用自组装肽和无定形磷酸钙加速牙齿再矿化和骨再生制造技术

本发明专利技术涉及药用组织矿化领域，特别是用自组装肽进行牙齿再矿化和骨再生。在这些过程中使用自组装肽，如P11

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用自组装肽和无定形磷酸钙加速牙齿再矿化和骨再生
[0001]本专利技术涉及药用组织矿化领域，特别是用自组装肽进行牙齿再矿化和骨再生。在这些过程中使用自组装肽，如P11
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4，也称为寡肽
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104，会产生羟基磷灰石，羟基磷灰石也存在于天然牙釉质、牙本质和骨中。本专利技术人已经发现，通过添加无定形磷酸钙或钙和磷酸根离子，可以显著加速牙齿再矿化和骨再生，当将其混合在溶液中时，可以导致磷酸钙的立即沉淀，所述磷酸钙优选为无定形磷酸钙，即非结晶磷酸钙。然而，自组装肽的存在改变了沉淀的磷酸钙的结构，有利于诱导结晶，并协同加速形成结晶磷酸钙，特别是羟基磷灰石(HA)。因此，本专利技术提供了一种试剂盒，所述试剂盒包含自组装肽、独立组合物中适于立即形成磷酸钙沉淀物(例如无定形磷酸钙(ACP))的钙离子和磷酸根离子(如果在水的存在下混合)或优选包含至少50％ACP的磷酸钙颗粒悬浮液的磷酸钙颗粒。本专利技术还提供了所述试剂盒的医学用途，特别是在牙齿中，用于病变的再矿化、凹坑和裂隙的矿化、敏感牙齿的治疗、盖髓和骨再生。
[0002]蛀牙，又称龋齿，是世界上最常见的由产酸菌引起的疾病之一。它是由于细菌的代谢物，主要是细菌在分解牙齿表面或口腔生物膜中的食物碎片或糖类时产生的酸，导致牙齿材料的崩解。这导致脱矿质作用和再矿化过程之间的不平衡。牙釉质、牙本质和牙骨质等坚硬的牙齿结构被持续的脱矿质作用破坏，导致龋损的发生，最终形成牙洞。新发龋的最早标志是牙齿表面出现白垩色斑块，即所谓的白斑病(也特指早期龋损)，即亚表面病变。随着脱矿质作用的进展，病变的矿化表面(部分)塌陷和破裂，并在牙齿上出现微腔、空洞或洞。这被称为(部分)空洞性龋损或空洞。
[0003]牙齿病变，特别是龋齿病变的常见治疗方法是钻孔和填充牙齿。迄今为止，一旦龋损形成空洞，牙齿上出现洞，常用的治疗方法是有创性的。通常通过使用例如牙科手机(“钻头”)来去除腐烂的材料。可选地，可以使用激光、牙科勺或化学机械系统去除龋齿。
[0004]在去除(即挖掘)龋病的牙釉质和/或牙本质后，缺失的牙齿结构需要使用牙科修复材料，如封闭剂、汞合金、牙科复合材料、瓷或金。
[0005]然而，能够修复天然牙齿物质，而不失去宝贵的硬组织，然后用人体外来物质填充挖掘的病变是有利的，所述天然牙齿物质以羟基磷灰石为基础。例如，这种无缝再矿化可以减少继发龋的发生率，所述继发龋通常在填充边缘发生，或当填充失败时发生。
[0006]基于再矿化的无创方法已被建议用于治疗非空洞性龋损，即皮下病变。例如，经典的再矿化通过尝试局部应用氟化物来进行。
[0007]此外，牙釉质基质衍生物或自组装肽已被证明在亚表面龋损的再矿化中有效(Ruan等人，2013，ActaBiomater.9(7):7289
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97；Ruan等人,2014，JVis Exp.10(89),doi 10.379151606；Schmidlin等人,2016,J Appl Oral Sci.24(1),31
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36；Alkilzy等人,2018,Adv Dent Res.29(1),42
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47；Brunton等人,2013,Br Dent J,215:E6；Kind等人,2017,J Dent Res.,96(7),790
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797；Kirkham等人,2007,J Dent Res.,86,426
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430)。在WO 2014/027012A1中，描述了一种将自组装肽靶向递送到牙齿亚表面病变的方法，其目的是使龋损再矿化。
[0008]PCT/EP2020/069360描述了用自组装肽预防和治疗空洞性龋损。
[0009]在WO 2017/168183A1中，描述了一种基于弹性蛋白样肽的仿生矿化磷灰石结构，其用作牙齿修复材料，特别是用于牙釉质的重建，以及用于治疗诸如龋齿的牙科疾病。
[0010]此外，已经开发了用于牙釉质再矿化和预防和/或治疗龋病或牙齿侵蚀的基于酪蛋白的策略(例如WO 00/06108A1和WO 2010/042754A2)。WO 02/094204A1已描述了将酪蛋白
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磷酸肽
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无定形磷酸钙复合物(CPP
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ACP)和CPP稳定的无定形氟化钙
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磷酸复合物与玻璃离子粘固粉组合作为再矿化牙齿修复材料。
[0011]其他磷酸钙颗粒，例如，包括无定形磷酸钙，也已用于脱矿化牙釉质的再矿化(例如，Weir等人，2012,J Dent Res.91(10):979
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984；Meyer等人,2018.Open Dent J.12:406
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423)。
[0012]在WO 2017/123986A1、US 2014/0186273 A1和US 2017/0000737A1中，描述了将基于釉原蛋白(Amelogenin)的生物矿化方法在牙本质超敏反应、牙齿美白或漂白以及龋病治疗的背景下用于牙齿修复。
[0013]在嵌合肽的引导下，还尝试用羧甲基壳聚糖/无定形磷酸钙颗粒(CMC/ACP)的纳米颗粒对脱矿化的牙釉质表面进行再矿化。为此所需的所述嵌合肽很长，并且包括两个功能结构域，包括可以将ACP转化为羟基磷灰石的釉原蛋白肽和一种已被发现与羟基磷灰石表面特异性结合的肽。形成了釉质样结构，其中CMC/ACP纳米颗粒被NaClO降解，并被嵌合肽引导成有序和定向的阵列(Xiao等人，2017，Dent.Mater.33(11):1217
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1228)。
[0014]如WO 2004/007532A2所述，自组装肽已被证明成功用于亚表面病变的再矿化(例如，Kirkham等人，2007)，但问题仍然是再矿化不是很快，需要几周到几个月的时间才能在x线相片上或通过白斑病的外观变化可见(Brunton2013，Schlee 2017)。由于这个原因，仅自组装肽也不适合治疗龋齿病变，因为即使以组装的形式，即作为水凝胶，它们也可能在水凝胶变得足够再矿化和稳定之前被从空洞中去除。
[0015]自组装肽也已被教导可用于骨再生(例如，WO 2004/007532A2)，具有相同的矿化缓慢且在所述过程中缺乏体积稳定性的潜在临床缺点。
[0016]因此，根据现有技术，本专利技术人克服了这些问题中的至少一些问题，有利地，提供了用于牙齿病变和缺损的快速矿化和/或骨再生的组合物和制备方法。这个问题通过本文公开的本专利技术，特别是在权利要求的内容得以解决。
[0017]在一个实施方案中，本专利技术提供了一种试剂盒，包括
[0018]a)自组装肽，所述自组装肽包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或与其具有至少70％一致性、优选地至少80％一致性的氨基酸序列，以及
[0019]b)(i)独立组合物中的钙离子和磷酸根离子，所述钙离子和磷酸根离子若在水的存在下混合适于立即形成优选为无定形磷酸钙(ACP)的磷酸钙沉淀物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种试剂盒，包括，a)自组装肽，所述自组装肽包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或与其具有至少70％一致性的氨基酸序列，以及b)(i)独立组合物中的钙离子和磷酸根离子，所述钙离子和磷酸根离子如果在水的存在下混合，适于立即形成磷酸钙沉淀物，其中所述组合物优选为溶液，或(ii)磷酸钙颗粒，优选为包含至少50％ACP的磷酸钙颗粒悬浮液。2.根据权利要求1所述的试剂盒，用于在需要的受试者至少一个区域诱导牙齿再矿化或骨再生。3.根据前述权利要求中任一项所述试剂盒，包括(b)独立组合物中的钙和磷酸盐离子，所述钙离子和磷酸根离子如果在水的存在下混合，适于立即形成磷酸钙沉淀物ACP，其中所述组合物优选为溶液。4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述溶液包括浓度为0.01
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0.5M的Ca
2+
离子，例如0.1
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0.15M的Ca
2+
离子，其中所述溶液优选包括CaCl2。5.根据权利要求3或4中任一项所述的试剂盒，其中所述溶液包括浓度为诸如0.1
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0.15M的0.01
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0.5M的磷酸盐离子，其中所述溶液优选包括Na2HPO4。6.根据权利要求3
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5中任一项所述的试剂盒，其中所述自组装肽是包含钙离子的组合物的一部分，其中所述组合物优选为溶液。7.根据权利要求3
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5中任一项所述的试剂盒，其中所述自组装肽是包含磷酸盐离子的组合物的一部分，其中所述组合物优选为溶液。8.根据前述权利要求中任一项所述的试剂盒，还包括氟离子。9.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书二页说明书二一页序列表四页附图六页，
申请(专利权)人：克里登蒂斯股份公司，
类型：发明
国别省市：