本发明专利技术涉及家禽育种领域，涉及一种金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记与应用。所述分子标记位于鸡GAS6基因第27463bp处，记为g.C27463T。本发明专利技术还公开了上述分子标记在金茅黑鸡选育中的应用，方法简单快捷，且不受外界环境的影响，为金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子育种提供了参考。
A molecular marker related to inosinic acid and intramuscular fat content in Jinmao black chicken and its application
The invention relates to the field of poultry breeding, and relates to a molecular marker and application related to inosine acid and intramuscular fat content of Jinmao black chicken. The molecular marker is located at 27463bp of Gas6 gene in chicken, which is recorded as g.c27463t. The invention also discloses the application of the above molecular markers in the breeding of Jinmao black chicken, the method is simple and fast, and is not affected by the external environment, which provides a reference for molecular breeding related to inosine acid and intramuscular fat content of Jinmao black chicken.
【技术实现步骤摘要】
一种金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记与应用
本专利技术涉及家禽育种领域，具体涉及一种基于GAS6(即生长停滞特异基因6)基因的与金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记及应用。
技术介绍
目前，鸡肉已成为我国仅次于猪肉的第二大肉类消费品。肉鸡经过遗传改良后，体增重、饲料转化率、生长速度和胸肌重显著增加,这一选择过程生产出了现代商业鸡品系，即具有高生长速度、胸肉产量高等特点的肉鸡品系。然而，对生长速度的过度追求，导致肉鸡出现了腹脂过度沉积而肌内脂肪脂肪减少的现象。研究表明，肌苷酸和肌内脂肪含量与鸡肉的风味、嫩度密切相关，影响鸡肉品质。目前，增加肌苷酸和肌内脂肪含量已经成为肉鸡育种的主要目标之一。肉质性状为复杂数量性状，受诸多基因的控制，传统育种方法很难对肉质性状取得较大的遗传进展。SNPs作为第三代分子标记，在动物育种中应用前景广发，寻找并鉴定与鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的SNPs，并利用其进行标记辅助选择，能够加速鸡肌苷酸和肌内脂肪含量性状的遗传改良速度。生长停滞特异基因产物6(growtharrest-specificgene6,GAS6)，最先由Nagata等在无血清培养基培养的NIH3T3细胞中发现并克隆，该基因编码的蛋白是由678个氨基酸构成的构架蛋白，是受体酪氨酸激酶家族中TAM受体的配体，具有广泛的生物学效应。研究表明，GAS6基因在鸡脂肪前体细胞分化过程中差异表达，与鸡脂肪沉积密切相关。然而目前仍缺少利用GAS6基因的分子标记改良金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量的技术。<br>
技术实现思路
为了克服上述缺陷，本专利技术要解决的技术问题是提供一种金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记与应用，其利用GAS6基因分子标记改良金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量。为解决上述问题，本专利技术公开了一种基于GAS6基因的与金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记，所述分子标记位于鸡GAS6基因第27463bp处，记为g.C27463T。鸡GAS6基因第27463bp处的基因型为TT或CC或CT。本专利技术还公开了一种用于检测上述与金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记的引物组，所述引物组包括一组GAS6-P1引物对，GAS6-P1引物对的核酸序列为：上游引物F：5’-GACACCTGTGCGGTCAGACT-3’，如SEQIDNO.1所示；下游引物R：5’-TCACTGTCTGCCACATGCCA-3’，如SEQIDNO.2所示。本专利技术还公开了一种检测上述与金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记的方法，所述方法包括：以鸡基因组DNA为模板，利用上述的特异性引物组进行PCR扩增，获得PCR产物，PCR产物经SSCP分析后分型。PCR扩增体系由鸡DNA模板、上游引物F、下游引物R、ddH2O、Taq聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液组成。可选的，PCR扩增体系为：2×TaqMasterMixforPage10μL，DNA模板1μL，上游引物0.8μL，下游引物0.8μL，ddH2O7.4μL；TaqMasterMixforPage包括Taq聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液。可选的，PCR扩增程序为95℃预变性5min；95℃变性30s，61℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸10min,4℃保存。SSCP反应程序为：取PCR产物和上样缓冲液混合，先变性，再迅速冰浴，使DNA处于单链状态；取变性好的PCR产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，再银染显色。更具体的，SSCP反应程序为：取2.5μLPCR产物和7.5μL上样缓冲液(98％去离子甲酰胺、0.025％溴酚蓝、0.025％二甲苯FF，10mmol/LEDTA(pH8.0)、2％甘油)混合，先98℃变性10min，再迅速冰浴10min，使DNA处于单链状态。取变性好的PCR产物8μL进行非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE30％，Acr∶Bis＝29∶1)电泳，220V电压预电泳10min，120V电压电泳10-12h后，银染显色。本专利技术还公开了一种上述的与金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量的分子标记在鸡育种或金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量改良中的应用。与现有技术相比，本专利技术可以获得以下技术效果：GAS6基因在第27463bp处存在一处突变位点，该处突变位点与鸡肌苷酸和肌内脂肪含量显著相关，且容易检测。因此，本专利技术提供了一种基于GAS6基因与鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记，并提供了这种分子标记的检测方法及其在鸡肌苷酸和肌内脂肪含量改良中的应用，为鸡肉质性状的分子标记辅助育种提供了一种新的方法。附图说明图1是本专利技术鸡GAS6基因第27463bp处突变聚丙烯酰胺凝胶电泳图，即GAS6基因P1产物(即GAS6-P1引物组扩增得到的PCR产物)的PCR-SSCP电泳图；图2是本专利技术鸡GAS6基因第27463bp处突变测序图，即GAS6基因CC、TT和CT的序列比较；图3是本专利技术GAS6-P1引物组扩增得到的核苷酸片段，下划线是引物序列，方框处是突变位点。具体实施方式以下通过具体实例来详细说明本专利技术的具体实施方式。收集江苏三德利牧业发展有限公司同一批次的120只112日龄金茅黑鸡，采集血样，提取基因组DNA，溶于TE，NANODROP1000核酸浓度测定仪测定浓度和纯度后-20℃保存备用。根据GenBank中已发表的GAS6基因序列(登录号为：NC_006088.5)，采用PrimerPremier5.0设计1对引物。扩增产物大小为211bp。引物序列如下：GAS6-P1：上游引物：5’-GACACCTGTGCGGTCAGACT-3’(SEQIDNO：1)下游引物：5’-TCACTGTCTGCCACATGCCA-3’(SEQIDNO：2)利用上述引物组，以鸡基因组DNA为模板进行PCR扩增，PCR反应体系为：2×MasterMixforPage10μL，上游引物0.8μL，下游引物0.8μL，DNA模板μL，ddH2O7.4μL。PCR反应条件：95℃预变性5min；95℃变性30s，61℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；72℃延伸7min，4℃保存。取2.5μLPCR产物和7.5μL上样缓冲液(98％去离子甲酰胺、0.025％溴酚蓝、0.025％二甲苯FF，10mmol/LEDTA(pH8.0)、2％甘油)混合，先98℃变性10min，再迅速冰浴10min，使DNA处于单链状态。取变性好的PCR产物8μL进行非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE30％，Acr∶Bis＝29∶1)电泳，220V电压预电泳10min，120V电压电泳10-12h后，银染显色，拍照发现存在三种不同带型，分别命名为CC、TT和CT基因型(图1)。每种基因型各取3个样本交由上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。测序结果与GAS6基因原序列(GenBank本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于鸡GAS6基因的与金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于鸡GAS6基因第27463bp处，记为g.C27463T。/n
【技术特征摘要】
1.一种基于鸡GAS6基因的与金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记，其特征在于，所述分子标记位于鸡GAS6基因第27463bp处，记为g.C27463T。
2.根据权利要求1所述的一种基于鸡GAS6基因的与金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记，其特征在于，鸡GAS6基因第27463bp处的基因型为TT或CC或CT。
3.用于检测权利要求1或2所述的与金茅黑鸡肌苷酸和肌内脂肪含量相关的分子标记的引物组，其特征在于，所述引物组包括一组GAS6-P1引物对，
GAS6-P1引物对的核酸序列为：
上游引物F：5’-GACACCTGTGCGGTCAGACT-3’，如SEQIDNO.1所示；
下游引物R：5’-TCACTGTCTGCCACATGCCA-3’，如SEQIDNO.2所示。
4.含有权利要求3...
【专利技术属性】
技术研发人员：张涛，陈兰，王金玉，谢凯舟，张跟喜，戴国俊，巩用双，张闪闪，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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