烃基的取代基。3.根据权利要求2所述的碱性磷酸酶标记信号放大系统，其特征在于所述的Cl-IO的烷基、C2-10的烯烃基或炔烃基的取代基包括卤代，=0，=N-CN, =N-OR, =NR, OR, NR2,SR, SO2R, SO2NR2, NRSO2R, NRCONR2, NRCOOR, NRCOR, CN, C00R, CONR2, 00CR, COR 和 NO2，其中每个R可以是H，C1-C8烷基，C2-C8杂烷，C3-C8环烷，C4-C10杂环烷，C1-C8酰基，C2-C8杂酰基，C2-C8烯，C2-C8杂卤代烯烃，C2-C8炔，C2-C8杂炔或C5-C10杂环；其中R也可被卤代，=0，=N-CN, =N-0R’，=NR，，OR，，NR，2，SR，，SO2R，，SO2NRj 2，NR，SO2R，，NR，C0NR，2，NR，COOR，，NR，COR，，CN, C00R，，C0NR，2, 00CR，，COR，和 NO2 取代，其中每个 R’ 可以是 H，C1-C8 烷基，C2-C8杂烷，C3-C8环烷，C4-C10杂环烷，C1-C8酰基，C2-C8杂酰基，C2-C8烯，C2-C8杂卤代烯烃，C2-C8炔，C2-C8杂炔或C5-C10杂环取代，每个取代又可被适宜的取代基取代；如果取代基R或R'在相同或相邻的原子上，两者可形成5-8碳的环状化合物，并且环上可以包含一个杂原子。4.根据权利要求I所述的碱性磷酸酶标记信号放大系统，其特征在于，所述的碱性磷酸酶标记信号放大组合物，包括了碱性磷酸酶底物，具体还包括以下几项 (1)醇类氧化酶，能分别将碱性磷酸酶水解碱性磷酸酶底物生成的伯醇或叔醇氧化成相应的醛或酮化合物； (2)醇类脱氢酶，能将生成的醛和酮化合物转化为醇化合物； (3)参与还原反应的共反应物——NADH，其与醇类脱氢酶共同作用能将生成的醛和酮化物转化为醇化物； (4)用于检测副产物H2O2的试剂。5.根据权利要求4所述的碱性磷酸酶标记信号放大...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹炳德，邹继华，沃燕波，袁艺天，
申请(专利权)人：宁波美康生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：