铜蓝蛋白联合多奈哌齐的应用制造技术

本发明专利技术属于生物药品应用领域，铜蓝蛋白联合多奈哌齐，在制备预防或/和改善或/和治疗阿尔茨海默症的药物中的应用；或/和在制备益智类补充剂或药物方面的应用。本发明专利技术中血浆中参与调节体内金属离子平衡的铜蓝蛋白能提高多奈哌齐治疗动物痴呆模型的自理能力以及学习和记忆能力，可以起到增强记忆力、提高认知功能的作用。发明专利技术人发现铜蓝蛋白联合多奈哌齐能够显著改善痴呆动物模型的学习记忆能力。筑巢实验结果表明铜蓝蛋白联合多奈哌齐能够提高痴呆动物模型的筑巢能力，提示痴呆动物的自理能力提高。水迷宫实验结果表明铜蓝蛋白能够提高痴呆动物模型的学习记忆能力。

Application of ceruloplasmin combined with donepezil

The invention belongs to the field of application of biological medicine, the application of ceruloplasmin in combination with donepezil in the preparation of drugs for prevention or / and improvement or / and treatment of Alzheimer's disease; or / and the application in the preparation of tonics or drugs. The ceruloplasmin in the plasma of the invention, which is involved in regulating the metal ion balance in the body, can improve the self-care ability, learning and memory ability of donepezil in the treatment of animal dementia model, and can play the role of enhancing memory and cognitive function. The inventors found that ceruloplasmin combined with donepezil could significantly improve the learning and memory ability of dementia animal models. The results of nesting experiment showed that ceruloplasmin combined with donepezil could improve the nesting ability of dementia animal model, suggesting that the ability of self-care of dementia animal was improved. The results of water maze experiment show that ceruloplasmin can improve the learning and memory ability of dementia animal model.

【技术实现步骤摘要】
铜蓝蛋白联合多奈哌齐的应用
本专利技术属于生物药品应用领域，铜蓝蛋白联合多奈哌齐，在制备预防或/和改善或/和治疗阿尔茨海默症的药物中的应用；或/和在制备益智类补充剂或药物方面的应用。
技术介绍
阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)又称老年性痴呆，是一种由神经元丢失导致的脑中枢神经系统退行性疾病，在老年人群中该病的发病率约为4％-8％。1906年，德国神经病理学家阿尔茨海默首次报告了一例具有进行性记忆力下降表现的51岁女性患者。1910年，以命名和分类大脑疾病著称的精神病学家EmilKraepelin提议将此病命名为阿尔茨海默病。该病常见的临床表现为进行性记忆力和认知力减退、语言障碍、精神运动异常等，对患者的正常生活造成严重影响，同时也给家庭和社会带来沉重的负担。2010年，WHO报道全球痴呆患者为3500万，中国为540万。自2010年起，全世界痴呆总人口每20年将翻一倍。《世界阿尔茨海默病2015报告》指出，到2050年，全球AD的患病人数将增加至1.3亿。AD的发病机制复杂，包括淀粉样蛋白沉淀，脑内金属离子动态失衡，线粒体功能障碍等引起的神经递质减少以及神经元凋亡，涉及多种分子信号通路。多奈哌齐为临床上治疗AD主要药物，通过抑制胆碱酯酶增加乙酰胆碱水平而延缓AD中早期病状进展和改善早期AD临床病状为主，迄今尚无逆转或阻止病情进展的有效药物。近年来有研究把来自于年轻小鼠的血浆重复的注射进老年小鼠，发现血浆可以通过调节参与海马认知的经典分子通路而提高记忆功能。而血浆组成极其复杂，包括蛋白质、脂类、无机盐、糖、氨基酸、代谢废物以及大量的水。因此，目前的科研和实践中，需要找出血浆中具有改善学习记忆能力以及治疗老年性痴呆的成分，并与一线药物联用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种铜蓝蛋白与多奈哌齐的联合应用。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：铜蓝蛋白联合多奈哌齐，在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆和/或认知功能障碍的药物中的应用；或/和在制备益智类补充剂或药物方面的应用。在优选的实施方式中，所述铜蓝蛋白来自哺乳动物。在优选的实施方式中，所述铜蓝蛋白来自健康人。在优选的实施方式中，所述铜蓝蛋白的制备原料包括健康人血清。在优选的实施方式中，所述痴呆和/或认知功能障碍为阿尔茨海默症或轻度认知障碍。一种用于预防或/和改善或/和治疗痴呆和/或认知功能障碍的联合用药物，包括：预防或/和改善或/和治疗有效量的铜蓝蛋白、以及预防或/和改善或/和治疗有效量的多奈哌齐。在优选的实施方式中，所述铜蓝蛋白和所述多奈哌齐分别使用；优选地，所述铜蓝蛋白通过静脉注射使用，所述多奈哌齐通过口服使用。相比于现有技术，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术中血浆中参与调节体内金属离子平衡的铜蓝蛋白能提高多奈哌齐治疗动物痴呆模型的自理能力以及学习和记忆能力，可以起到增强记忆力、提高认知功能的作用。专利技术人发现铜蓝蛋白联合多奈哌齐能够显著改善痴呆动物模型的学习记忆能力。筑巢实验结果表明铜蓝蛋白联合多奈哌齐能够提高痴呆动物模型的筑巢能力，提示痴呆动物的自理能力提高。水迷宫实验结果表明铜蓝蛋白能够提高痴呆动物模型的学习记忆能力。附图说明图1：检测例1中筑巢行为学实验检测铜蓝蛋白与多奈哌齐联合使用(铜蓝蛋白活性为1.02unit/mg)处理小鼠前后筑巢行为得分。(***p<0.0001vs.WT_PBS+PBS,#p<0.05vs.TG_PBS+PBS,##p<0.01vs.TG_PBS+PBS,###p<0.0001vs.TG_PBS+PBS)图2：检测例1中水迷宫行为学实验检测铜蓝蛋白与多奈哌齐联合使用(铜蓝蛋白活性为1.02unit/mg)处理小鼠的记忆改善情况。其中，A部分为小鼠在隐藏平台训练阶段上台时间，B部分为小鼠在测试阶段在目标象限所处时间百分比。(***p<0.0001vs.WT_PBS+PBS,#p<0.05vs.TG_PBS+PBS,###p<0.001vs.TG_PBS+PBS)图3：实施例1中实验时间轴示意图。具体实施方式为了更好地对本专利技术的技术特征和效果进行说明，下面采用具体实施方式对本专利技术进行详细说明，但本专利技术并不限于此。本专利技术提供铜蓝蛋白联合多奈哌齐，在制备预防或/和改善或/和治疗阿尔茨海默症的药物中的应用；或/和铜蓝蛋白在制备益智类补充剂或药物方面的应用。所述铜蓝蛋白的制备原料包括健康人血清。本专利技术人从动物试验水平检测了铜蓝蛋白和多奈哌齐联用对5×FAD转基因(APP)小鼠的记忆力改善情况，结果表明，铜蓝蛋白明显提高多奈哌齐对痴呆模型小鼠的记忆力的改善作用。本专利技术所用铜蓝蛋白由健康人血清为原料，根据论文《铜蓝蛋白的分离纯化及其性质与功能基团研究》(褚波，2006)中描述的方法所得。所得铜蓝蛋白活性为1.02unit/mg。下面通过实施例对本专利技术铜蓝蛋白的制备、鉴定和应用进行说明。以下实施例中涉及的分子生物学操作如未注明具体试验条件和方法，请参照SambrookJ等主编，科学出版社，2017，分子克隆实验指南(第四版)或相应产品的说明书。以下实施例中使用的原代海马细胞是按照如下参考文献培养的：Guo,W.,Y.Ji,etal.(2014)."NeuronalactivityaltersBDNF-TrkBsignalingkineticsanddownstreamfunctions."JCellSci127(Pt10):2249-2260。实施例1本实施例的铜蓝蛋白是参考上述论文第17-32页的方法得到，将3.1.5.1的猪血清替换为健康人的血清，得到透析液；再将透析液经过DEAE-Sepharose(方法如3.1.5.2所述)、羟基磷灰石吸附层析(方法如3.1.5.3所述)、Superdex-200凝胶过滤层析(方法如3.1.5.4所述)后获得的比活性最高的组分作为铜蓝蛋白纯品。再将该铜蓝蛋白纯品采用过滤除菌，滤膜为0.22μm低蛋白吸附的PVDF膜，压力为5bar，得到灭菌后的铜蓝蛋白。本实施例是将灭菌后的铜蓝蛋白(CP溶液)与多奈哌齐(DPZ)的联合应用对5xFAD模型鼠筑巢能力和学习记忆能力的检测。本实施例分组和给药方式如下：其中，组1-3的PBS注射量为均5ml/kg。本实施例的时间轴如图3所示，筑巢实验一共进行2次，第一次是实验开始之前，其作用主要是设置基线，观察给药前后是否有改善，第二次是实验第23-24天，每次每组均进行该实验；实验第25-30天进行水迷宫实验。检测1：筑巢行为学实验检测：(1)厨房纸剪成细的长条后揉皱，空笼中加入1cm左右高的木屑垫料，在垫料上均匀撒入3-4g剪碎的厨房纸，放入一只5×FAD转基因(APP)小鼠或野生型(WT)对照小鼠。(2)48小时后观本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.铜蓝蛋白联合多奈哌齐，在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆和/或认知功能障碍的药物中的应用；或/和在制备益智类补充剂或药物方面的应用。/n

【技术特征摘要】
1.铜蓝蛋白联合多奈哌齐，在制备预防或/和改善或/和治疗痴呆和/或认知功能障碍的药物中的应用；或/和在制备益智类补充剂或药物方面的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述铜蓝蛋白来自哺乳动物。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述铜蓝蛋白来自健康人。


4.根据权利要求1所述应用，其特征在于：所述铜蓝蛋白的制备原料包括健康人血清。


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【专利技术属性】
技术研发人员：栗琳，崔雅轩，谢蓝，张丽丽，娄玉霞，管书丽，石浩威，
申请(专利权)人：北京豪思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11