用于评估阿尔茨海默症的生物标记组合及其应用和试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种用于评估受试者阿尔茨海默症的生物标记组合，包含该生物标记组合检测试剂的诊断产品及其应用。所述生物标记组合包括磷脂酰胆碱类物质、肉碱类物质和神经递质类物质，用于阿尔茨海默症的评估和诊断。用于阿尔茨海默症的评估和诊断。用于阿尔茨海默症的评估和诊断。

【技术实现步骤摘要】
用于评估阿尔茨海默症的生物标记组合及其应用和试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物标记及其利用该标记的试剂盒和检测方法领域，具体为用于评估阿尔茨海默症的生物标记组合及其应用和试剂盒。

技术介绍

[0002]现有临床诊断阿尔茨海默病(AD)采用的标志物主要包括脑脊液中β淀粉样蛋白(Aβ)、总tau蛋白(T
‑
tau)、磷酸化tau蛋白(P
‑
tau)；结构MRI和功能MRI影像学检测；Aβ的PET显像(使用
11
C
‑
PIB和
18
F
‑
FDDNP作为示踪剂)影像学检测；家族性阿尔茨海默症(FAD)中位于14、1、21号染色体上的早老素1(presenilin 1,PS1)基因、早老素2(presenilin 2,PS2)基因、淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)基因的致病基因检测。但是这些方法的敏感性和特异性较差、对患者而言损伤较大、耗时长、价格昂贵。
[0003]目前AD的体液检测标志物主要集中在脑脊液中Aβ和tau蛋白的水平，但是这些标志物在鉴别正常人和AD患者或MCI(轻度认知障碍)患者转化为AD患者中效果较好，而在无症状正常人中的预测价值较小。与脑脊液检测相比，血液检测损伤小，不易造成老年病人的并发症。但是研究发现，血液中Aβ42或Aβ42/tau在血液中的水平与AD临床症状关联性很差，结果令人失望。
[0004]现有技术中，尚没有用于诊断AD的血液标志物，更没有利用血液标志物检测AD的检测试剂盒。因此，在目前的科研和实践中，需要在血液中找出特异性和敏感性强的生物标记物或组合物，并研发出相应的检测试剂盒和检测方法。

技术实现思路

[0005]针对上述技术问题，本专利技术提供了用于评估阿尔茨海默病(AD)的生物标记组合，包括磷脂酰胆碱类物质、肉碱类物质和神经递质类物质。通过检测受试者血液里面多种磷脂酰胆碱类物质、肉碱类物质和神经递质类物质的浓度，可进行阿尔茨海默病(AD)的辅助检查。
[0006]本专利技术还提供了用于评估阿尔茨海默病(AD)的生物标记组合在制备评估和诊断阿尔茨海默病(AD)的诊断产品方面的应用。诊断产品可以为诊断试剂、试剂盒或者诊断装置等多种形式。
[0007]本专利技术进一步提供了包含用于评估阿尔茨海默病(AD)的生物标记组合的试剂盒及利用该试剂盒进行检测方面的应用。
[0008]用于评估阿尔茨海默病(AD)的上述生物标记组合在筛选预防或治疗阿尔茨海默症药物中的用途。
[0009]根据本专利技术的第一方面，用于评估阿尔茨海默病(AD)的生物标记组合，包括磷脂酰胆碱类物质。磷脂酰胆碱类物质选自溶血磷脂酰胆碱C18:2(Lyso PC a C18:2)、二酰基磷脂酰胆碱C 36:6(PC aa C 36:6)、二酰基磷脂酰胆碱C 38:0(PC aa C 38:0)、二酰基磷脂酰胆碱C 38:6(PC aa C 38:6)、二酰基磷脂酰胆碱C40:1(PC aa C40:1)、二酰基磷脂酰
胆碱C40:2(PC aa C40:2)、二酰基磷脂酰胆碱C40:6(PC aa C40:6)、酰基
‑
烷基磷脂酰胆碱C40:6(PC ae C40:6)中的一种或多种。
[0010]用于评估阿尔茨海默病(AD)的生物标记组合还包括肉碱类物质。肉碱类物质选自丙酰肉碱(Propionyl AC或C
‑
3)。
[0011]用于评估阿尔茨海默病(AD)的生物标记组合还包括神经递质类物质，可以选自乙酰胆碱、5
‑
羟色胺、γ
‑
氨基酸丁酸、谷氨酸中一种或多种。
[0012]本专利技术发现，这些磷脂酰胆碱、肉碱和神经递质类物质在阿尔茨海默病(AD)患者的血液中浓度低于正常人，通过检测这些物质可以有效识别诊断阿尔茨海默病(AD)病人和正常人，有很好的灵敏度和特异性。基于此，形成了本专利技术的技术方案。
[0013]在一个具体实施方式中，本专利技术的生物标记组合包括丙酰肉碱、Lyso PC a C18:2、PC aa C
‑
36:6、PC aa C
‑
38:0、PC aa C
‑
38:6、PC aa C40:1、PC aa C40:2、PC aa C40:6、PC ae C40:6、乙酰胆碱、5
‑
羟色胺、γ
‑
氨基酸丁酸和谷氨酸。
[0014]本专利技术的生物标记组合可以诊断产品的形式被制造和应用。具体地，诊断产品是诊断试剂、试剂盒或诊断装置。优选地，本专利技术的诊断产品以试剂盒的形式被制造和应用。试剂盒包括前述用于评估阿尔茨海默病(AD)的生物标记组合标准品和用于检测受试样品中前述生物标记组合含量的试剂。
[0015]受试样品来源于受试者血液，可以是血液、血清或血浆，优选血浆。
[0016]在一个具体的实施方式中，用于检测受试样品中生物标记组合含量的试剂包括样品萃取液和液相色谱流动相溶剂包。所述样品萃取液选自有机溶剂，如甲醇、乙腈、氯仿中的一种或多种。在一个具体的实施方式中，所述样品萃取液按照体积百分比包括：80
‑
95％的甲醇和5
‑
20％的乙腈。
[0017]在一个优选的实施方式中，试剂盒还包括液相色谱流动相溶剂包。优选地，所述液相色谱流动相溶剂包按照体积百分比包括：流动相A：乙腈；和流动相B：含5
‑
20mM醋酸铵和0.05
‑
0.15vol％甲酸的水。
[0018]在一个具体的实施方式中，用于评估阿尔茨海默病(AD)的试剂盒包括生物标记组合标准品。优选地，所述标准品以内标品的形式存在。内标品包括磷脂酰胆碱内标品或/和肉碱内标品或/和神经递质内标品。每种内标品可以单独存在，也可以混合溶液形式存在，如磷脂酰胆碱内标品、肉碱内标品和神经递质内标品的混合溶液。在一个优选的实施方式中，内标品为磷脂酰胆碱内标品、肉碱内标品和神经递质内标品的混合溶液。在进一步优选的实施方式中，内标品的混合溶液中所述磷脂酰胆碱内标品的浓度为400
‑
800ng/ml，优选为600ng/ml；所述肉碱内标品的浓度为10
‑
30ng/ml，优选为20ng/ml；所述神经递质内标品浓度为40
‑
60μg/mL，优选为50μg/mL。优选地，所述磷脂酰胆碱内标品为d4
‑
PC
‑
14；所述肉碱内标品为2H3‑
C
‑
3；所述神经递质内标品为3,4
‑
二羟基苄胺Dihydroxy benzyl amine(DHBA)。
[0019]在一个具体实施方式中，本专利技术的试剂盒还包括校准品，该校准品用来制作标准曲线。生物标记组合中的成分，如磷脂酰胆碱类物质、肉碱类物质和神经递质类本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于评估受试者阿尔茨海默症的生物标记组合，其特征在于：包括磷脂酰胆碱类物质、肉碱类物质和神经递质类物质，优选地，所述磷脂酰胆碱类物质选自Lyso PCa C18:2、PC aa C 36:6、PC aa C 38:0、PC aa C 38:6、PC aa C40:1、PC aa C40:2、PC aa C40:6、PC ae C40:6中的一种或多种；肉碱类物质为丙酰肉碱；神经递质类物质选自乙酰胆碱、5
‑
羟色胺、γ
‑
氨基酸丁酸、谷氨酸中一种或多种。2.如权利要求1所述的生物标记组合，其特征在于：包括丙酰肉碱、Lyso PCa C18:2、PC aa C 36:6、PC aa C 38:0、PC aa C 38:6、PC aa C40:1、PC aa C40:2、PC aa C40:6、PC ae C40:6、乙酰胆碱、5
‑
羟色胺、γ
‑
氨基酸丁酸和谷氨酸。3.权利要求1至2任一项所述的生物标记组合在制备评估或诊断阿尔茨海默症的诊断产品中的用途，或者权利要求1至2任一项所述的生物标记组合在筛选预防或治疗阿尔茨海默症药物中的用途；优选地，该诊断产品是诊断试剂、试剂盒或诊断装置。4.一种用于评估阿尔茨海默症的试剂盒，其特征在于：包括权利要求1或2任一项所述的生物标记组合标准品和用于检测受试样品中权利要求1
‑
2任意一项所述生物标记组合含量的试剂。5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述用于检测受试样品中权利要求1
‑
2任意一项所述生物标记含量的试剂包括：样品萃取液和液相色谱流动相溶剂包；所述样品萃取液选自甲醇、乙腈、氯仿有机溶剂中的一种或多种；优选地，所述样品萃取液，按照体积百分比包括：80
‑
95％的甲醇，和5
‑
20％的乙腈；优选地，所述液相色谱流动相溶剂包，按照体积百分比包括：流动相A：乙腈；和流动相B：含5
‑
20mM醋酸铵和0.05
‑
0.15vol％甲酸的水；优选地，所述受试样品为来自受试者的血液、血清或血浆。6.如权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于，所述生物标记组合标准品包括：磷脂酰胆碱内标品或/和肉碱内标品或/和神经递质内标品；优选所述内标品为磷脂酰胆碱内标品、肉碱内标品和神经递质内标品的混合溶液；优选地，所述磷脂酰胆碱内标品为d4
‑
PC
‑
14；所述肉碱内标品为2H3‑
C
‑
3；所述神经递质内标品为3,4
‑
二羟基苄胺；更优选地，所述内标品的混合溶液中，所述磷脂酰胆碱内标品的浓度为400
‑
800ng/ml，优选为600ng/ml；所述肉碱内标品的浓度为10
‑
30ng/ml，优选为20ng/ml；所述神经递质内标品浓度为40
‑
60μg/mL，优选为50μg/mL。7.如权利要求4
‑
6任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括：校准品，用来制作标准曲线，包括磷脂酰胆碱校准品、肉碱校准品和神经递质校准品；优选地，所述磷脂酰胆碱校准品为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱，所述肉碱校准品为丙酰左旋肉碱盐酸盐，所述神经递质校准品为乙酰胆碱、5
‑
羟色胺、γ
‑
氨基酸丁酸、谷氨酸；更优选地，所述校准品为磷脂酰胆碱校准品、肉碱校准品和神经递质校准品的混合溶液，其中，所述二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的浓度为20
‑
40μg/mL；所述丙酰左旋肉碱盐酸盐的浓度为6
‑
10μg/mL；所述乙酰胆碱和γ
‑
氨基酸丁酸的浓度分别为2
‑
3μg/mL；所述5
‑
羟色胺和
谷氨酸的浓度分别为10
‑
15μg/mL。8.如权利要求4
‑
7任一项所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括质控品，所述质控品包括二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、丙酰左旋肉碱盐酸盐、乙酰胆碱、5
‑
羟色胺和γ
‑
氨基酸丁酸和谷氨酸；更优选地，所述质控品为二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、丙酰左旋肉碱盐酸盐、乙酰胆碱、5
‑
羟色胺和γ
‑
氨基酸丁酸和谷氨酸的混合溶液；进一步优选地，所述质控品包括低浓度质控品和高浓度质控品；其中，所述低浓度质控品中，二肉豆蔻酰磷脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖冰心，孙念，栗琳，贾子强，邵立军，高雅，何启鑫，丁亮，周立，
申请(专利权)人：北京豪思生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：