一种重组融合多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种重组融合多肽及其制备方法和其应用。一种重组融合多肽，所述的重组融合多肽由以下通式表述：X‑linker1‑Y；Y‑linker1‑X；X‑linker2‑Y；Y‑linker2‑X；其中X为：PRCWRGEGGGGIVRRADRAAVPGGGGRGD；Y为：Acetyl‑SDKPGGGGTSLDASIIWAMMQNGGGGLSKL。本发明专利技术的重组融合多肽可以治疗各种纤维化疾病及病状，治疗用途包括抗肺纤维化、肝纤维化、皮肤纤维化、肾纤维化和心肌纤维化以及肺部组织病变。

A recombinant fusion peptide and its application

The invention discloses a recombinant fusion polypeptide, a preparation method and application thereof. A recombinant fusion peptide, which is expressed by the following general formula: X \u2011 linker1 \u2011 y; y \u2011 linker1 \u2011 X; X \u2011 linker2 \u2011 y; y \u2011 linker2 \u2011 X; wherein X is: prcwrgeggiggvrraavpggggrgd; y is: acetyl \u2011 sdkpggggtsldasiiwammqggglskl. The recombinant fusion polypeptide of the invention can treat various fibrotic diseases and diseases, and the therapeutic uses include anti pulmonary fibrosis, liver fibrosis, skin fibrosis, renal fibrosis, myocardial fibrosis and lung tissue lesions.

【技术实现步骤摘要】
一种重组融合多肽及其应用
本专利技术属于生物药物领域，更具体涉及一种重组融合多肽及其应用。
技术介绍
组织纤维化(fibrosis)是一种器官组织实质细胞减少，纤维结缔组织增多性疾病，持续发展可致器官结构破坏和功能减退，最终衰竭，严重威胁患者健康。在世界范围内，组织器官纤维化是许多疾病致残、致死的主要原因。在组织纤维化的发生过程中，成纤维母细胞和肌成纤维细胞是组织纤维化的关键效应细胞，这些效应细胞可以大量释放构成ECM的胶原成分，诸如Ⅰ型和Ⅲ型胶原。多种细胞因子也参与纤维化的进程，其中最关键的是转化生长因子-β(TGF-β)。TGF-β是调节细胞增殖、分化的多功能细胞生长因子，可以通过直接刺激原位成纤维细胞的活化或通过内皮间质(endothelial-mesenchymaltransition，EnMT)、上皮间质化(epithelial-mesenchymaltransition，EMT)过程来刺激肌成纤维细胞的大量增殖和ECM的过度合成。TGF-β由于损伤持续被活化时，会交叉激活MAPK、EGF、Wnt/β-catenin信号，导致纤维化的发展。除了TGF-β外，对血小板衍生因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、结缔组织生长因子(CTGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管新生相关细胞因子、整合素、金属基质蛋白酶(MMP)及其抑制剂(TIMP)、肾素血管紧张素相关蛋白、利钠肽等的调节也将影响纤维化的发生。本专利技术设计的重组融合多肽，具有多个靶点，具有金属基质蛋白酶抑制剂和抑制血管生成和抑制整合素等的功效，MMP抑制剂从调节ECM和肺部损伤的关键细胞因子MMP/TIMP着手，血管生成抑制剂可以抑制细胞因子的释放如TGF-β1、VEGF等，整合素可以与TGF-β结合，促进TGF-β的活化，释放细胞因子TGF-β1，抑制整合素可以抑制TGF-β1的释放，可以抑制成纤维细胞的增殖和活化，其可以从病理学上的主要发病机制作用于肺纤维化的治疗。多肽X和Y是针对不同靶点的多肽，其通过Linker链接并经重组表达后，具有多个靶点活性，起到了更好的治疗作用。并且可减少药物给药剂量和频率，改善病人对治疗的依从性和耐受性。1.肺纤维化肺纤维化(Pulmonaryfibrosis，PF)是由多种因素引起的严重肺间质疾病，以肺成纤维细胞灶形成和ECM过度积聚为特征，鉴于肺组织对损伤后产生的病理反应及疾病特征相似，因此在临床上将肺纤维化统称为间质性肺病(InterstitiallungDisease，ILD)。ILD是以弥漫性肺实质、肺泡炎症和间质纤维化为病理基本病变。部分病因明确，而部分病因不明，若病因不明确则称其为特发性肺纤维化(Idiopathicpulmonaryfibrosis，IPF)。特发性肺纤维化在肺纤维化中发病率最高，多发于老年男性，且中位生存率为3年，为目前研究的重点。肺纤维化是肺组织过度修复的过程，Wilson指出，当“损伤-炎症-修复”链中任一或多个环节出现问题都会导致纤维化的发生。目前，可将肺纤维化的发生归结于以下三个阶段：(1)损伤阶段：肺泡上皮细胞受到气体、粉尘、感染(细菌或病毒)、药物、放射性损伤等等因素的刺激而受损；(2)效应阶段：损伤会促使肺泡上皮细胞凋亡，产生氧化应激反应，损伤部位募集炎症细胞(巨噬细胞、T/B淋巴细胞、中性粒细胞等等)和大量分泌的转化生长因子-β(TGF-β)会刺激成纤维细胞的增殖和分化，促使肺成纤维细胞灶形成；(3)纤维化阶段：成纤维细胞灶的形成并促使细胞外基质(ECM)的过度分泌，致使肺组织实质细胞逐步被间质细胞取代，肺组织失去弹性，硬度增加，最终使肺组织失去生理功能，致使患者因纤维化造成的呼吸衰竭而死亡。多种细胞参与了纤维化的发生，如肺上皮细胞、内皮细胞、肺炎症细胞(主要为巨噬细胞)和肺间质细胞(成纤维细胞、肌纤维母细胞)，其中肺间质细胞为肺纤维化发生的关键效应细胞。同时，细胞分泌的细胞因子诸如转化生长因子-β(TGF-β)、血小板衍生因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、结缔组织生长因子(CTGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、整合素、金属基质蛋白酶(MMP)及其抑制剂(TIMP)等等也对肺纤维化的发生影响颇深。细胞因子中最关键的是TGF-β，TGF-β是可以调节细胞增殖、分化的多功能细胞生长因子。可以通过直接刺激原位成纤维细胞的活化或通过内皮间质化(EnMT)、上皮间质化(EMT)过程来刺激肌成纤维细胞的大量增殖和ECM的过度积聚。当TGF-β由于损伤持续被活化时，会交叉激活MAPK、EGF、Wnt/β-catenin信号，导致纤维化的发展。PDGF、bFGF、VEGF作为生长因子均可促进肺成纤维细胞的增殖和分化，对肺纤维化的进展产生影响。MMP/TIMP为ECM的主要调节剂，两者的含量在ECM的平衡中起到关键作用。这些细胞因子都或多或少对肺成纤维细胞的增殖和活化及胶原的形成产生影响，因此合理调控细胞因子的表达将有助于肺纤维化的治疗。本专利技术设计的重组融合多肽，具有多重靶点，具有金属基质蛋白酶抑制剂和抑制血管生成和抑制整合素等的功效，MMP抑制剂从调节ECM和肺部损伤的关键细胞因子MMP/TIMP着手，血管生成抑制剂可以抑制细胞因子的释放如TGF-β1、VGFE等，整合素可以与TGF-β结合，促进TGF-β的活化，释放细胞因子TGF-β1，抑制整合素可以抑制TGF-β1的释放，可以抑制成纤维细胞的增殖和活化，其可以从病理学上的主要发病机制作用于肺纤维化的治疗。2.肝纤维化肝纤维化(liverfibrosis)是多种原因引起的慢性肝损害所致的病理改变，表现为肝内细胞外间质成分过度异常地沉积，并影响肝脏的功能，是慢性肝病发展到肝硬化必经之阶段。能够引起几乎各种慢性肝病的因素均可引起肝纤维化，其病因大致可分为感染性、先天性代谢缺陷、化学毒物性、自身免疫性肝病等。肝脏内细胞外基质的过度沉积是肝纤维的特征性变。目前认为，肝星形细胞(HSCs)的激活是肝纤维化发生的中心环节，但肝纤维化的发生和发展机制十分复杂，目前研究主要围绕肝脏星状细胞的激活和转化为肌成纤维细胞和成纤维细胞，其可能途径是激活转化生长因子-β(TGF-β)信号转导通路、血管衍生生长因子(PDGF)受体介导的信号转导通路、TNF-α介导的信号转导通路及前列腺素内氧化还原酶(COX-2)、弥漫性细胞外基质(ECM)、血管新生及氧化应激介导的肝纤维化等。肝纤维化是各种慢性肝炎发展为肝硬化必经的病理阶段，是肝脏自我损伤修复的表现。据卫生组织报道，我国具有乙型肝炎病毒感染人群2000万例，此类患者绝大多数存在肝纤维化的发生，因此治疗肝纤维化已经成为迫切需要解决的问题。3.肾纤维化肾纤维化(包括肾小球纤维化、肾间质纤维化、肾血管纤维化)是几乎所有肾脏疾病进展到终末期肾功能衰竭的共同通路，是各种慢性肾脏疾病主要的病理学表现之一，是各种肾小球、血管和小管间质本身疾病的最后结局。有研究表明无论何种病因的肾脏病，肾本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组融合多肽，所述的重组融合多肽含有多肽X和/或多肽Y，由以下通式表述：/nX-linker1-Y；Y-linker1-X； X-linker2-Y；Y-linker2-X；/n其中X为：PRCWRGEGGGGIVRRADRAAVPGGGGRGD；/nY为：SDKPGGGGTSLDASIIWAMMQNGGGGLSKL。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组融合多肽，所述的重组融合多肽含有多肽X和/或多肽Y，由以下通式表述：
X-linker1-Y；Y-linker1-X；X-linker2-Y；Y-linker2-X；
其中X为：PRCWRGEGGGGIVRRADRAAVPGGGGRGD；
Y为：SDKPGGGGTSLDASIIWAMMQNGGGGLSKL。


2.根据权利要求1所述的重组融合多肽，其特征在于所述的linker1为：GGGGSGGGGSGGGGS；linker2为：AEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKK。


3.根据权利要求1所述的重组融合多肽，其特征在于所述的融合多肽的氨基酸序列为如下任意一条：
PRCWRGEGGGGIVRRADRAAVPGGGGRGDGGGGSGGGGSGGGGSSDKPGGGGTSLDASIIWAMMQNGGGGLSKL；
SDKPGGGGTSLDASIIWAMMQNGGGGLSKLGGGGSGGGGSGGGGSPRCWRGEGGGGIVRRADRAAVPGGGGRGD；
PRCWRGEGGGGIVRRADRAAVPGGGGRGDAEAAAKEAAAKEAAAKEAAAKKSDKPGGGGTSLDASIIWAMMQNGGGGLSKL；
SDKPGGGGTSLDAS...

【专利技术属性】
技术研发人员：康志安，
申请(专利权)人：南京安吉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32