用于制备治疗牙齿损伤的组合物的方法技术

本发明专利技术涉及一种用于制备治疗牙齿损伤的组合物的方法，所述组合物包含能够在一定pH经历自组装的肽。本发明专利技术的组合物非常适用于医疗领域，特别用于使牙齿损伤再矿化，例如，表层下龋齿损伤。

Method for preparing a composition for treating tooth injury

The invention relates to a method for preparing a composition for treating tooth injury, which comprises a peptide capable of undergoing self-assembly at a certain pH. The composition of the invention is very suitable for the medical field, especially for the remineralization of tooth damage, for example, under surface caries damage.

【技术实现步骤摘要】
用于制备治疗牙齿损伤的组合物的方法专利
本申请是申请日为2013年8月14日，申请号为201380043210.2，专利技术名称为“用于制备治疗牙齿损伤的组合物的方法”的专利技术专利的分案申请。本专利技术涉及一种用于制备治疗牙齿损伤的组合物的方法，所述组合物包含能够在一定pH经历自组装的肽。本专利技术的组合物非常适用于医疗领域，特别用于使牙齿损伤例如表层下龋齿损伤再矿化。专利技术背景至今，牙齿再矿化主要通过钙和磷酸盐离子递送到牙齿损伤部位或腔而实现。钙和磷酸盐离子通常包含在牙膏中，牙膏也包含例如磨料、氟化物、表面活性剂和其它再矿化剂。钙和磷酸盐离子可以各种结晶形式使用，例如作为羟基磷灰石基材料，或者作为无定形磷酸钙，例如，在一些Recaldent基材料中。更近来已描述一种牙齿再矿化的替代方法，该方法基于合理设计的自组装短肽。WO2004/007532公开了能够形成三维骨架，从而促进新生磷酸钙成核的肽。这些人工肽在一维中组装成β-片层条状组装体。肽组装体可响应化学或物理触发剂从流体转变成向列相、较硬的凝胶态。肽设计成响应一定pH、离子强度和/或温度条件按以下分级次序形成组装体：条、带、原纤和纤维。Aggeli等(2003,J.Am.Chem.Soc.125,9619-9628)分析pH作为肽β-片层自组装的触发剂。在本领域已描述几种其它自组装肽。例如，WO2010/041636A1描述一种包含人工肽的生物可吸附肽组织闭塞剂，所述人工肽具有8-200个氨基酸残基，且亲水氨基酸和疏水氨基酸交替键合，其在生理pH自组装成β-结构。在WO2008/113030A2中也公开了与胞外基质相互作用的具有交替疏水和亲水残基或延伸的自组装肽。WO2010/103887A1公开了包含特定一级序列的碱性、疏水和酸性氨基酸的自组装肽，和其具有高强度的肽凝胶。另一个申请WO2007/000979A1描述具有极性氨基酸和非极性氨基酸的自组装肽。肽能够形成一种β-片层结构，其中非极性氨基酸残基以组装形式排列在该结构的一侧上。在US6,548,630中描述两亲性自组装肽，所述两亲性自组装肽用作用于生物材料应用的稳定宏观膜，例如慢扩散药物递送。EP2327428A2涉及一种用于修复损伤组织(例如，心肌梗塞后的组织)的药物组合物，其包含彼此互补的自组装肽纳米纤维和至少一种细胞。用自组装肽递送生物活性剂在现有技术也已描述，例如，描述于US2008/199431A1和WO2009/026729A1。WO2006/073889A2涉及一种组合物，其中人PDGF直接结合到肽，肽组装成缓慢体内释放PDGF的凝胶。WO2006/047315A2提出用生物素/链霉抗生物素连接使治疗剂连接到自组装肽。Kirkham等涉及促进牙釉质再矿化的自组装肽骨架(2007,Dent.Res.86(5),426-430)。可从上面看到，已描述若干自组装肽，其可在牙齿再矿化中用作模板或骨架，用于磷酸钙原位成核。然而，在牙齿再矿化中可能遇到的一个具体问题是，对于肽的组装形式，表层下损伤部位可能难以接近。一旦这些肽已形成条、带、原纤或纤维，组装体的大小就使得不再可能以达到显著效果必需的量在牙齿表面上在超矿化板中通过小孔扩散进入表层下损伤部位。因此，为了有效治疗表层下损伤，自组装肽需要以单体形式处于牙齿损伤外，以使得能够扩散进入表层下损伤部位，并且需要一旦在牙齿损伤部位内，就转变成原纤形式。如果肽在损伤部位外组装，就不能促进在损伤部位内再矿化，因为形成的三维结构太太，以致于不能扩散通过孔。现有技术已描述若干药物输送装置。例如，已公开用于直接施用药物的具有密封布置的流体输送装置(例如，WO2011/058545A1，WO2011/104711A1)。然而，这些药物输送装置均未消除在牙齿损伤部位外组装的问题。专利技术详述本专利技术提供一种用于使自组装肽靶向递送到牙齿损伤部位的方法，所述方法能够使所述肽以单体形式保持在损伤部位外，从而促进扩散进入表层下损伤部位。在表层下损伤部位内，肽转变成自组装原纤状态。也提供了用于使自组装肽靶向递送到牙齿损伤部位的组合物。具体地讲，在第一个方面，本专利技术提供用于制备适用于治疗牙齿损伤(例如，龋齿损伤)的组合物的方法，所述方法包括a)提供包含肽的溶液，所述肽在低于7.5的pH开始经历自组装，其中所述溶液具有高于肽开始经历自组装pH0.1至0.5个pH单位的pH；b)加入使溶液pH提高到8.0或更高的化合物，所述化合物具有足够挥发性，以在冻干期间去除；c)将溶液冻干；并且d)任选使冻干物溶于水溶液，以得到具有高于肽开始经历自组装pH0.1至0.5个pH单位的pH的溶液，所述溶液包含其单体状态的肽。本专利技术尤其基于以下认识：使用挥发性且在冻干期间蒸发的碱性化合物(例如，氨)帮助控制自组装肽的组装。具体地讲，通过在冻干期间碱性化合物蒸发使pH从碱性向更酸性条件转变，可提供一种冻干物，所述冻干物在重新悬浮于水时提供具有接近肽开始经历自组装pH的pH的主要单体肽的均匀溶液。在这种溶液施用于牙齿表面时，单体肽扩散进入要实现再矿化的牙齿损伤部位。在牙齿损伤部位，由于形成口腔微生物群落的乳酸菌连续产生乳酸，pH一般在5.0和6.5之间或更低。由于在本专利技术重构溶液中的缓冲剂在牙齿损伤部位变得稀释，单体肽的pH诱导组装在损伤部位内开始，从而形成多聚体组装体，多聚体组装体可作为骨架用于随后磷酸钙沉积。即使具有高于肽开始经历自组装pH的pH的新鲜肽溶液最初只包含低百分比的自组装多聚体，溶液储存和暴露于空气也可由于生成碳酸氢盐和随后溶液酸化而产生组装体。根据本专利技术的方法，通过使含肽溶液的pH提高到8.0或更高而实现肽的有效单体化。优选通过使溶液的pH提高到高于肽开始经历自组装pH至少0.5个单位的pH，实现肽的单体化。例如，使用在本文称为SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的肽时，在8.0或更高的pH实现单体化，因为这些肽的自组装在pH7.5开始。在此高pH，溶液中多于95%、优选多于96%、多于97%、多于98%、多于99%且最优选100%的肽不组装，即，为单体。在溶液冻干，随后在水或另一种具有中性或接近中性pH的含水介质中重构后，肽保持单体形式。以此方式，本专利技术允许单体肽靶向递送到牙齿损伤部位，随后所述肽在牙齿损伤部位内自组装，其中后一步骤在牙齿损伤部位由pH引发，而没有任何使用者(例如，牙医)干预。本专利技术的方法和组合物特别有利，因为避免了在牙齿损伤部位外由于肽自组装所致的显著量肽损失。同时，本专利技术的方法和组合物促成在损伤体(lesionbody)内的必需浓度，使得能够自组装。本专利技术的方法提供非常适用于治疗哺乳动物(更优选人)的牙齿损伤(例如，龋齿损伤)的组合物。另外，本专利技术的方法提供非常适用于牙腔矿化的组合物。具体地讲，本专利技术的方法和组合物可用于用互连肽网络填充牙齿损伤部位和/或牙腔，互连肽通过存在于例如唾液的钙和磷酸盐离子的沉积而促进损伤再矿化。本文所用龋齿“损伤”本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于制备适用于治疗牙齿损伤的组合物的方法，所述方法包括/na)提供包含肽的溶液，所述肽在低于7.5的pH开始经历自组装，所述肽包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2序列，其中所述溶液包含在冻干期间非挥发性的缓冲剂并且其提供高于肽开始经历自组装pH 0.1至0.5个pH单位的pH；/nb)加入使溶液pH提高到8.0或更高的化合物，所述化合物具有足够挥发性，以在冻干期间去除；/nc)将溶液冻干，其中冻干物适于在水中溶解，以得到具有高于肽开始经历自组装pH0.1至0.5个pH单位的pH并且具有小于0.15的离子强度的溶液，所述溶液包含主要以其单体状态的肽；并且/nd)任选使冻干物溶于水，以得到具有高于肽开始经历自组装pH 0.1至0.5个pH单位的pH并且具有小于0.15的离子强度的溶液，所述溶液包含主要以其单体状态的肽，/n其中在步骤c)前向溶液加入非还原糖。/n

【技术特征摘要】
20120815 EP 12180578.21.一种用于制备适用于治疗牙齿损伤的组合物的方法，所述方法包括
a)提供包含肽的溶液，所述肽在低于7.5的pH开始经历自组装，所述肽包含SEQIDNO:1或SEQIDNO:2序列，其中所述溶液包含在冻干期间非挥发性的缓冲剂并且其提供高于肽开始经历自组装pH0.1至0.5个pH单位的pH；
b)加入使溶液pH提高到8.0或更高的化合物，所述化合物具有足够挥发性，以在冻干期间去除；
c)将溶液冻干，其中冻干物适于在水中溶解，以得到具有高于肽开始经历自组装pH0.1至0.5个pH单位的pH并且具有小于0.15的离子强度的溶液，所述溶液包含主要以其单体状态的肽；并且
d)任选使冻干物溶于水，以得到具有高于肽开始经历自组装pH0.1至0.5个pH单位的pH并且具有小于0.15的离子强度的溶液，所述溶液包含主要以其单体状态的肽，
其中在步骤c)前向溶液加入非还原糖。


2.权利要求1的方法，其中使步骤b)中的所述pH提高到pH8-9，优选提高到pH8.5。


3.权利要求1的方法，其中所述非还原糖选自甘露糖醇、山梨糖醇、蔗糖和海藻糖。


4.权利要求1至3中任一项的方法，其中步骤b)中的所述化合物选自氨、2-氨基乙醇、4-甲基吗啉和吡啶。


5.权利要求1至3中任一项的方法，其中步骤b)中超过90%化合物在冻干后从溶液去除。


6.权利要求1至3...

【专利技术属性】
技术研发人员：M胡格，DA赖塞克，
申请(专利权)人：克里登蒂斯股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH